Summary
Davranışsal test beyin hasarı aşağıdaki sonuçlarını belirlemek için altın standarttır ve bebeklerde ve çocuklarda gelişimsel engelli varlığı tespit edilebilir. Nörogelişimsel refleksler bu anomalilerin erken göstergesidir. yenidoğan kemirgen kolayca gerçekleştirilebilir gelişimsel refleks testlerin bir konak geliştirilmiş ve burada tarif edildi.
Abstract
Nörogelişimsel refleks testi genel olarak sinir sisteminin olgunlaşma değerlendirmek için klinik uygulamada kullanılır. Nörogelişimsel refleksleri de ilkel refleksleri adlandırılır. Bunlar duyarlı ve sonraki sonuçlarla tutarlıdır. Anormal refleksleri nöro hastalıklar için yüksek risk altında olan bebeklerin prediktif bir indeksi olan refleksleri yokluğu, kalıcılığı, yeniden ortaya çıkma ya da gecikme olarak tanımlanır. İnsan bebeklerde görülebilir gibi beyin felci gibi nörogelişimsel engelli, hayvan modelleri, çoğu zaman, anormal gelişim refleksleri gösterir. tarif edilen teknikler yenidoğan sıçanlarda nöro refleksleri çeşitli değerlendirmek. Nörogelişimsel refleks testi Araştırmacı böyle genç hayvanlarda aksi bulunmayan bir test yöntemi sunmaktadır. Burada sunulan metodoloji tespit erken başlangıçlı br yöntemi olarak yenidoğan sıçanlarda gelişimsel kilometre taşları incelerken araştırmacılar yardımcı hedefliyorain yaralanması ve / veya terapötik müdahalelerin etkisini belirlemek. Burada sunulan metodoloji araştırmacıları için genel bir rehber sunmayı amaçlamaktadır.
Introduction
Nörogelişimsel refleksler ya gelişimsel kilometre taşları, insan Yenidoğan ve süt kullanılan en erken değerlendirmelerin biridir. Nörolojik refleksler beyin sapı ve omurilik refleksleri göstermek istemsiz ve tekrarlayan hareketler vardır. Göç, miyelinasyonu ve sinaptogenez gelişen karakterize yüksek kortikal ağların Olgunlaşma istemli kontrolün ve kortikal inhibisyonunu teşvik eder. merkezi sinir sistemi evrim normal ilerleme değişiklikler nöro refleks gecikme ve devamsızlığı neden anormal kortikal kablo, işleyişi ve miyelinasyon sonuçlanan beyin gelişimi bozabilir. nörogelişimsel sakatlık açısından yüksek risk İnsan bebekler genellikle anormal erken refleksleri gösterir. Anormal refleksler sonraki yaşamında bir edinim, yokluğunda gecikme, uzun süreli varlığı veya yeniden ortaya çıkma olarak sunmak, gelişim bozuklukları önemlibelirleyicilerindendir edebilirsiniz. 1, 2 DolayısıylaNörogelişimsel engelli deneysel modellerinde refleks gecikmeleri taklit etmek önemlidir.
Kemirgenler yaygın deneysel model olarak kullanılmaktadır. Sıçan yavrular nedenle spesifik veya karmaşık motoru, duyu ve / veya bilişsel davranışsal görevleri üstlenmek için çok olgunlaşmamış doğan zaman altricial, ve. Bu bağlamda, onların gelişimsel gelişmemişlik hem fiziksel ve organ gelişimine ilgilidir. Sıçanlar, thermoregulate bir yetersizlik ile tüysüz dünyaya kör ve yürüyemez edilir. beyin gelişimine ilişkin olarak, önemli kortikal olgunlaşma doğum sonrasında ortaya çıkar. PD7-10 yavrular yakın-eşdeğer ise, 28 haftalık gebelik - 23 arasında bir erken insan beyninin benzer olduğu bir beyin olgunlaşma seviyesine ulaşmak için önerilmiştir, Yenidoğan sıçan yavrularının (PD1 doğum günü doğum sonrası gün 1 olarak da adlandırılır) terimi insan beyni. 3, 4, 5, 6Bu korelasyon brüt anatomik analizlere dayanmaktadır, ancak, böyle miyelinasyon ve genlik entegre elektroensefalogramlar olarak beyin olgunlaşması diğer tedbirler de tarif edilmiştir. Örneğin, 5, 7, ön oligodendrosit 23 gelişen insan fetal beyninde baskın hücrelerdir - rahimde 32 hafta ve bu olgunlaşma aşaması bir PD1-3 kemirgen karşılık gelir. Sıçan yavrularının o PD7-10 çevresinde ön beyin görünür ise 5, 8, 9, 10 Ayrıca, miyelinasyon insanlarda in utero başlar; Yenidoğan kemirgen beyin büyük ölçüde un-miyelinli kalır. 11, 12 Tucker ve ark. P1 sıçan genliği entegre elektroansefalogram deseni 23 haftalık GESTA benzer olduğu bulunmuşturtion insan fetus bir PD7 ve PD10 yavru 30 benzer ise - sırasıyla 32 hafta süreli bebek. 7 Bu nedenlerle, yenidoğan sıçan yavrularında yenidoğan refleks testi ontogeny ve / veya beyin gelişiminin bozulması yakalamak için bir fırsat sunar.
Aşağıda tarif edilen refleksleri pil WM Fox farede refleksleri ontogeny göre ilk araştırmacılar biri WM Fox ve A. Lubics 13, 14 tarafından yapılan çalışmalardan elde uyarlanmıştır. 13 Bu refleksler içerir, ancak, yürüme, işitsel irkilme, duruş ve göz açıklığı, doğrultma, bacak kavranmasına ve yerleştirme, yamaç kaçınma, bunlarla sınırlı değildir doğrulma hızlandırılmış. Hem ön ayak ve arka ayak kavramak (sırasıyla, insanlarda palmar ve plantar kavramak olarak da adlandırılır), spinal refleks olmayan primer motor alanlarından kortikospinal inhibisyonu ile kolaylaştırılmaktadır. 15, 16 Arka ayağın verilmesi (plantar refleks) kortikospinal sistem olgunlaşmasını yansıtır. 16, 17, 18 Cliff kaçınma (koruyucu tepkiler), (labirent) doğrulma ve (örneğin, burun kılı ve vestibüler sistemleri ile ilgili olanlar gibi) duyusal giriş ve adaleleri harekete geçirici çıkış arasında entegrasyon ve arasında iletişim doğrulma hızlandırılmış. 19, 20, 21 Yürüme lokomosyonunu yansıtır. 14 İşitsel irkilme çekirdeği Pontis caudalis reticularis akustik uyarımı ve dev nöronların sinaptik bağlantıları değerlendirir. 21 Duruş uygun kortikal spinal / spinal kortikal projeksiyonlar, kas gücünü ve kas inervasyonu içerir. 22, 23 Magama-aminobütirik asit reseptörlerinin turation göz açıklığı ile ilişkili olabilir. 24 refleksler çok daha karmaşık bir ağ yansıtır ve burada verilen genel bir korelasyon olduğunu akılda tutmak önemlidir. Ayrıca, bu refleksler daha karmaşık davranışsal testler mümkün değildir çok genç yaşlarda nörolojik gelişimini değerlendirmek hızlı ve kolay bir yöntem sağlar.
