Un modèle aigu rétinienne pour l'évaluation sanguin rétinien barrière Breach et potentiels médicaments pour le traitement

Résumé

Un faible coût, système facile à utiliser et puissant est mis en place pour évaluer les traitements qui pourraient améliorer la violation du sang barrière rétinienne induite par l'histamine. navire de fuite de sang, l'activation des cellules Müller et la continuité des processus neuronaux sont utilisés pour évaluer la réponse aux dommages et son inversion avec un médicament potentiel, la lipoxine A4.

Résumé

Un système modèle peu coûteux, facile à utiliser et puissant est établi pour évaluer les traitements potentiels qui pourraient améliorer la brèche de la barrière hémato-rétinienne. Il a été démontré qu’un facteur inflammatoire, l’histamine, compromet l’intégrité des vaisseaux dans la rétine en culture par une coloration positive des IgG à l’extérieur des vaisseaux sanguins. Les effets de l’histamine elle-même et ceux des médicaments candidats à des traitements potentiels, tels que la lipoxine A4, sont évalués à l’aide de trois paramètres : la fuite des vaisseaux sanguins via l’immunocoloration IgG, l’activation des cellules de Müller via la coloration GFAP et la modification des dendrites neuronales par coloration pour MAP2. De plus, l’organisation en couches de la rétine permet une analyse détaillée des processus de Müller et des cellules ganglionnaires, tels que les changements de largeur et de continuité. Bien que les données présentées proviennent de la culture rétinienne porcine, le système est applicable à plusieurs espèces. Ainsi, le modèle fournit un outil fiable pour étudier les effets précoces de la compromission de l’intégrité des vaisseaux rétiniens sur différents types de cellules et également pour évaluer les candidats médicaments potentiels pour le traitement.

Introduction

Un nombre croissant de preuves soutient l'existence de la barrière de la rétine de sang (BRB) ^1-5 et sa similitude avec la barrière hémato - encéphalique (BHE) ^6,7. Compromission de la BHE a été étroitement liée causalement ou en tant que marqueur diagnostique pour les maladies neurodégénératives chroniques telles que la maladie d'Alzheimer (MA) et ^8,9 aiguës des conditions telles que le délire ^10. idées mécanistes dans ces pathologies et de découvertes pour les cibles potentielles de médicaments sont généralement entravés par l'accessibilité et réseau intrication limitée du cerveau. Des alternatives telles que ....

Protocole

Tous les protocoles ont été effectués en conformité avec les politiques du Comité des soins et l'utilisation des animaux institutionnels, le cas échéant.

1. Préparation

1. Préparer le milieu de stabilisation avec 75% de milieu de Eagle modifié par Dulbecco (DMEM), 25% de solution saline équilibrée de Hanks (HBSS). Bien mélanger, aliquote et conserver à -20 ° C jusqu'à utilisation.
2. Préparer le tampon phosphate salin (PBS) et stériliser par autoclavage. Conserver la solution à la température ambiante. Chauffer le PBS à 37 ° C avant l'expérience (5 ml par puits).
3. Préparer 10%, 20% et 30% de saccharose ....

Résultats

Nous présentons, un système de temps efficace et facile à utiliser à faible coût pour évaluer les traitements potentiels qui pourraient protéger contre la violation BRB induite par l'histamine. L' IgG est limitée dans les vaisseaux de la rétine témoin (figure 1A), mais les fuites hors des vaisseaux sanguins lors d'une exposition à l'histamine (figure 1B), ce qui confirme que le modèle est établi avec succès.

Discussion

Dans ce rapport, nous présentons un puissant modèle rétinien aigu ex vivo de dysfonctionnement BRB en utilisant la rétine porcine. Ce modèle ne nécessite pas d’instruments spéciaux et peut être facilement adapté dans la plupart des environnements de laboratoire. Cependant, pour obtenir un résultat réussi, plusieurs étapes nécessitent une attention particulière. Après avoir obtenu les globes oculaires de la source, ils doivent être conservés à 4 °C ou sur de la glace et traités dès que possible. Lorsque l’effet d.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
DMEM	Life Technologies  ;	11965-092
HBSS	Life Technologies  ;	14170-112
Saccharose	J.T.Baker	4072-05
Histamine  ;	Sigma	H7125-1G
Pénicilline-Streptomycine  ;	Invitrogen
PFA	Microscopie électronique Sciences	15710
Milieux de congélation  ;	Triangle Biomedical Sciences	TFM-5
Sérum de chèvre normal  ;	Rockland	D104-00-0050
Triton X-100	Sigma	T8787
Anticorps GFAP	Millipore	AB5804
Anticorps MAP2	EMD Millipore	MAB3418
FITC Âne conjugué anti-lapin	IgG Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.	711-095-152
Cy3 Conjugué Donkey anti-souris IgG	Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.	715-165-150
contenant DAPI	Vector Laboratories, Inc.	H-1200
Microscope confocal laser	Nikon	Eclipse Ti ImageJ
	National Institutes of Health	1.45s

Support de montage