Name: Determinación de la morfología mitocondrial en células vivas mediante microscopía confocal (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Aprende a evaluar la morfología mitocondrial en células SH-SY5Y vivas mediante tinción con MitoTracker y microscopía confocal. Este protocolo accesible facilita el estudio de la función mitocondrial en modelos de enfermedad de Parkinson.

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<ol><li>von der Malsburg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+mechanism+of+mitochondrial+membrane+remodelling+by+human+OPA1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural mechanism of mitochondrial membrane remodelling by human OPA1.</a> Nature. 620 (7976), 1101-1108 (2023).</li>
<li>Giacomello, M., Pyakurel, A., Glytsou, C., Scorrano, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+biology+of+mitochondrial+membrane+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The cell biology of mitochondrial membrane dynamics.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 21 (4), 204-224 (2020).</li>
<li>Kalia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+mitochondrial+receptor+binding+and+constriction+by+DRP1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural basis of mitochondrial receptor binding and constriction by DRP1.</a> Nature. 558 (7710), 401-405 (2018).</li>
<li>Cao, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MFN1+structures+reveal+nucleotide-triggered+dimerization+critical+for+mitochondrial+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">MFN1 structures reveal nucleotide-triggered dimerization critical for mitochondrial fusion.</a> Nature. 542 (7641), 372-376 (2017).</li>
<li>Chan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+and+its+involvement+in+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics and its involvement in disease.</a> Annu Rev Pathol. 15, 235-259 (2020).</li>
<li>Solaini, G., Sgarbi, G., Lenaz, G., Baracca, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+mitochondrial+membrane+potential+in+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Rep%22%5BJournal%5D)">Evaluating mitochondrial membrane potential in cells.</a> Biosci Rep. 27 (1-3), 11-21 (2007).</li>
<li>Gan, Z., Audi, S. H., Bongard, R. D., Gauthier, K. M., Merker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+mitochondrial+and+plasma+membrane+potentials+in+intact+pulmonary+arterial+endothelial+cells+based+on+extracellular+disposition+of+rhodamine+dyes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol-Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Quantifying mitochondrial and plasma membrane potentials in intact pulmonary arterial endothelial cells based on extracellular disposition of rhodamine dyes.</a> Am J Physiol-Lung Cell Mol Physiol. 300 (5), L762-L772 (2011).</li>
<li>Zhong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roflupram+exerts+neuroprotection+via+activation+of+CREB%2FPGC-1%CE%B1+signalling+in+experimental+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Roflupram exerts neuroprotection via activation of CREB/PGC-1α signalling in experimental models of Parkinson's disease.</a> Br J Pharmacol. 177 (10), 2333-2350 (2020).</li>
<li>Xu, B. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitofusin-2+mediates+cannabidiol-induced+neuroprotection+against+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmacol+Sin%22%5BJournal%5D)">Mitofusin-2 mediates cannabidiol-induced neuroprotection against cerebral ischemia in rats.</a> Acta Pharmacol Sin. 44 (3), 499-512 (2023).</li>
<li>Hu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PRDM16+exerts+critical+role+in+myocardial+metabolism+and+energetics+in+type+2+diabetes+induced+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">PRDM16 exerts critical role in myocardial metabolism and energetics in type 2 diabetes induced cardiomyopathy.</a> Metabolism. 146, 155658(2023).</li>
