Name: Ensayos de inmunofluorescencia multiplex automatizados de alto rendimiento para la investigación traslacional (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: Aprende ensayos de inmunofluorescencia multiplex automatizados de alto rendimiento para investigación traslacional usando tejidos FFPE. Este protocolo reduce el tiempo de procesamiento y mejora la reproducibilidad en estudios de proteómica espacial.

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<ol><li>McGinnis, L. M., Ibarra-Lopez, V., Rost, S., Ziai, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+research+applications+of+multiplexed+immunohistochemistry+and+in+situ+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Clinical and research applications of multiplexed immunohistochemistry and in situ hybridization.</a> J Pathol. 254 (4), 405-417 (2021).</li>
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La inmunofluorescencia altamente multiplexada (mIF) es una técnica avanzada que está revolucionando el campo del análisis de tejidos al permitir la visualización simultánea de múltiples biomarcadores de proteínas dentro de una sola sección de tejido 1,2. Esta capacidad proporciona un nivel de detalle y resolución espacial sin precedentes, que a menudo es crucial para comprender las interacciones entre tipos de células con morfologías complejas dentro del microambiente tisular a través de múltiples escalas espaciales3. La técnica es particularmente valiosa en la investigación oncológica, donde se puede utilizar para colocalizar biomarcadores tumorales, dianas proteicas de fármacos, el estado inmunitario local y de puntos de control, las interacciones entre diferentes tipos de células e incluso los patrones de colocalización subcelular relacionados con el metabolismo de fármacos dentro del tejido 4,5,6.
A pesar de su potencial, la mayoría de las tecnologías mIF aún enfrentan desafíos significativos, particularmente en el equilibrio de la sensibilidad y el rendimiento con las capacidades de multiplexación. Esta limitación es especialmente crítica para la detección de biomarcadores clínicos que pueden mostrar una expresión muy baja, como HER2 y PD-L1 7,8,9. Para ver por qué esto es así, es esencial entender otras modalidades de mIF. Estos métodos tradicionales han allanado el camino para plataformas mIF más sofisticadas, pero vienen con sus propios conjuntos de ventajas y limitaciones.
La inmunofluorescencia directa (DIF) utiliza anticuerpos directamente conjugados con fluoróforos, o con un oligonucleótido capaz de reclutar fluoróforos10. Este método es sencillo de multiplexar, pero sufre de una menor sensibilidad y dificultad para resolver la señal del fondo del tejido o los artefactos de tinción.
La inmunofluorescencia indirecta (FII) utiliza un anticuerpo secundario que se une al anticuerpo primario. Esto ha aumentado la señal en comparación con el DIF primario. Cuando se combina con diseños mejorados de celdas de flujo, el IIF secuencial puede detectar hasta 40 biomarcadores en un ensayo 2,11. Sin embargo, estos todavía sufren de una relativa falta de sensibilidad en comparación con las estrategias basadas en enzimas para la amplificación de señales, como las que se encuentran en las técnicas de inmunohistoquímica (IHQ).
La inmunofluorescencia basada en catálisis enzimática se observa con mayor frecuencia en los métodos de IHQ que utilizan peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición cromogénica (DAB) o de colorante fluorescente (p. ej., amplificación de señal de tiramida (TSA)). Dado que estos ensayos se basan en la misma enzima catalítica, su sensibilidad de detección es similar, lo que hace que los ensayos multiespectrales de mIF basados en TSA sean adecuados para aplicaciones clínicas 2,12. La ventaja de la amplificación de señales basada en ADN es el alto grado de multiplexación posible, al tiempo que se conserva una excelente amplificación y modularidad de la señal. Por el contrario, los métodos basados en HRP son menos modulares y difíciles de optimizar, lo que requiere ciclos adicionales de desarrollo y prueba de paneles.
Inmunofluorescencia de anticuerpos con código de barras de ADN El ensayo mIF demostrado aquí utiliza una ADN polimerasa para amplificar simultáneamente anticuerpos con código de barras de ADN, seguido de ciclos de tinción y decoloración de la sonda reportera utilizando cuatro oligonucleótidos fluorescentes por ronda de imágenes (Figura 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67584/67584fig01.jpg"> 
Figura 1: Ilustración gráfica del protocolo de ensayo de inmunofluorescencia multiplex. Los anticuerpos conjugados con código de barras se agregan en un solo paso y los códigos de barras se amplifican simultáneamente. En cada ciclo se añaden grupos de cuatro sondas fluorescentes, lo que permite visualizar cuatro marcadores a la vez. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67584/67584fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Esta adición de anticuerpos de una sola ronda y la amplificación de un solo paso simplifican enormemente el protocolo de ensayo. El proceso se ve facilitado por los sistemas automatizados de tinción y escaneo de alto rendimiento, que garantizan resultados reproducibles de portaobjetos y de lote a lote en un gran número de muestras utilizadas en estudios clínicos13.
Una de las principales ventajas de esta tecnología es su capacidad para mantener una alta sensibilidad al tiempo que permite una amplia multiplexación2. El flujo de trabajo también garantiza que el rendimiento de las imágenes siga siendo alto, abordando así una de las principales limitaciones de las tecnologías mIF altamente multiplexadas (por ejemplo, &gt; 8 biomarcadores) para estudios clínicos. Esto es particularmente importante en la investigación clínica, donde las variaciones sutiles en los objetivos de los fármacos de baja abundancia (por ejemplo, HER2 bajo) entre los pacientes pueden proporcionar información crítica sobre la respuesta terapéutica.
Además de estos atributos clave, este ensayo también ofrece la capacidad de configuración del panel, las capacidades de obtención de imágenes de portaobjetos completos de alto rendimiento y la resolución óptica necesaria para investigar los procesos y compartimentos subcelulares, así como las protuberancias celulares asociadas con macrófagos y células dendríticas. La capacidad de investigar fenotipos celulares complejos a través de múltiples escalas espaciales es una ventaja crítica de las imágenes ópticas en comparación con los métodos basados en la citometría de masas (IMC)2.
En este trabajo, se presenta un protocolo para un ensayo de mIF de 8 plex utilizando un autostainer y un escáner de portaobjetos completos. Este ensayo incluye un panel de ocho anticuerpos primarios: CD3, CD4, CD8, CD68, FOXP3, PD-1, PD-L1 y pan-citoqueratina14. Este panel de marcadores permitirá el inmunoperfil del tejido tumoral y la identificación de las células que se encuentran en el entorno del tumor o del estroma. Este protocolo utiliza un tintor de portaobjetos automatizado para la tinción inicial y las rondas de intercambio de sondas, y la tinción y la obtención de imágenes se pueden completar en 2 días. También se muestran los métodos para validar un ensayo de mIF y realizar análisis de las imágenes resultantes.