Bu çalışmanın amacı, kolaylıkla deneysel yenidoğan sıçan çalışmalarında dahil edilebilir nöro refleks testi için genel bir rehber sağlamaktır. tarif edilen metodoloji Long-Evans yenidoğan sıçan yavrularının içinde gerçekleştirilmiştir ve sonuçlar ölçümü görünümünü ilk günü dayanıyordu. test refleks gün sonra başlatılır ve kullanılan ekipman daha iyi (örneğin, farklı cins, gibi), farklı deneysel model göre modifiye edilebilir. ref normal fizyolojik ilerlemesini kurarakBelirli bir hayvan modelinde Lex olgunlaşma, araştırmacılar dış koşullara endojen manipülasyonu ve / veya neonatal sıçan modellerinde nöro üzerindeki terapötik müdahalelerin etkisini değerlendirmek. Genel olarak, beyin olgunluk tayini olarak reflekslerin kullanımı perinatal beyin hasarı tahmin etmede avantajlıdır, daha sonra nörogelişimsel sonuçların yansımasıdır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alberta Üniversitesi'nde Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi, Sağlık Bilimleri bütün hayvan çalışmaları onayladı.
Not: Bu protokol, diğer türler ve suşlar için uyarlanmış olsa da, bu protokol Long-Evans sıçanlarda için yazılmıştır. Bu sıçanlar, diğer kemirgen suşlara kıyasla daha üstün, motor performans ve görme keskinliği sahip olduğu gösterilmiştir. Aşağıdaki gibi zamanlanmış gebelik, beslenme takviyesi, anne inflamasyon ve nörogelişimsel reflekslerin 25, 26 protokoldür.
1. Deney Hayvanları
- Sıçanlar hayvan barındırma tesisine geldiğinde, onların yeni ortamına alışmaya izin vermek için bir veya iki gün boyunca herhangi bir etkileşim kaçınmalıdır. acclimatization ardından, yaklaşık beş gün boyunca her gün fareler işlemek veya sıçanlar olduğunda artık stres belirtileri gösteren. İnsan kaynaklı stres testi sonuçları ve le değiştirebilirabortusta reklam.
- Sıçanlar rahat olduğunda, ıslah başlar. (- 08:00 15:00) iki dişi ve bir çift katlı üreme kafeste bir erkek sıçan (h = 38 cm, 1800 cm2 zemin alanı), gece boyunca yerleştirin. Bu kafesler stres ve aşırı kalabalık önlemek. Sabah, bir transfer pipeti kullanılarak, tuzlu su içinde yaklaşık 0.25 mL ile dişi sıçanların vajina yıkayın. mikrosantrifüj tüpü içine çözeltisini.
- geri kendi geleneksel kafeslere iki dişi ve erkek koyun.
- Sıçan yaşandığı ve sperm olup olmadığını mevcut östrus döngüsü hangi aşamada belirlemek için bir ışık mikroskobu (100 X) altında Bölüm 1.2'de elde çözelti gör. Sperm varsa, embriyonik gün (E1) (Şekil 1) olarak tarih kaydedecektir. Hamile Eğer dişi E14 onu kendi kafesini ver.
NOT: Vajinal yaymasında hücreler açık, dolayısıyla düşük ışık ayarını kullanın. kondansatör en düşük ayara ayarlanmış olduğundan emin olunuz. ilanSadece parlaklık kontrolü loş ışıkta. Bir parlaklık kadranı varsa, 1 olarak ayarlayın.
2. Diyet takviyesi
NOT: Bu protokol gebeliğin son haftasında diyet brokoli filizi tüketiminin terapötik etkilerini değerlendirmek amaçlanmıştır. Wu ve arkadaşlarına göre lahanası büyütün. 27.
- 3 saat - 2 brokkoli filizleri tohum bekletin. Bir tezgah tohum Sprouter kutuyu tohumlarını yaymak ve çimlenmesi için sıcak yüzey üzerinde ayarlayın.
- (- 09:00 8) ve bir kez PM (3-4 PM) bir kere AM olmak üzere günde iki kez tohumlarını sulayın.
- Beşinci günde gün için bir pencere tarafından lahanası yerleştirmek (lahanası iki yaprak her olmalı ve gün boyunca yeşil hale gelecektir).
- Günün sonunda, yavaşça elenmiş kutudan brokoli çekerek lahanası hasat ve kuruması için düz bir yüzey üzerinde uzanır.
- lahanası tamamen kurutulur sonra, ağırlıkkapalı bir plastik torba içinde eigh üzerinden 200 mg yer.
- E14 başlayarak, PD21 (yavrular sütten gün) kadar günlük olarak kurutuldu, brokkoli filizlerinin her gebe fare 200 mg besleme.
3. Enflamasyon
- inflamasyonu neden ile çocukta beyaz cevher hasarı çoğaltamaz, lipopolisakarit (LPS) E19 ve E20 üzerinde her 12 saat gebe sıçanlar enjekte etmek. Enjeksiyon gününde, konut tesisinden laboratuvarına kafesi getirmek. Hamile sıçan acclimate ve en az 1 saat sakin olmaya izin verin. Bir sıçan sürekli sistemik ya da böbrek hasarı klinik belirtileri gösteriyorsa, hemen ötenazi ve çalışma kaldırılır.
- Hamile baraj tartılır.
- tuzlu su, 100 uL: LPS 200 ug / kg (B8 serotip 0127) içinde çözülür. 30 G ½ iğne ile donatılmış bir 1 ml şırınga içinde çözelti aspire.
- Her enjeksiyon için yeni bir iğne kullanın. Çözelti rahatsızlığı en aza indirmek için birkaç dakika ısınmasını bekleyin.
- Tutanak zamanı ve karın içinden hamile baraj enjekte edin. taraflar arasındaki Alternatif enjeksiyonlar eşit dağılımını sağlamak için.
NOT: Machholz vd. Uygun kısıtlama ve enjeksiyon işlemlerini açıklamaktadır. 28
4. Gelişim Refleks Testleri
- PD1 (doğum günü) günü, baraj ve kayıt doğum ağırlıkları yavrular kaldırın. geri kendi kafeslerine yavrular yerleştirin ve PD3 kadar hayvan tesisine taşıyın. Bu baraj ve yavru arasında anne yapışmasını sağlar.
- Güvenilir değerlendirme için refleks testi kaydedin. Bu çerçeve kare analizi (1/1000 ler) için en yüksek çekim hızında şekilde video kamera ayarlayın. Yukarıda veya sıçan yavru ve her refleks için kullanılan tüm malzemeler hemen yanında olacak şekilde video kamera yerleştirin. Örneğin, arka pençe yerleştirme için, kaldırma ve arka bacağın yerleştirerek yakalanır sağlamak için sıçan yavru yanında kamera yerleştirin.