<li>Reichardt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA-binding+protein-A+promotes+kidney+ischemia%2Freperfusion+injury+and+participates+in+mitochondrial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">DNA-binding protein-A promotes kidney ischemia/reperfusion injury and participates in mitochondrial function.</a> Kidney Int. 106 (2), 241-257 (2024).</li>
<li>Ahmad, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+classification+of+mitochondrial+shapes+reflects+stress+and+redox+state%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Computational classification of mitochondrial shapes reflects stress and redox state.</a> Cell Death Dis. 4 (1), e461(2013).</li>
<li>Valente, A. J., Maddalena, L. A., Robb, E. L., Moradi, F., Stuart, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+imagej+macro+tool+for+analyzing+mitochondrial+network+morphology+in+mammalian+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochem%22%5BJournal%5D)">A simple imagej macro tool for analyzing mitochondrial network morphology in mammalian cell culture.</a> Acta Histochem. 119 (3), 315-326 (2017).</li>
<li>Hemel, I., Engelen, B., Luber, N., Gerards, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hitchhiker%27s+guide+to+mitochondrial+quantification%5BTitle%5D)+AND+%22Mitochondrion%22%5BJournal%5D)">A hitchhiker's guide to mitochondrial quantification.</a> Mitochondrion. 59, 216-224 (2021).</li>
<li>Vowinckel, J., Hartl, J., Butler, R., Ralser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitoloc%3A+A+method+for+the+simultaneous+quantification+of+mitochondrial+network+morphology+and+membrane+potential+in+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mitochondrion%22%5BJournal%5D)">Mitoloc: A method for the simultaneous quantification of mitochondrial network morphology and membrane potential in single cells.</a> Mitochondrion. 24, 77-86 (2015).</li>
<li>Dagda, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+PINK1+function+promotes+mitophagy+through+effects+on+oxidative+stress+and+mitochondrial+fission%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Loss of PINK1 function promotes mitophagy through effects on oxidative stress and mitochondrial fission.</a> J Biol Chem. 284 (20), 13843-13855 (2009).</li>
<li>Przedborski, S., Tieu, K., Perier, C., Vila, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MPTP+as+a+mitochondrial+neurotoxic+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bioenerg+Biomembr%22%5BJournal%5D)">MPTP as a mitochondrial neurotoxic model of Parkinson's disease.</a> J Bioenerg Biomembr. 36 (4), 375-379 (2004).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Yoduro de 1-metil-4-fenilpiritinio (MPP+)</td><td>Macklin</td><td>M875357</td><td>Se utiliza para inducir estrés oxidativo</td></tr><tr><td>Plato confocal</td><td>NIDO</td><td>801001</td><td>Se utiliza para cultivar las células</td></tr><tr><td>Microscopio confocal</td><td>Nikon</td><td>C2</td><td>Se utiliza para capturar imágenes</td></tr><tr><td>Mezcla de medios/nutrientes Eagle modificado de Dulbecco F-12</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11320033</td><td>Se utiliza para proporcionar nutrición a las células</td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Tiempo de beyo.</td><td>ST038</td><td>Se utiliza para disolver la sonda mitotracker</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A3161001C</td><td>Se utiliza para proporcionar nutrición a las células</td></tr><tr><td>ImagenJ</td><td>Institutos Nacionales de Salud</td><td>ImagenJ</td><td>Se utiliza para analizar la morfología mitocondrial</td></tr><tr><td>MitoTracker Red CMXRos</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>M7512</td><td>Se utiliza para visualizar mitocondrias</td></tr><tr><td>Solución salina tampón de fosfato (PBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C10010500BT</td><td>Se utiliza para lavar las células en platos confocales</td></tr><tr><td>Célula SH-SY5Y</td><td>ATCC</td><td>CRL-2266</td><td>Se utiliza para demostrar el flujo de trabajo de análisis de la morfología mitocondrial</td></tr><tr><td>Adaptador de platina TI-SH-U</td><td>Nikon</td><td>MEC59110</td><td>Se utiliza para asegurar muestras</td></tr></tbody></table>

