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Imágenes simultáneas en vivo de múltiples embriones de insectos en microscopios de fluorescencia ...
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JoVE Journal Biology
Simultaneous Live Imaging of Multiple Insect Embryos in Sample Chamber-Based Light Sheet Fluorescence Microscopes

Imágenes simultáneas en vivo de múltiples embriones de insectos en microscopios de fluorescencia de hoja de luz basados en cámaras de muestra

Full Text
0 Views
08:29 min
September 9, 2020

DOI: 10.3791/61713-v

Julia Ratke*1, Franziska Krämer*1, Frederic Strobl1

1Physical Biology/Physikalische Biologie (IZN, FB15), Buchmann Institute for Molecular Life Sciences (BMLS), Cluster of Excellence Frankfurt, Macromolecular Complexes (CEF - MC),Goethe-Universität

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a protocol for simultaneous live imaging of multiple specimens using light sheet-based fluorescence microscopy, addressing issues of ambient variance in developmental biology. By utilizing a cobweb holder for stacking embryos, the method enhances the efficacy of imaging while minimizing inconsistencies.

Key Study Components

Research Area

  • Developmental biology
  • Fluorescence microscopy
  • Live imaging techniques

Background

  • The importance of minimizing ambient variance in comparative studies.
  • Challenges associated with sequential live imaging assays.
  • Need for innovative methods that improve throughput and accuracy in imaging.

Methods Used

  • Use of cobweb holder for simultaneous embryo imaging
  • Embryo mounting and dechorionation protocols
  • Live imaging calibration using agarose and fluorescent microspheres

Main Results

  • Successful simultaneous imaging of multiple embryos.
  • Reduced ambient variance leading to clearer imaging results.
  • Instructional video to guide correct mounting and imaging steps.

Conclusions

  • This study demonstrates a new protocol that significantly improves the live imaging process in developmental biology.
  • The relevance of the findings may enhance future research methodologies and outcomes in comparative studies.

Frequently Asked Questions

What is the significance of reducing ambient variance in imaging?
Reducing ambient variance enhances the accuracy and consistency of imaging results in developmental biology studies.
How does the cobweb holder improve throughput?
The cobweb holder allows for stacking multiple embryos, enabling simultaneous imaging rather than sequential, which increases efficiency.
What preparation steps are required for embryo dechorionation?
Embryos are washed using autoclaved tap water and sodium hypochlorite solution to remove chorions before imaging.
Is there a video tutorial associated with the protocol?
Yes, an instructional video is provided to illustrate the key procedures and tips for successful embryo mounting and imaging.
What organism is primarily used in this study?
The study primarily uses embryos from transgenic Drosophila lines for live imaging assays.
What technologies are employed in the imaging process?
Light sheet fluorescence microscopy and agarose embedding techniques are employed in the imaging process.
How does imaging contribute to developmental biology research?
Imaging allows researchers to observe and analyze developmental processes in real-time, providing insights into genetic and cellular mechanisms.

La microscopía de fluorescencia basada en láminas de luz es la herramienta más valiosa en biología del desarrollo. Un problema importante en los estudios comparativos es la varianza ambiental. Nuestro protocolo describe un marco experimental para la proyección de imagen viva simultánea de especímenes múltiples y, por lo tanto, trata este problema favorablemente activamente.

Los microscopios de fluorescencia de hoja de luz basados en cámara de muestra están diseñados para un alto contenido en lugar de un alto rendimiento. Por lo tanto, los ensayos de imagen en vivo deben realizarse secuencialmente y, por lo tanto, deben verse menos afectados por la variación ambiental. Nuestro soporte de telaraña permite el apilamiento y la obtención simultánea de imágenes de múltiples embriones, eliminando la variación ambiental y aumentando el rendimiento.

El montaje de embriones en el soporte de telarañas requiere cierta delicadeza. Un vídeo explicativo es ideal para ilustrar la secuencia de los numerosos gestos cortos de conducta. Para la calibración del microscopio de fluorescencia basado en cámara de muestras de lámina de luz.

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Biología Número 163 imágenes en vivo comparativas imágenes en vivo simultáneas microscopía de luz tridimensional microscopía de fluorescencia basada en láminas de luz LSFM soporte de telaraña desarrollo de insectos morfogénesis embrionaria embriogénesis Drosophila melanogaster Tribolium castaneum varianza ambiental

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