- hızlandırılmış doğrulma için, havada sağa yavru yeteneğini kaydetmek için sıçan yavru ve iniş pad üzerinde kamera yerleştirin.
- Deney sonunda kadar günlük Tutanak ağırlıkları. PD3 üzerinde, nöro refleks testi (Şekil 4) başlar. Çevreye iklimlendirme sağlamak için test edilmeden önce 1 saat en az bir sessiz odaya kafesleri taşıyın.
- Sıçanlar gece olduğu gibi her gün tutarlı bir anda nörogelişimsel refleks testini gerçekleştirin. Örneğin, 9 saatleri arasında deney - Günlük 12:00. 36.5 ° C arasında sabit bir vücut ısısını korumak için, direkt olarak, her zaman bir ısıtma lambası altında veya ısı pedi üzerinde yavrular tutun; Bu çağın sıçan yavrular kolayca ısı kaybeder. bir rektal sıcaklık probu ile ölçülür. verimli yapılırsa bunlar baraj ve yeterince uzun çöp kaldırılmaz, çünkü yavrular vücut sıcaklıkları değişmez. NOT: 37 ° C'yi aşmayacak sağlamak için ısı lambanın sıcaklığı izleyin.
- forelimb Grasping
- PD3 başlayarak, ön ayakları kavramak refleks testi yapması gerekmektedir. Her Forepaw avuç karşı künt çubuk yerleştirin ve elle hafif basınç uygulayın. Işık basıncı hafifçe yapılmış olduğunu temasını sağlamak için forepaw yerinden olmalı ve yavrular çubuk hissedebilirsiniz. Grasping çubuğun etrafında tamamen rakamlardan fleksiyon olarak görünecektir. Her iki forepaws üst üste iki gün boyunca çubuk kavramak bu refleksin başarılı edinimi oluşur.
- ön ayakları kavrayışa Skoru:
bir kavrama için 0
Başarılı sol bir ön pençe kavraması (veya r 1ight Forepaw) burada belirtilebilir
Her iki ön ayakların başarılı kavrama için 2
- hindlimb Grasping
- PD3 başlayarak, arka pençe kavramak refleks testi yapması gerekmektedir. her deneğin, tek karşı bir künt çubuk yerleştirin ve elle hafif basınç uygulayın. Işık basıncı hafifçe yapılmış olduğunu temasını sağlamak için arka pençenin yerinden olmalı ve yavrular çubuk hissedebilirsiniz. Çubuğun başarılı kavrama çubuğunun çevresinde basamak fleksiyon olarak görünür. Her iki arka pençeler üst üste iki gün boyunca çubuk kavramak bu refleksin başarılı edinimi oluşur.
- hindlimb kavrayışa Skoru:
bir kavrama için 0
1 tek taraftaki pençe ile kavrama başarılı için (sol veya sağ arka pençe burada belirtilebilir)
her iki arka pençe başarılı kavrama için 2
- toparlayan
- PD3 gününden itibaren doğrulma refleksi testi başlar. dört ayağı dik sıkıca, yatar pozisyonda yavru tutun. o gitsinyavru f ve hemen zamanlayıcıyı başlatın. yavru / çevirme Dört bacak üzerine devrilme mümkün olduğunda doğrulma elde edilir, ve her bir pençe gövdeye diktir. Her yavru bu hedefe ulaşmak için 15 sn maksimum verin.
- düzgün bir hale getirmesine Skoru:
0 (en fazla verilen süre boyunca ya da 15 s) arkasında yatan için
1 yan yatarken için (sol veya sağ tarafı burada belirtilebilir) veya (maksimum ayrılan süre veya 15 sn) yanlış duruş sağa ama yavru yeteneği
Başarılı doğrulma ve uygun duruş için 2
- hindlimb yerleştirme
- PD4 gününden itibaren refleks testi yerleştirerek hindlimb başlar. gövde tarafından, havada dikey yavru tutun. Yavaşça inme, kör bir yüzey ile arka ayaklarının sırt (örneğin, bir masanın kenarına gibi). sıçan yavrusuna aşağı yüzey üzerinde arka bacağın yerleştirilmesi ve ardından stimüle hindlimb, geri çekmesi halinde doğru bir yerleştirme refleks.
- hindlimb pl Skorurefleksini acing:
Hiçbir başarıların 0
1, bir arka ayağın yerleştirmek için (sol veya sağ arka pençe burada belirtilebilir)
her iki arka pençe için başarılı bir arka bacak yerleştirme için 2
- Cliff kaçınma
- PD4 tarihinden itibaren, uçurum kaçınma Teste başlamak. yavru forepaws ve burun kenar üzerinde olacak şekilde bir düz yüzeyin kenarında, sıçan yavru yerleştirin. Doğru sonuç sıçan yavrusuna yamacın kenarından uzakta döner koruyucu bir cevap olarak, bir. deneycinin eli veya bir köpük iniş düşüşün yavru yakalamak için uçurumun altına yerleştirilir.
- Uçurum kaçınma Skoru:
0 hiçbir hareket için veya kenarı düşme
uzakta uçurumdan taşımak için girişimleri için değil asılı uzuvları 1
uzakta uçurumdan başarılı hareket için 2
- yürüyüş
- PD6 üzerinde yürümenin değerlendirilmesi başlayın. 15 cm'lik bir Diamet merkezinde yer yavrularer daire ve görevi tamamlamak için yavru 30 s bekleyin. Sıçan yavrusuna az 30 s daire dışında, her iki ön ayakların hareket edebilir olduğu zaman 14 başarılı bir yürüme gerçekleştirilir.
- o çemberin dışında hareket etmesine sıçan yavru alır saniye cinsinden olarak yürüyüşü Skoru. o çemberin dışında her iki forepaws taşımak için yavruyu gereken süreyi kaydedin. Tutanak 30 s yavru verilen süre içinde görevi tamamlamak mümkün değilse
- işitsel irkilme
- PD10 üzerinde işitsel irkilme analizini başlayın. Bir irkilme tepkisi mevcut olup olmadığını değerlendirmek için doğrudan yavru üzerinde bir gürültü (çan) sunun. yavru uzak sesi, bir "sıçrama hareketini gösterir zaman pozitif bir irkilme tepkisi gözlenir.
- işitsel irkilme Skoru:
(Veya hiç) bir irkilme yanıtı
(Ya evet) pozitif irkilme yanıtı için
- Duruş
- PD üzerinde duruş analizi başlayın12. Talep olmayan bir kaygan yüzeyinde elde yavrular, ve hareket ederken yavru sahip duruş izleyin. Olgunlaşmamış duruş hareket karın ve gövdeye göre forepaws ve arka pençelere hem dikey işaret eden sürükleyerek yansıtılır. Hareketli gövde için yavru yüzeyinden karın asansör ve forepaws ve arka pençeler hem düz hem de işaret edilir, ya da paralel olduğunda bir olgun duruş elde edilir.