<table><tbody><tr><td>Anti-CD3</td><td>Ultivue</td><td></td><td>Clon BC33 (BioCare). Parte de ULT50801</td></tr><tr>clon<td>anti-CD4</td><td>Ultivue</td><td></td><td>SP35 (Abcam). Parte de ULT50801</td></tr><tr>clon <td>final</td><td></td><td>anti-CD68</td><td>KP1 (BioCare). Parte de ULT50801</td></tr><tr>clon<td>anti-CD8</td><td>Ultivue</td><td></td><td>C8/144B (BioCare). Parte de ULT50801</td></tr><tr>clones<td>de Anti-Cytokeratin + Anti-SOX10</td><td>Ultivue</td><td></td><td>AE1 / AE3 (Bethyl Labs) y BC34 (BioCare). Parte de ULT50801, suministrado como mezcla</td></tr><tr><td>Anti-FOXP3</td><td>Ultivue</td><td></td><td>Clone 236A/E7 (Thermo). Parte de ULT50801</td></tr><tr>clon<td>anti-PD1</td><td>Ultivue</td><td></td><td>CAL20 (Abcam). Parte de ULT50801</td></tr><tr>clon <td>Ultivue</td><td></td><td>Anti-PDL1</td><td>73-10 (Abcam). Parte de ULT50801</td></tr><tr><td>microscopio Axioscan.Z1</td><td>Zeiss</td><td></td><td>llamado microscopio de fluorescencia en texto</td></tr><tr><td>Solución de desparafinado de Bond</td> Solución de recuperación de epítopos <td>de Bond Leica</td><td>AR9222</td><td></td></tr> 2 Contenedores abiertos <tr><td></td><td>de enlace Leica</td><td>AR9640</td><td></td></tr>, <tr><td>30 ml</td> de kit <td>de detección de</td><td></td> investigación de OP309700 <td></td></tr><tr><td>de Leica</td><td>Leica</td><td>DS9455</td><td></td></tr><tr><td>Insertos de valoración Bond</td><td>Kit de valoración Leica</td><td>OPT9049</td><td></td></tr><tr><td>Bond</td><td>Leica</td><td>OPT9719</td><td></td></tr><tr><td>Bond Universal Covertiles</td><td>Leica</td><td>S21.4611</td><td></td></tr><tr><td>Bond Wash Solution 10x Concentrate</td><td>Leica</td><td>AR9590</td><td></td></tr><tr><td>BondRX Autostainer</td><td>Leica</td><td></td><td>llamado "autostainer" en texto</td></tr><tr><td>Software</td> <td>BondRXLeica</td><td></td><td>versión 6.0 o posterior</td></tr><tr><td>Coverslips, espesor #1.5</td><td>Corning</td><td>2980-244</td><td></td></tr><tr><td>Etanol, 200 pruebas</td><td>VWR</td><td>89370-084</td><td></td></tr><tr><td>Bloques de tejido FFPE Los tipos</td> de tejido <td>BioIVT</td><td></td><td>varían Ensayo</td></tr><tr><td>OmniVUE 8-plex (CD3, CD4, CD8, CD68, FOXP3, PD-1, PD-L1, pan-Cytokeratin/SOX10)</td><td>Ultivue</td><td>ULT50801</td><td>contiene todos los demás componentes de Ultivue</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Boston BioProducts</td><td>C-9911F</td><td>(pH 7,4 con 2,7 mM de KCl y 137 mM de NaCl)</td></tr><tr><td>ProLong Gold Antifade Mountant</td><td>Thermo</td><td>P10144</td><td>llamado "medio de montaje" en</td></tr><tr><td>el</td> texto <td>UltiAnalyzer.AI Ultivue</td><td></td><td></td></tr><tr><td>UltiStacker.AI</td><td>Ultivue</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ultivue Amplification Buffer</td><td>Ultivue</td><td></td><td>parte de ULT50801</td></tr><tr><td>Ultivue Antibody Diluent</td><td>Ultivue</td><td></td><td>parte de ULT50801</td></tr><tr><td>Ultivue Exchange Buffer</td><td>Ultivue</td><td></td><td>parte de ULT50801</td></tr><tr><td>Ultivue Exchange Initiator</td><td>Ultivue</td><td></td><td>parte de ULT50801</td></tr><tr><td>Ultivue Exchange Neutralizer</td><td>Ultivue</td><td></td><td>parte de ULT50801</td></tr><tr><td>Ultivue Fluorescent Probes 1</td><td>Ultivue</td><td></td><td>parte de ULT50801</td></tr><tr><td>Sondas fluorescentes Ultivue 2</td><td>Ultivue</td><td></td><td>parte de ULT50801</td></tr><tr><td>mezcla de preamplificación Ultivue</td><td></td><td></td><td>parte de ULT50801</td></tr><tr><td>tampón de sonda</td><td>Ultivue</td><td></td><td>parte de ULT50801</td></tr><tr><td>agua ultrapura</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W4502</td><td></td></tr></tbody></table>

