Observation du Mouvement ciliaire des cellules épithéliales plexus choroïde<em&gt; Ex Vivo</em

Takafumi Inoue; Keishi Narita; Yuta Nonami; Hideki Nakamura; Sen Takeda

doi:10.3791/52991

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Article de méthode

Observation du Mouvement ciliaire des cellules épithéliales plexus choroïde

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DOI :

10.3791/52991

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13 juillet 2015

Takafumi Inoue¹ , Keishi Narita² , Yuta Nonami¹ , Hideki Nakamura¹ , Sen Takeda²

¹Department of Life Science and Medical Bioscience, Faculty of Science and Engineering, Waseda University, ²Department of Anatomy and Cell Biology, Interdisciplinary Graduate School of Medicine & Engineering, University of Yamanashi

Dans cet article

Résumé

Dans cette étude, une technique détaillée de microscopie optique a été optimisée pour l’observation et l’analyse en temps réel du mouvement des cils CPEC ex vivo, ainsi qu’une méthode de microscopie électronique pour l’analyse ultrastructurale.

Résumé

Le plexus choroïde est situé dans la paroi ventriculaire du cerveau, dont la fonction principale est censée être la production de liquide céphalo-rachidien. Les cellules épithéliales du plexus choroïde (CPEC) recouvrant la surface du tissu du plexus choroïde hébergent plusieurs cils uniques, mais la plupart des fonctions de ces cils restent à étudier. Pour découvrir la fonction des cils CPEC en particulier en ce qui concerne leur motilité, un système d’observation ex vivo a été mis au point pour surveiller la motilité ciliaire pendant les périodes embryonnaire, périnatale et postnatale. Le plexus choroïde a été disséqué dans le ventricule cérébral et observé à l’aide d’un microscope à contraste vidéo équipé d’une optique de contraste interférentiel différentiel. Dans ces conditions, une méthode simple et quantitative a été développée pour analyser les profils mobiles des cils CPEC pendant plusieurs heures ex vivo. Ensuite, les changements morphologiques des cils au cours du développement ont été observés par microscopie électronique à balayage pour élucider la relation entre la maturité morphologique des cils et la motilité. Fait intéressant, cette méthode pourrait délimiter les changements dans le nombre et la longueur des cils, qui ont culminé au jour postnatal (P) 2, tandis que la fréquence des battements a atteint un maximum à P10, suivi d’un arrêt brutal à P14. Ces techniques permettront d’élucider les fonctions des cils dans divers tissus. Bien que des techniques similaires aient été publiées dans un précédent rapport¹, la présente étude se concentre sur des techniques détaillées pour observer la motilité et la morphologie des cils CPEC ex vivo.

Introduction

Les cils sont des projections ressemblant à des cheveux à la surface de la plupart des cellules de vertébrés, qui ont attiré l’attention des chercheurs médicaux en raison d’une classe de maladies appelées ciliopathies ^2-4. Malgré l’expression omniprésente de l’organite, une grande variété de fonctions ciliaires ont été rapportées, y compris la motilité et la biodétection. Par exemple, les cils mobiles à la surface de la muco-épithélium transportent le mucus⁵ et les débris épithéliaux vers la sortie des tractus, prévenant ainsi les maladies en dégageant la surface des épithéliums. De plus, au cours des premières périodes de d....