- duruş Skoru:
bir hareket için 0
Olgunlaşmamış duruş için 1 hareket
olgun duruş için 2 taşırken
- Göz Açılış
- PD12 tarafında göz açma analizini başlayın. Her iki göz kapakları açık gün kaydedin:
Görünür gözler için 0
1 bir görünür gözü için (sol veya sağ tarafı burada belirtilebilir)
2 iki görünür gözler için
- PD12 tarafında göz açma analizini başlayın. Her iki göz kapakları açık gün kaydedin:
- Hızlandırılmış Altı düzeltilmesi
- PD14 gününden itibaren hızlandırılmış doğrulma test başlar. bir yatay pozisyon 30.48 c yavru yerleştirinBir köpük iniş üzerinde entimeters. yavru atıp kendisi sağ yeteneğini gözlemleyin. Doğrulma yavru onun ayaklarında üzerinde pozisyonda ve karaya teslim getirebilecek hale anlamına gelir.
- hızlandırılmış düzgün bir hale getirmesine Skoru:
sırtında düşen 0
1 yan düşen (sol veya sağ tarafında burada belirtilebilir)
Bunu pençelerinde inişe 2
Not: reflekslerin ölçümü farklı türlerde müfettişlerin sorusuna bağlı olarak mevcuttur. refleksleri miktarının ilk refleks gözlenmesi, refleks kaybolana kadar görünümünü kadar ilk günü, bu görevi başarıyla gerçekleştirilmesi için geçen süre, performans hızı ve / veya zaman içinde performansın iyileştirilmesi gibi yapılabilir. C için 13, 14, 29, 30, 31eçerli çalışma, görünüm ilk günü skorla olarak kullanılmıştır. Multiparlarda modeller kullanırken, aynı soydan yavrular genellikle rahim ve doğum sonrası çevre ve beslenme durumu içinde, nedeniyle genetik yapısına benzer şekilde davranır. 32 Bu nedenle, tek bir yavru nedeniyle çöp önyargıya bir n = 1 olarak değerlendirilmesi mümkün değildir. Her çöp bir n temsil eder, böylece, bir çöp içinde incelenen yavrular = 1 ortalaması alınabilir. 32, 33 alternatif olarak, aynı çöp içinde çeşitli yavrular aynı çöp içinde hesap yavrular içine alır karışık etki modeli kullanılarak analiz edilebilir. 32, 33
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu deneysel tasarımın zaman çizelgesi Şekil 2'de sunulmuştur. 30 yöntemleri ve sonuçları önceden yayınlanmıştır. Çalışmanın 30 hedefi brokoli gebelik sırasında lahanası ve sütten kesim öncesi dönemle diyet takviyesi LPS ın utero maruz kalma tarafından uyarılan nörogelişimsel gecikme gelen yavrular korumalı olup olmadığını araştırmaktır. Zamana bağlı hamile farelere tuzlu su (kontrol, 100 uL) ya da her 12 saatte bir E19 ve E20 LPS (200 ng / kg, steril tuzlu su içinde 100 uL seyreltilmiş) intraperitonal enjeksiyonları verildi. Rastgele seçilen hamile baraj da E14 gelen PD21 kurutularak, brokkoli filizlerinin (200 mg / gün) ve diyet takviyesi verildi. LPS yavruları korumak için potansiyel bir terapötik müdahale olarak verildi anne inflamasyon ve brokoli filizi taklit etmek kullanıldı. Yavrular (E23 üzerinde doğal olarak doğmuş
Doğum Ağırlıkları
Doğum ağırlığı analizi bir ana tedavi etkisini (F (1,23) = 18.5, 0.0003) ortaya diyet (F (1,23) = 6.5, p = 0.02) ve bir ortak etkisi (F (1,23) = 7.4, p = 0.01). LPS, anne inflamasyon bir yansıması olarak, Tuzlu yavrulara kıyasla önemli ölçüde daha küçük (6.3 ± 0.2 g, Tukey 'in p <0.001), tuzlu su + brokoli yavrular (6.2 ± 0.2 g, Tukey' in p doğan yavrular (5.1 ± 0.2 g) ile sonuçlanmıştır <0.001) ve LPS + brokoli yavrular (6.0 ° ± 0.1 g, Tukey 'in p <0.01). LPS + Brokoli lahanası yavruların doğum ağırlıkları Brokoli filizi büyüme sınırlı olmaktan LPS yavrularını bağışladı öne süren kontrollerden farklı değildi.
Nörogelişimsel Refleks Testi
Grasping Refleks
tedavi veya diyetin hiçbir etkisi ön ayakları ve arka bacak kavranmasına ikisi için gözlemlenmiştir. Tüm yavrular bu görevleri gerçekleştirmek başardık.
hindlimb Yerleştirme
Tedavinin temel etkisi (F (1,23) = 6.8, p = 0.02) arka bacak yerleştirme için tespit edildi. Salin ile karşılaştırıldığında (4.3 ± 0.1 gün, Tukey p <0.05) ve tuzlu su + brokoli (4.3 ± 0.0 gün, Tukey p <0.05), LPS yavrular belirgin bir şekilde (5.1 ± 0.3 gecikmeligün). LPS + Brokoli Filizi yavruların performans LPS yavrularından farklı olmamasına rağmen, artık LPS ve hiçbir tedavi görenlerin yavrularından bu refleks görev iyileşme düşündüren, kontrollerden farklı.
Cliff kaçınma
Tedavinin temel etkisi (F (1,25) = 6.0, p = 0.02) Cliff kaçınma analizi sonucunda tespit edildi. LPS yavrular (5.8 ± 0.4 gün) önemli ölçüde Saline göre bu refleks (4.4 ± 0.2 gün, Tukey p <0.05) elde etmek için tehlikeye edildi. LPS + brokoli yavrular performansında bir gelişme gösteren, grupların herhangi birinden farklı performans değil.
yürüyüş
Önemli bir tedavi etkisi (F (1,24) = 15.1, p = 0.0007), diyet (F (1,24) = 6.3, p = 0.02), ve bir ara-tedavisi ve beslenme arasındaki eylem (F (1,24) = 9.5, p = 0.005), aşağıdaki yürüme analiz bulunmuştur. yürüyüşün bir geciktirilmiş satın Salin ile karşılaştırıldığında, LPS yavrular (9.7 ± 0.4 gün) saptandı (7.5 ± 0.3 gün, Tukey 'in p <0.001), tuzlu su + brokoli (7.7 ± 0.3 gün, Tukey' in p <0.001) ve LPS + brokoli yavrular (7.9 ± 0.2 gün, Tukey p <0.01).
işitsel irkilme
Hiçbir farklılık gözlenmedi.
toparlayan
Seks etkisi tespit edildi (F (1,43) = 16.3, p = 0.0002) düzeltilmesi için, bu nedenle, erkek ve dişi yavrular ayrı ayrı incelenmiştir. Hiçbir farklılık erkeklerde tespit edildi. Kadınlarda, Diet (F (1,21) = 11.8, p = 0.002) bir temel etkisi ve bir ortak etkisi (F (1,21) = 15.6,p = 0.0007) bulunmuştur. LPS + brokoli yavrular (4.9 ± 0.4 gün) LPS yavruların (6.7 ± 0.6 gün, Tukey p <0.05) ile karşılaştırıldığında hemen önce mümkün.