ensayos de inmunofluorescencia multiplex automatizados de alto rendimiento para la investigación traslacional

High-Throughput Automated Multiplex Immunofluorescence Assays for Translational Research

Siguiendo el protocolo anterior, el tejido FFPE se teñirá con múltiples dianas y se han obtenido imágenes de alta calidad de todos los marcadores en grupos de cuatro (Figura 3A,B). El software de corregistro de imágenes permitirá que las imágenes de la misma diapositiva se combinen y se registren conjuntamente, como se ve en la Figura 3C. En la Figura 4 se muestran resultados similares para un portaobjetos de tejido de cáncer colorrectal (CCR).
El éxito del protocolo debe determinarse evaluando el patrón de tinción esperado. En el ejemplo de CCR mostrado, cada uno de los objetivos teñidos se expresa en el compartimento subcelular esperado, por ejemplo, FoxP3 nuclear, CD3 membranoso, CD68 citoplasmático (Figura 4B-D). Cada una de las dianas funcionales se expresa en el tipo de célula apropiado, como lo demuestra el ejemplo de la colocalización de PD1 y CD3 o de PDL-1 y CD68, que muestran células T agotadas y macrófagos inmunosupresores, respectivamente. La evaluación de una buena relación señal-fondo, que permite distinguir con éxito la señal positiva verdadera del ruido de fondo potencial, suele ser realizada cualitativamente por patólogos o expertos en análisis de imágenes que confirman la calidad de la tinción, lo que permite un análisis de imágenes exitoso. Para confirmar aún más la calidad y el rendimiento de la tinción, se puede agregar la comparación con el IHQ (DAB cromogénico) estándar de oro en secciones seriadas (ver ejemplo en la Figura 5), así como una muestra de tejido de control positiva, como la amígdala humana, que para la mayoría de los objetivos inmunológicos puede ser útil para confirmar el éxito de la tirada. Tenga en cuenta que los cánceres pueden mostrar una menor expresión de objetivos que la amígdala humana16.
Una vez que los resultados se confirman cualitativamente, se puede llevar a cabo un análisis cuantitativo. En este trabajo, esto consiste principalmente en calcular la densidad celular de diferentes fenotipos (número de células/mm2) que expresan un determinado objetivo o objetivos, así como calcular los niveles de intensidad promedio de los objetivos funcionales que pueden mostrar un amplio rango dinámico de expresión. Al evaluar la precisión de los ensayos de mIF, las secciones seriadas teñidas con los mismos marcadores deben mostrar señales comparables entre portaobjetos, lo que se puede ver cualitativamente en la Figura 6. En la Figura 7 se muestran ejemplos de resultados cuantitativos de densidades de marcadores individuales en diferentes tipos de tejidos. El análisis de imágenes en estas imágenes permite identificar las células positivas, y se puede calcular la densidad de células positivas correspondiente para cada marcador, así como la intensidad media de la señal por célula positiva. Esto permite calcular un coeficiente de variabilidad (CV) para cada marcador con el fin de evaluar la precisión del ensayo de multiplexación (Tabla 4).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67584/67584fig03.jpg"> 
Figura 3: Imágenes de un núcleo de microarray tisular (TMA) obtenido a partir de sucesivas rondas de tinción en el protocolo de inmunofluorescencia 8-plex. (A) Imagen obtenida de la primera ronda de imágenes, con los marcadores CD8, PD1, PD-L1 y CD68. Después del protocolo de intercambio, (B) muestra la segunda ronda de imágenes en la misma diapositiva para la segunda ronda de marcadores CD3, CD4, FoxP3 y CK/SOX10, y (C) muestra una imagen registrada conjuntamente que combina las imágenes (A) y (B). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67584/67584fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67584/67584fig04.jpg"> 