determinación de la morfología mitocondrial en células vivas mediante microscopía confocal

Determination of Mitochondrial Morphology in Live Cells Using Confocal Microscopy

Este protocolo describe un procedimiento detallado, paso a paso, para el análisis morfológico mitocondrial a través de tres módulos de optimización interdependientes: estandarización de los protocolos de preparación de muestras, optimización sistemática de los parámetros ópticos para la obtención de imágenes de microscopía confocal y directrices de procesamiento de imágenes computacionales. Un protocolo óptimo de preparación de muestras es fundamental para obtener datos fiables de imágenes mitocondriales. La evaluación s...

Determinación de la morfología mitocondrial en células vivas mediante microscopía confocal

The dynamic balance of mitochondrial fusion and fission directly contributes to mitochondrial homeostasis, which influences numerous cellular functions in ...

determination-mitochondrial-morphology-live-cells-using-confocal

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Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Fusión mitocondrial se midió mediante el seguimiento de la equilibración de photoconverted matriz orientada GFP través de la red mitocondrial en el tiempo. Hasta ahora, sólo una célula podría ser sometido a un análisis cinético hora larga a la vez. Se presenta un método que mide simultáneamente varias celdas, y acelera así el proceso de recopilación de datos.

Una más rápida, de alta resolución, APMt-GFP-ensayo basado en la fusión mitocondrial Adquisición de datos cinéticos de varias celdas en paralelo mediante microscopía confocal

Los fibroblastos de pacientes portadores de mutaciones causantes de la enfermedad en el Parkinson genes representan un fácil...

El uso de fibroblastos humanos primarios para la Supervisión de fenotipos mitocondriales en el campo de la enfermedad de Parkinson

Fuente: Kennedy, L. H., et. al. Visualización e imagen en vivo de orgánulos de oligodendrocitos en cortes de cerebro organotípicos utilizando virus adenoasociados y microscopía confocal. J. Vis. Exp. (2017)Este video muestra la imagen de las mitocondrias de oligodendrocitos en cortes de cerebro de ratón organotípicos. La loncha se coloca dentro de una cámara de baño con circulación continua de fluido y temperatura controlada. Después de configurar varios parámetros del microscopio confocal, se...

Imágenes confocales del movimiento mitocondrial dentro de los oligodendrocitos en cultivos organotípicos de cortes de cerebro

Las mitocondrias pueden utilizar el potencial electroquímico a través de su membrana interna (Δ Ψm) para secuestrar calcio (Ca2 +), lo que les permite dar forma Ca 2+ citosólico de señalización dentro de la célula. Se describe un método para medir simultáneamente las mitocondrias Ca 2+ absorción y ΔΨ m en células vivas utilizando colorantes fluorescentes y microscopía confocal.

Medición simultánea de calcio mitocondrial y mitocondrial potencial de membrana en células vivas por microscopía fluorescente

En este artículo se explica cómo utilizar el aprendizaje automático supervisado por simulación para analizar la morfología de las mitocondrias en imágenes de microscopía de fluorescencia de células fijas.

Análisis de la morfología mitocondrial a través del aprendizaje supervisado por simulación

Aquí, presentamos un protocolo para analizar los cambios en la densidad mitocondrial y la distribución longitudinal mediante imágenes de músculo esquelético vivo utilizando microscopía confocal para el escaneo de redes mitocondriales.

Análisis de la densidad mitocondrial y la distribución longitudinal en fibras musculares vivas de rata mediante microscopía confocal

Este protocolo proporciona un enfoque estandarizado para obtener imágenes de la morfología mitocondrial en múltiples tejidos de C. elegans durante el envejecimiento.

Imágenes y cuantificación de la morfología mitocondrial en C. elegans durante el envejecimiento

Aquí describimos el localizador de eventos mitocondriales (MEL), un complemento de ImageJ útil en la cuantificación de los cambios tridimensionales en la actividad de fisión y fusión mitocondrial a lo largo del tiempo. También describimos una tubería de procesamiento de imágenes útil para la limpieza de micrografías antes del análisis en ImageJ.

Comprensión de los cambios en la morfología mitocondrial a través de micrografías de fluorescencia dinámicas y tridimensionales

Se demuestra la aplicación del indicador de fluorescencia, TMRM, en las neuronas corticales para determinar los cambios relativos en la intensidad de fluorescencia TMRM antes y después de la aplicación de un estímulo específico. También muestran la aplicación de la fluorescencia de la sonda...

Determinación de Especies de la membrana mitocondrial de oxígeno potencial y reactiva en las neuronas corticales de rata en vivo

En este video, se describe un método para obtener imágenes de células vivas de la división asimétrica sensorial células progenitoras de órganos y células de la epidermis intacta...

Células vivas imágenes de células de los órganos sensoriales Precursor en Intacto Drosophila Las pupas

Aprende a evaluar la morfología mitocondrial en células SH-SY5Y vivas mediante tinción con MitoTracker y microscopía confocal. Este protocolo accesible facilita el estudio de la función mitocondrial en modelos de enfermedad de Parkinson.

Determinación de la morfología mitocondrial en células vivas mediante microscopía confocal

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