Hızlandırılmış Altı düzeltilmesi
Hızlandırılmış doğrulma test tedavisi önemli bir temel etkisi (F (1,25) = 4.51, p = 0.04). LPS (17.4 ± 0.6 gün) ve LPS + brokoli yavrular (16.9 ± 0.2 gün) performans gösteren gecikmeli hızlandırılmış Salin (16.0 ± 0.4 gün) ve salin + brokoli (16.4 ± 0.5 gün) ile karşılaştırıldığında düzeltme.
Duruş
Tedavisi ve diyet önemli bir etkileşim etkisi (F (1,24) = 5.8, p = 0.02) duruş analizi aşağıdaki tespit edilmiştir. LPS + Brokoli lahanası yavrular (14.9 ± 0.4 gün) LP daha erken olgun bir duruş vardıS (17.0 ± 0.4 gün, Tukey p <0.05).
Göz Açılış
Diyetin önemli bir temel etkisi (F (1,23) = 4.71, p = 0.04) göz açma açısından gözlenmiştir. Her ikisi de tuzlu su + BrSp (15.9 ± 0.1 gün) ve LPS + brokoli yavrular (15.4 ± 0.2 gün) Salin (16.0 ± 0.2 gün) ve LPS yavrular (16.0 ± 0.1 gün) daha erken bu refleksi almıştır.
Genel olarak, geç gebelik ve Sütten kesim öncesi dönemde brokoli filizi tüketimi incelenen reflekslerin birkaç LPS kaynaklı gelişimsel gecikmelere karşı koruma sağlayabilecek başardı. Daha fazla ayrıntı için başvurulan makaleye bakın. 30
Şekil 1. PoVajinal Smear sitive. Vajinal yayma bir örneği, bir ışık mikroskobu ile 10X objektif lens ile görüntülenmiştir. Bu kaydırma, sperm (ok) varlığı ile gösterildiği pozitif slayt temsil eder. vajinal smear gerçekleştirirken, sıçan estrojen döngüsü ya Proestrus, kızışma, metestrus veya diöstrusun olarak değerlendirilebilir. Bu doğru daha yüksek gebelik başarı oranı için yanıp zamanlama yardımcı olur.
2. Deney Tasarımı Zaman Çizelgesi Şekil. LPS intraperitoneal enjeksiyonlar verilen barajlar doğan yavrular değerlendirmek için deneysel zaman çizelgesi. brokoli filizi Diyet takviyesi PD21 kadar E14 başlar. Baraj E19 ve E20 (sarı oklar ile belirtilen) her 12 saatte üzerine enjekte edilir. Maternal ağırlıkları yağ ile kaplı bir rektal sıcaklık probu ile bir ağırlık tartı üzerinden, vücut sıcaklığı ile kaydedilir. Yavrular naturall doğarlarE23 y (siyah okla gösterilen). PD3 gününden itibaren yavrular birkaç refleks testlere tabi. PD21, yavrular davranışsal tepkileri değerlendirmek için açık alan testine tabi tutulmuştur.
Şekil Nörogelişimsel Reflekslerinin Değerlendirilmesi için bir zaman çizelgesi 3. Örnek. Refleksler bu reflekslerin edinim test öncesinde birkaç gün sonra başlar gerektirir yakalayan, böylece gelişimin farklı aşamalarında görünür. Dolayısıyla bir ön deneme genel bir kılavuz olarak bu tarihleri kullanarak yapılmalıdır, bu çalışma Long-Evans sıçan yavruların kullanılır, ancak suşları ve türler arasında farklılıklar vardır. Ön ayak kavramak, arka pençe kavramak ve düzeltilmesi PD3, PD6 ile arka bacak yerleştirme ve Cliff kaçınma PD4 ile, ve yürüme değerlendirilir. İşitsel irkilme PD12 üzerinde PD10, duruş ve göz açıklıkları değerlendirilir ve PD14 üzerinde doğrulma hızlandırılmış.
Gelişim Reflekslerinin 4. Görüntü Şekil. refleks testi görüntüleri Long-Evans sıçan yavrularında PD3 üzerinde gerçekleştirilen. Ön ayakları kavramak (A), arka pençe kavramak (B) ve doğrulma (C), inceleme PD3 başlar. Cliff kaçınma (D) ve arka bacak verilmesi (E) test PD4 başlar. (F) analizleri Yürüme PD6 başlar. Hızlandırılmış doğrulma için aygıt (G) gösterilmiştir. Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.
| Sınav parametresi | Gruplar (ortalama ± SEM) | Ana etkiler (p-değeri) | |||||
| Çöp Büyüklüğü ve Ağırlıklar | tuzlu | Tuzlu + Brokoli lahanası | LPS | LPS + Brokoli lahanası | tedavi | Diyet | etkileşim |
| Çöp Boyut (yavruların sayısı) | 13.3 ± 1.0 | 13.1 ± 1.0 | 10.3 ± 1.5 | 11 ± 1.2 | 0.03 | 0.8 | 0.7 |
| Doğum Ağırlıkları * # g | 6.3 ± 0.2 | 6.2 ± 0.2 | 5.1 ± 0.2 | 6.0 ± 0.1 | 0.0003 | 0.02 | 0.01 |
| PD7 Ağırlıkları * d | 15.0 ± 0.5 | 15.5 ± 0.4 | 11.4 ± 1.1 | 13.6 ± 0.3 | 0.0006 | 0.09 | 0.2 |
| PD21 Ağırlıklar d | 50.0 ± 1.4 | 48.7 ± 1.6 | 46.4 ± 1.2 | 48.2 ± 1.4 | 0.2 | 0.9 | 0.3 |
| Neurodevelop- zihinsel Refleksler | |||||||
| Ön ayakları tutup bir | 3.0 ± 0.0 | 3.0 ± 0.0 | 3.0 ± 0.0 | 3.0 ± 0.0 | n / a | n / a | n / a |
| Hindlimb kavrayın bir | 3.6 ± 0.3 | 3.5 ± 0.3 | 4.6 ± 0.6 | 3.3 ± 0.1 | 0.3 | 0.1 | 0.1 |
| Hindlimb Yerleştirme * a | 4.3 ± 0.1 | 4.3 ± 0.0 | 5.1 ± 0.3 | 4.5 ± 0.2 0.02 | 0.07 | 0.2 | |
| Cliff kaçınma * a | 4.4 ± 0.2 | 4.7 ± 0.2 | 5.8 ± 0.4 | 5.0 ± 0.4 | 0.02 | 0.4 | 0.1 |
| Yürüme * # a | 7.5 ± 0.3 | 7.7 ± 0.3 | 9.7 ± 0.4 | 7.9 ± 0.2 | 0,0007 | 0.02 | 0.005 |
| Işitsel irkilme bir | 11.5 ± 0.3 | 11.5 ± 0.1 | 12.0 ± 0.5 | 11.8 ± 0.2 | 0.2 | 0.8 | 0.9 |
| duruş #a | 15.6 ± 0.5 | 15.9 ± 0.6 | 17.0 ± 0.4 | 14.9 ± 0.4 | 0.8 | 0.08 | 0.02 |
| Göz açıklıklar bir | 16.0 ± 0.2 | 15.9 ± 0.1 | 16.0 ± 0.1 | 15.4 ± 0.2 | 0.08 | 0.04 | 0.2 |
| Hızlandırılmış toparlayan bir | 16.0 ± 0.4 | 16.4 ± 0.5 | 17.4 ± 0.6 | 16.9 ± 0.2 | 0.04 | 1 | 0.3 |
| #a (kadın) doğrulma | 4.9 ± 0.5 | 5.1 ± 0.4 | 6.7 ± 0.6 | 4.6 ± 0.4 | 0.09 | 0.003 | 0,0007 |