Figura 4: Tinción representativa de tejido de cáncer colorrectal (CCR) con tinción de inmunofluorescencia de 8 plex. La figura muestra fenotipos celulares que se pueden identificar mediante la colocalización de múltiples objetivos en la misma célula. (arriba) Imagen de portaobjetos completos del tejido del CCR. (abajo) Vistas detalladas de regiones de tejido destacando (A) células T-reg (CD3+/CD4+/FOXP3+), (B) células que expresan PD-1 y PD-L1 dentro del tumor y el estroma, (C) células T citotóxicas agotadas (CD3+/CD8+/PD-1), (D) células tumorales evasivas inmunitarias (PD-L1+/CK+) y macrófagos inmunosupresores (CD68+/PDL1+). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67584/67584fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67584/67584fig05.jpg"> 
Figura 5: Comparación cualitativa de la inmunohistoquímica (IHQ) con la tinción con inmunofluorescencia (IF). Secciones seriadas teñidas con tinción inmunohistoquímica de marcador único (DAB, fila superior), inmunofluorescencia de marcador único (ISP monoplex) y vista de inmunofluorescencia multiplex de un solo canal (ISP multiplex) que demuestran la concordancia cualitativa entre los diferentes métodos de tinción. Barras de escala = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67584/67584fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67584/67584fig06.jpg"> 
Figura 6: Tinción de sección en serie. (A) Diagrama que muestra la disposición de un TMA multitejido. (B) Imágenes representativas de 8-plex de núcleos de tejido de cada tipo de tejido en el TMA. (C) Imágenes representativas de CD8 en un núcleo de amígdalas a través de seis secciones seriadas de TMA teñidas en una sola ejecución. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67584/67584fig06large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67584/67584fig07.jpg"> 
Figura 7: Cuantificación de la densidad de un solo marcador por tipo de tejido incluido en el TMA. Las densidades por tejido son las densidades promedio en tres núcleos representativos de cada tipo de tejido en el portaobjetos TMA. El eje Y representa las densidades de marcadores individuales en diferentes tipos de tejidos en el eje X, en unidades de células positivas/mm2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67584/67584fig07large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67584/67584fig08.jpg"> 
Figura 8: Análisis de la región de interés (ROI) de la señal fluorescente relativa comparando el MIF del ISP amplificado descrito en este protocolo con el IF indirecto. (A) Portaobjetos representativo teñido para CK (izquierda) o PD-L1 (derecha) con cinco ROI indicados. (B) Imágenes representativas de ROI para CK (arriba) y PD-L1 (abajo). Intensidad media de la señal lograda con mIF amplificado (púrpura) e IF indirecto (azul) para (C) CK y (D) PD-L1 en cinco ROI, cada uno de los cuales mide 100 μm x 100 μm y contiene aproximadamente 200 celdas. Los valores del eje Y muestran unidades fluorescentes arbitrarias y las barras de error muestran desviaciones estándar (n=3). (E) La intensidad relativa de la señal lograda con ISP amplificado mIF (púrpura) e IF indirecto (azul) se calculó tomando la relación entre la señal mIF amplificada media y la señal IF indirecta media en todos los ROI. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67584/67584fig08large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Tabla 4: Coeficiente de varianza (CV) calculado. En la Figura 6 se muestra el CV de la densidad celular positiva y la intensidad media de la señal para las imágenes de amígdalas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67584/Table04_RE.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>