| Bir (erkek) doğrulma | 3.9 ± 0.2 | 4.6 ± 0.3 | 5.9 ± 1.9 | 4.2 ± 0.6 | 0.4 | 0.6 | 0.2 |
| görünüm Gün | LPS ve Saline arasındaki * Önemli ölçüde farklı | ||||||
| Zaman aktivitesi b sayısı gerçekleştirilmiştir | # Önemli ölçüde farklı | ||||||
| c Saniye | |||||||
| d gram | |||||||
Tablo 1. Ağırlıklar ve Nörogelişimsel Refleks Sonuçlar. Utero iltihap ve / veya diyet brokoli lahanası takviyesi de maruz yavru elde edilen sonuçlar. Burada sunulan 30 ağırlıklar doğum, PD7 ve PD21 gelmektedir. Zaman noktaları, bir erken, terim ve 1-2 yaşındaki bebek temsil etmek üzere seçildi. Veri, ortalama ± SEM olarak sunulmuştur. İstatistiksel çalışmada Tukey testi takiben iki yönlü ANOVA oldu kullanılır analizleri.görünüşlü bir = gün, b = aktivitesi gerçekleştirildi süreleri ve sayısı c = zaman (lar) aktivitesi, * = gerçekleştirildi LPS ve kontrol, # = LPS ve LPS + brokkoli filizi arasında önemli bir fark arasındaki önemli bir fark. n = 5 - grup başına 7 ibrelerin (bir çöp içinde dört yavruların, iki erkek ve iki dişiden, elde edilen değerler çöp temsil etmek üzere ortalaması alınmıştır).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Nörogelişimsel refleks testi açık nöropatoloji belirgin değildir koşullar altında anlamlı olabilir anormal kortikal gelişme ve olgunlaşma öngörücü ölçüsüdür. nörogelişimsel Test sırasında, yavruların günlük aynı anda incelenir sağlamak için kritik öneme sahiptir. Sıçanlar gece ve test gün boyunca farklı zamanlarda gerçekleştirilir, bu nedenle, kendi sirkadyen ritim performansını değiştirebilir. Yüksek ses yavrulara stres ekleyebilir olarak 34 Test sessiz bir odada tamamlanmalıdır. 35 yavrular nakliye, insan kullanımı ve yeni ayar yavrularında stres neden olabileceğinden, yeni ortamlar alışmaları için 1 saatlik bir asgarisine de ihtiyaç duymaktadır. 35 Yavrular ayrıca ısıtılmış lambası altında ya da ısıtılmış bir ped ile direkt olarak test edilmesi gerekir. Yavrular daha genç, daha az yetenekli onlar thermoregulate edebiliyoruz. Bu nedenle 36, yavrular 15 verilirs ve sırasıyla PD6 ile PD3 üzerinde düzgün bir hale getirmesine ve yürüyüş gerçekleştirmek için 30 sn. Doğduğunda ağırlığı karıştırıcı bir faktörü temsil etmektedir Buna ek olarak 36, kontrol yavrular büyümesi, sınırlı olmamalıdır. eşit beslenme ve cinsiyet temsil edilmesini sağlamak için 10 - yataklıklar da 8 itlaf edilmelidir. yavru doğdu sonra, maternal ihmal önlemek için baraj bir bağ oluşturmak için bir sıçan için günde izin vermek için çok önemlidir.
Yavrular günde test edilmelidir ya da iki önceki güne onlar görünüm başlangıcını yakalamak için refleksini edinirler. Deneysel modeline bağlı olarak bazı değişiklikler gerekebilir. Yeni doğan farenin sıçanlara göre çok daha küçüktür. Bu nedenle, var olabilir kullanılan ekipmanın boyut yeni doğmuş farelerin boyutuna ayarlanabilir. Bazı sorun giderme de gerekli olabilir. Farklı cins, refleks başlamasından biraz farklı zamanlama sahip olabilir. 13 Bu raporda ayrıntılı zamanlama specifi olduğunuPD3, 4, 6, 10, 12 başlayan yeni reflekslerin test etme ve 14 (Şekil 3) Long-Evans yavrular c. Deneysel testten önce doğal refleks ilerlemesini kurmak için 3 litre - araştırmacı 2 refleks testi gerçekleştirmek gerekebilir. verilere performans istatistik analizleri toplanan Dahası, deneyci çöp önyargı önlemek için uygun teknikler kullanmalıdır. Aynı soydan yavrular nedenle çöp bir n = 1 ise, tek tek yavru temsil eder, birbirine benzer bir şekilde performans gösterir. 32, 33
Daha karmaşık davranışsal testler bu yaşlarda mümkün olmadığından bu yeni doğmuş kemirgenler için kullanılabilen tek test, çünkü nörogelişimsel refleksleri test önemlidir. Başka hiçbir önlem ağırlığı ve fiziksel görünümü yanında bu erken dönemde kullanılabilir. Burada sağlanan metotlar böylece destekleyen bazı araştırmacılar tarafından kullanılmıştırözellikle diğer davranışsal testler uygulanabilir olmadığında genç kemirgenlerde, nörolojik refleks testi kullanın. 13, 14, 29, 30, 31, 37, 38 Bu testler, nöro hastalıkların prediktif gibi serebral palsi olarak insan bebeklerde yapılan test refleks paralel ve yapay sinir ağları ontogeni ilgili ek bilgi sağlar. refleksleri çıkması sinir sisteminin olgunlaşmasını yansıtan Sütten kesim öncesi dönemde belirli zamanlarında ortaya çıkar. Bu protokolün 39 A sınırlama tüm deneysel modeller test refleks tabi tutulabilir değildir olmasıdır. Kemirgenler onların doğum sonrası gelişim refleks gelişimin başlangıcını yakalama avantajı sunuyor, öyle ki, olgunlaşmamış doğarlar. Diğer hayvan modelleri bu türkuzu gibi olgun doğarlar ve refleks testi bazıları bu modele geçerli değildir böylece kemirgenler farklı gelişir. Ayrıca, refleks testi bilişsel veya davranışsal anormallikleri doğrudan ölçüsü değildir ve herhangi gözlenen anormallikler geçici veya kalıcı olup olmadığı belirsizdir.
reflekslerinin yanı sıra, davranışsal testler daha geç yaşlarda tamamlayıcı analizler için yapılabilir. anormal refleks gecikmeler her zaman nörogelişimsel bozukluklarına yol olmadığı için bu önemlidir. 2, 40 testler tipik kemirgen bilişsel ve motor görevleri gerçekleştirmek mümkün olduğunda PD21 (sütten gün) başlayarak uygulanır. Bu testler, döner çemberde geçirdiği, Morris su labirent ve yükseltilmiş artı labirent ile sınırlı değildir bot içerir. Kısaca, rotarod testinde bir süre boyunca ya da kemirgen düşme kadar çubuk üzerinde performansını döner bir çubuk üzerine kemirgen yerleştirilmesi ve kaydederek yürütülürkapatır. Bu test, motor öğrenme ve mukavemeti, hem de, örneğin, bazal ganglia ve serebellum gibi beyin yapılarında bütünlüğünü değerlendirir. 41 Morris su labirenti sütsü beyaz bir su havuzuna kemirgen yerleştirilmesi ve batık bir platformu bulmaları için kemirgen süresini kayıt oluşur. İşaretler hep platformun üstünde aynı işaret ile havuzun her kadranda üzerinde yerleştirilebilir. Bu hipokampal aracılı uzamsal öğrenme ve hafızanın allocentric formları vs benmerkezci inceler. 42 yükseltilmiş artı labirent testi önlemler korku ve kaygı gibi doğal keşif davranışı. Kemirgenler yerden yükseltilmiş dört kol, kapalı, iki iki açık merkezinde yerleştirilir. 43 kaçınma ve keşif davranış kemirgenler kayıt edilir (her bir kolda harcanan zaman olarak değerlendirilmiştir). 43 Bu ek testler olarak araştırmacı izin sensorimotor ve bilişsel işleyişini incelemekhakaret yetişkinlikte sürer, yoksa geçici olup olmadığı olmadığına sess.
Gelişimsel gecikmeler tahmin, ve tamamlayıcı davranışsal testler sonraki yaşamında bir bozukluğun varlığı için tamamlayıcı kanıtlar sağlamak için gereklidir. Buna ek olarak, kontrol cevaplarıdır önce, bu koşullara rağmen vb şekil değiştirme ve tür farklılıklar, genetik değişiklikler, ilaç uygulama, deneme için optimize edilmelidir, tarif edilen teknikler hızlı bir şekilde kolayca, ucuz, hakim öğrenilen ve gelişimi ile ilgili önemli bilgiler sağlamaktadır gergin sistem. onlar olgun davranış görevleri yapamayacak olan söz konusu kişi bir yaşta yavrular sinir sisteminin ontogeny ve olgunlaşmasını değerlendirmek için bir fırsat sunuyoruz. Bundan başka, insan bebeklerin genellikle gelişim refleks kontrolü yapılmıştır ve bu nedenle, kemirgen refleks testi çevirilebilirlik bir araç sağlar. Sonuç olarak bu anormal ön eleme için mükemmel bir yöntemdirbiliş ve davranış daha sonraki soruşturma yol açabilir yenidoğanda nörolojik gelişim.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Acknowledgments
Yazarlar NeuroDevNet (Mükemmellik Ulusal Merkezleri) dahil eden fon ajansları, teşekkür etmek istiyorum, ALVA Vakfı, Kadın ve Çocuk Sağlığı Araştırma Enstitüsü ve Alberta Üniversitesi.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Breeding | |||
| Transfer pipettes | Fisherbrand | 12-711-9AM | Used for vaginal flushes. |
| Sterile Saline | Hospira | 7983254 | The solution used to collect cells during vaginal flushes. |
| 400 µL Microcentrifuge tubes | Fisherbrand | 05-408-120 | Used to hold the saline solution. |
| Light microscope | Leica | Leica ATC 2000 | For observation of the saline solution. Can be any light microscope used in the lab. |
| Slides | Fisherbrand | 12-552-5 | The saline solution is placed on the slide. Can be any slides used in the lab. |
| Coverslips | Fisherbrand | 12-545-F | To coverslip the slides. Can use any coverslips used in the lab. |
| Dietary Supplementation | |||
| Broccoli Sprouts seeds | Mumm's Sprouting Seeds | Broccoli sprouts seeds are ordered and grown in the lab. | |
| Countertop Seed Sprouter Box | Mumm's Sprouting Seeds | A box is used to germinate and grow the seeds prior to harvest. | |
| 250 mL beaker | The beaker is used to soak the seed. Any size beaker that would fit can be used. | ||
| Maternal Inflammation | |||
| Lipoplysaccharide (LPS) | Sigma | L3129 | The endotoxin used to mimic maternal inflammation. |
| 1 mL Syringe | BD Syringe | 309659 | Used to inject the pregnant rat. |
| Gauge (30 G x 1/2) | BD PrecisionGlide Needle | 305106 | Use the smallest needle to avoid pain and discomfort. |
| Sterile Saline (0.9% Sodium Chloride, USP) | Hospira | Saline is used to dissolve LPS. | |
| Weights | |||
| Scale | Denver Instrument | For recording the weights. Can be any scale with 2 decimal places used in the lab. | |
| Neurodevelopmental Reflexes | |||
| Thin blunt rod | Can be a paperclip or toothpick. This is for forelimb and hindlimb grasping. | ||
| Round filter paper | Whatman | 1001 150 | 15 cm diameter paper used for gait analysis. |
| Timer | Fisher Scientific | 06-662-51 | For timing the time allocated to righting and gait. |
| Blunt surface | Can be an edge of a table. This is for hindlimb placing and cliff avoidance. | ||
| Foam landing | For when the pups perform accelerated righting. | ||
| Video recorder | Sony | VCT-D580RM | To record all reflexes tested. Must be able to record at 1/1,000 fps |
| Bell | For auditory startle. | ||
| Heat lamp or pad | To maintain the body temperature of the pups underoing examination. |
References
- Farber, J. M., Shapiro, B. K., Palmer, F. B., Capute, A. J. The diagnostic value of the neurodevelopmental examination. Clin Pediatr (Phila. 24 (7), 367-372 (1985).
- Zafeiriou, D. I. Primitive reflexes and postural reactions in the neurodevelopmental examination). Pediatr. Neurol. 31 (1), 1-8 (2004).
- Clancy, B., Finlay, B. L., Darlington, R. B., Anand, K. J. S. Extrapolating brain development from experimental species to humans. Neurotoxicology. 28 (5), 931-937 (2007).
- Dobbing, J., Sands, J.
- Semple, B. D., Blomgren, K., Gimlin, K., Ferriero, D. M., Noble-Haeusslein, L. J. Brain development in rodents and humans: Identifying benchmarks of maturation and vulnerability to injury across species. Prog. Neurobiol. , (2013).
- Dobbing, J., Sands, J. Quantitative growth and development of human brain. Arch. Dis. Child. 48 (10), 757-767 (1973).