Ensayos de inmunofluorescencia multiplex automatizados de alto rendimiento para la investigación traslacional

Multiplex immunofluorescence (mIF) is an advanced technique that allows for detailed, spatially resolved analysis of tissue samples by visualizing ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

A continuación se describe un reverso transcriptasa optimizado multiplex PCR cuantitativa (QRT-PCR) en combinación con el protocolo de una plataforma de microfluidos como un costo y el tiempo efectivo instrumento de cribado de alto rendimiento para los microRNA (miRNA) los niveles de expresión, especialmente cuando se trabaja con cantidades limitadas de muestras.

Perfiles de microARN de alto rendimiento: Multiplex Optimizado QRT-PCR en la escala de nanolitros de la IFC Fluidigm dinámica ArrayTM

Gracias a la tecnología Luminex Corporation microesfera xMAP, hemos desarrollado el inmunoanálisis fluorométrico multiplexada (MFIA) para la vigilancia serológica de las diversas especies de animales de laboratorio. El MFIA es un microarray de suspensión donde se covalentemente con el antígeno, tejido de control o inmunoglobulinas vinculado a microesferas de poliestireno con código de color. El método de prueba MFIA, así como diversos temas de solución de problemas se aborda.

Multiplexado inmunoensayo fluorométrico Metodología de prueba y solución de problemas

Presentamos en el estudio actual un ensayo basado en fluorescencia novela usando linfocitos derivados de un ratón transgénico. Este ensayo es adecuado para la selección de alto rendimiento (HTS) de moléculas pequeñas dotados de la capacidad de cualquiera de inhibición o promoción de la activación de linfocitos.