- Tucker, A. M., Aquilina, K., Chakkarapani, E., Hobbs, C. E., Thoresen, M. Development of amplitude-integrated electroencephalography and interburst interval in the rat. Pediatr. Res. 65 (1), 62-66 (2009).
- Dean, J. M., et al. Strain-specific differences in perinatal rodent oligodendrocyte lineage progression and its correlation with. Dev. Neurosci. 33 (3-4), 251-260 (2011).
- Back, S. A., Riddle, A., McClure, M. M. Maturation-dependent vulnerability of perinatal white matter in premature birth. Stroke. 38, 724-730 (2007).
- Back, S. A., et al. Late oligodendrocyte progenitors coincide with the developmental window of vulnerability for human perinatal white matter injury. J. Neurosci. 21 (4), 1302-1312 (2001).
- Downes, N., Mullins, P.
- Jakovcevski, I., Filipovic, R., Mo, Z., Rakic, S., Zecevic, N. Oligodendrocyte development and the onset of myelination in the human fetal brain. Front. Neuroanat. 3 (5), (2009).
- Fox, W. M. Reflex-ontogeny and behavioural development of the mouse. Anim. Behav. 13 (2), 234-241 (1965).
- Lubics, A., et al. Neurological reflexes and early motor behavior in rats subjected to neonatal hypoxic-ischemic injury. Behav. Brain Res. 157 (1), 157-165 (2005).
- Futagi, Y., Toribe, Y., Suzuki, Y. The grasp reflex and moro reflex in infants: hierarchy of primitive reflex responses. Int. J. Pediatr. , 191562 (2012).
- Hashimoto, R., Tanaka, Y. Contribution of the supplementary motor area and anterior cingulate gyrus to pathological grasping phenomena. Eur. Neurol. 40 (3), 151-158 (1998).
- Isaza Jaramillo, S. P., et al. Accuracy of the Babinski sign in the identification of pyramidal tract dysfunction. J. Neurol. Sci. 343 (1-2), 66-68 (2014).
- Donatelle, J. M. Growth of the corticospinal tract and the development of placing reactions in the postnatal rat. J. Comp. Neurol. 175 (2), 207-231 (1977).
- Palanza, P., Parmigiani, S., vom Saal, F. S. Effects of Prenatal Exposure to Low Doses of Diethylstilbestrol, o,p'DDT and Methoxychlor on Postnatal Growth and Neurobehavioral Development in Male and Female Mice. Horm. Behav. 40 (2), 252-265 (2001).
- Pantaleoni, G. C., et al. Effects of maternal exposure to polychlorobiphenyls (PCBs) on F1 generation behavior in the rat. Fundam. Appl. Toxicol. 11 (3), 440-449 (1988).
- Yeomans, J. S., Frankland, P. W. The acoustic startle reflex: neurons and connections. Brain Res. Rev. 21 (3), 301-314 (1995).
- Vinay, L., Brocard, F., Clarac, F. Differential maturation of motoneurons innervating ankle flexor and extensor muscles in the neonatal rat. Eur. J. Neurosci. 12 (12), 4562-4566 (2000).
- Geisler, H. C., Westerga, J., Gramsbergen, A.
- Heinen, K., et al. Gabaa receptor maturation in relation to eye opening in the rat visual cortex). Neuroscience. 124 (1), 161-171 (2004).
- Whishaw, I. Q., Gorny, B., Foroud, A., Kleim, J. A. Long-Evans and Sprague-Dawley rats have similar skilled reaching success and limb representations in motor cortex but different movements: some cautionary insights into the selection of rat strains for neurobiological motor research. Behav. Brain Res. 145 (1-2), 221-232 (2003).
- Prusky, G. T., Harker, K. T., Douglas, R. M., Whishaw, I. Q. Variation in visual acuity within pigmented, and between pigmented and albino rat strains. Behav. Brain Res. 136 (2), 339-348 (2002).
- Wu, L., et al. Dietary approach to attenuate oxidative stress, hypertension, and inflammation in the cardiovascular system. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (18), 7094-7099 (2004).
- Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual restraint and common compound administration routes in mice and. J. Vis. Exp. (67), (2012).
- Rousset, C. I., et al. Maternal exposure to lipopolysaccharide leads to transient motor dysfunction in neonatal rats. Dev. Neurosci. 35 (2-3), 172-181 (2013).
- Nguyen, A. T., Bahry, A. M. A., Shen, K. Q., Armstrong, E. A., Yager, J. Y. Consumption of broccoli sprouts during late gestation and lactation confers protection against developmental delay induced by maternal inflammation. Behav. Brain Res. 307, 239-249 (2016).
- Black, A. M., Armstrong, E. A., Scott, O., Juurlink, B. J., Yager, J. Y. Broccoli sprout supplementation during pregnancy prevents brain injury in the newborn rat following placental insufficiency. Behav. Brain Res. 291, 289-298 (2015).
- Wainwright, P. E. Issues of design and analysis relating to the use of multiparous species in developmental nutritional studies. J. Nutr. 128 (3), 661-663 (1998).
- Lazic, S. E., Essioux, L. Improving basic and translational science by accounting for litter-to-litter variation in animal models. BMC Neurosci. 14, 14-37 (2013).
- Sergio, D. P., Sanchez, S., Ruben, V. R., Ana, B. R., Barriga, C. Changes in behaviour and in the circadian rhythms of melatonin and corticosterone in rats subjected to a forced-swimming test. J Appl Biomed. 1 (47), (2005).
- Castelhano-Carlos, M., Baumans, V. The impact of light, noise, cage cleaning and in-house transport on welfare and stress of laboratory rats. Lab. Anim. 43 (4), 311-327 (2009).
- Zimmerberg, B., Ballard, G. A., Riley, E. P. The development of thermoregulation after prenatal exposure to alcohol in rats. Psychopharmacology (Berl. 91 (4), 479-484 (1987).
- Fan, L. W., et al. Hypoxia-ischemia induced neurological dysfunction and brain injury in the neonatal rat). Behav. Brain Res. 165 (1), 80-90 (2005).
- Smart, J. L., Dobbing, J. Vulnerability of developing brain. VI. Relative effects of foetal and early postnatal undernutrition on reflex ontogeny and development of behaviour in the rat. Brain Res. 33 (2), 303-314 (1971).
- Fox, M. W. Neuro-Behavioral ontogeny: A synthesis of ethological and neurophysiological concepts. Brain Res. 2 (1), 3-20 (1966).
- Piper, M. C., Mazer, B., Silver, K. M., Ramsay, M. Resolution of neurological symptoms in high-risk infants during the first two years of life. Dev. Med. Child Neurol. 30 (1), 26-35 (1988).
- Shiotsuki, H., et al. A rotarod test for evaluation of motor skill learning. J. Neurosci. Methods. 189 (2), 180-185 (2010).
- Vorhees, C. V., Williams, M. T. Morris water maze: procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory. Nat. Protoc. 1 (2), 848-858 (2006).
- Walf, A. A., Frye, C. A. The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents. Nat. Protoc. 2 (2), 322-328 (2007).