Una de linfocitos ensayo basado en la fluorescencia adecuado para el cribado de alto rendimiento de pequeñas moléculas

Un protocolo detallado para un panel de inmunofluorescencia multiplex marcador seis es optimizado y realizado, utiliza un teñidor automático para resultados más consistentes y un menor tiempo de procedimiento. Este enfoque puede adaptarse directamente por cualquier laboratorio para estudios de inmuno-Oncología.

Panel de inmunofluorescencia Multiplex automatizado para estudios de inmuno-Oncología en los especímenes del tejido formalina-fijo Carcinoma

Aquí se describe un protocolo de immunohistochemical fluorescente multiplex la coloración y la proyección de imagen para la localización simultánea de múltiples antígenos asociados a cáncer de linfoma. Este protocolo puede ampliarse para el análisis de colocalización de marcadores biológicos en todas las secciones de tejido.

La coloración de Immunohistochemical fluorescente multiplexado, por imágenes y análisis en muestras histológicas de linfoma

La inmunohistoquímica fluorescente multiplex es una tecnología emergente que permite la visualización de múltiples tipos de células dentro del tejido integrado en parafina (FFPE) fijo en formalina. Se presentan pautas para asegurar un multiplex de 7 colores exitoso con instrucciones para optimizar anticuerpos y reactivos, preparar diapositivas, diseño y consejos para evitar problemas comunes.

Optimización, diseño y evitamiento de trampas en la inmunohistoquímica fluorescente multiplexación manual

Describimos un método de tinción rápida para realizar imágenes multiespectrales en tejidos congelados.

Un método rápido para imágenes de fluorescencia multiespectral de secciones de tejido congelado

Los ensayos automatizados que utilizan microplacas de múltiples pocillos son enfoques ventajosos para identificar reguladores de vías al permitir la evaluación de una multitud de condiciones en un solo experimento. Aquí, hemos adaptado el protocolo de cuantificación e imágenes de macropinosomas bien establecido a un formato de microplaca de 96 pocillos y proporcionamos un esquema completo para la automatización utilizando un lector de placas multimodo.

Imágenes y análisis automatizados para la cuantificación de macropinosomas marcados fluorescentemente

En este artículo, se describe un protocolo para la inmunofluorescencia múltiple (mIF) de amplificación manual de señal de tiramida (TSA) combinada con análisis de imágenes y análisis espacial. Este protocolo se puede utilizar con secciones fijadas en parafina con formalina (FFPE) para la tinción de dos a seis antígenos por portaobjetos, dependiendo del escáner de portaobjetos disponible en el laboratorio.

Inmunofluorescencia múltiple combinada con análisis de imágenes espaciales para la evaluación clínica y biológica del microambiente tumoral

La implementación de una técnica de fotoirradiación versátil y de bajo coste con el método manual IBEX permite obtener una imagen óptima del tejido humano con una importante autofluorescencia nativa. Este protocolo detalla cómo obtener imágenes multiplexadas de portaobjetos completos a partir de muestras clínicas archivadas utilizando un microscopio invertido, reactivos ampliamente disponibles y software de código abierto para la alineación y el procesamiento de imágenes.

El flujo de trabajo optimizado para el blanqueo iterativo amplía la obtención de imágenes de multiplexidad de muestras clínicas altamente autofluorescentes

La inmunofluorescencia multiplexada permite el marcado secuencial de múltiples marcadores de anticuerpos dentro de una sola sección tisular para apoyar el análisis espacial de la arquitectura tisular y las poblaciones celulares. Aquí se presenta un flujo de trabajo para la detección multiplex de marcadores estructurales, estructural e inmunitarios asociados a la senescencia, que incluye preparación manual y automatizada de portaobjetos, imágenes iterativas y análisis de células individuales...

Ensayo de inmunofluorescencia multiplexado para la evaluación espacial de marcadores de senescencia in vivo

Aprende ensayos de inmunofluorescencia multiplex automatizados de alto rendimiento para investigación traslacional usando tejidos FFPE. Este protocolo reduce el tiempo de procesamiento y mejora la reproducibilidad en estudios de proteómica espacial.

Ensayos de inmunofluorescencia multiplex automatizados de alto rendimiento para la investigación traslacional

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