Summary
このプロトコルは、ラットに 1 吻合胃バイパス (OAGB) の性能です。オペレーターは、手縫い吻合続いて長く、管状ホチキス止め胃ポーチを実行します。このモデルのオペレーターは胆道膵と人間; 一般的な肢の同じ比率を再現します。したがって、胆道膵肢は 35 センチメートルを測定します。
Abstract
このプロトコルの目標は、肥満症治療手術より具体的には、肥満ラットにおける OAGB の前臨床モデルを設定することです。この前臨床モデルに基づいて、縦断研究可能人間の肥満症治療手術後見られる成果の基になるメカニズムの理解の改善を提供します。この目的のためにラットが操作とイソフルレン麻酔下で開腹。まず、外科医は長く、管状の胃ポーチを作成します: 大きい曲線と裂孔の郭清後、nonglandular の胃はホチキス止め、削除します。その後、残りの胃は胃管を作成し、胃の幽門部を除外するためにホチキス止めも。その後、外科医は下の角度から単一の端-側吻合 35 cm を実行します。この下肢の長さは、胆道膵肢 (BPL) と人間の肥満症治療手術と同様に一般的な肢 (CL) の長さの比を再現するために選ばれています。腱膜性と皮膚閉鎖操作を終了します。初期の術後管理は皮下水分補給、筋肉内の予防的抗生物質投与、キシロカイン、鎮痛剤の投与と食事療法の進歩的な野生復帰の頭頂部の注入から成っています。
Introduction
病的肥満は増加する有病率1と、西部の世界で主要な健康問題です。肥満手術は、病的肥満の2肥満に伴う合併症3の明確な利点を持つ唯一の長期治療を残っています。ルー-EN-Y 胃バイパス (RYGB) 残る金本位最古の手順のいずれか、ほとんど実行の 1 つとして世界最長のフォロー アップ4。OAGB は、ラトリッジ52001年で最初に説明最近の手順です。それは RYGB6に効果的な代替として記載されているし、いくつかの利点があります。初期データは、体重減少と併存疾患の肥満関連6、7の解像度に関して RYGB に同様の有効性を示します。さらに、RYGB の jejunojejunal 吻合の漏れや狭窄のリスクは回避され、内ヘルニアのリスクが RYGB8よりも低い可能性があります。
肥満手術後の重量損失の基礎となる生理学的メカニズムは残る論争と人間9で勉強することは困難。動物モデルがどのように肥満手術を理解するのに役立ちます糖代謝、神経内分泌の変更、または満腹感のメカニズムに影響を与える可能性があります。プロシージャ間の比較データが不足していると、これらの手術の長期的な影響より良い理解10する必要があります。完全に術前・術後の臨床ケアを標準化することが可能だし、満足のいくフォロー アップを達成するために困難にすることができます: 最初の年11の 30% としていくつか研究レポートの損失-に-フォロー アップの率します。
胃バイパス手術の概念は適度な吸収不良、胃腸管内輸送から近位空腸十二指腸の除外に伴うと胃ポーチを作成するための限定的なプロシージャの組み合わせ。現在、肥満手術における下肢長はまだ議論12,13の問題です。使用可能なデータ表示のプロシージャおよびコンセンサスは得られなかった高い可変性に OAGB14,15に最適な下肢長にまだ達した。それにもかかわらず、多くの著者は、OAGB16,17,18の標準として全長 200 cm BPL を報告しています。小腸の平均の長さは約 700 cm19です。
袋サイズ、手足の長さ、および迷走神経の保存の面で大きな変化と、世界20RYGB のいくつかの齧歯動物モデルを開発しました。しかし、非常に少数の著者報告モデル実験 OAGB;このため、研究チームは、肥満の外科医と共同で OAGB のモデルを開発しました。モデルの開発の後ろの理論的根拠は、人間で練習される胃のバイパスを模倣することでした。モデルには、前庭部と胃体の除外で胃嚢の構造が組み込まれています。それは、外科医のステープル デバイスを使用して nonglandular 胃切除になります。人間の手術21のルーチンは、以前のプロトコル20と比較して、罹患率を減らすために手術ごとの予防的抗生物質治療を追加することを決めたチーム胃腸吻合にリンクされています。
BPL と人間で CL 比を再現するこのモデルで使用されるラット下肢長が選ばれました。予備測定は、90 と 120 cm22の間にあるラットの総小腸の長さを示しています。その結果、OAGB の選ばれた BPL の長さ 35 cm であった。さらに、このモデルは、胃ポーチ虚血を回避するすべての血管結紮することがなく実用的です。
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Protocol
すべての動物使用欧州共同体ガイドラインに適合したし、ローカル倫理委員会によって承認された (Comité d'éthique アン expérimentation animale N ° 121) 省の高等教育と研究 (Ref #02285.03)。
1. 動物とダイエット
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ラット
- 260 320 g、高脂肪食 (HFD) 7 週齢で開始の重量を量る Wistar ラットを使用します。
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ダイエット
- 食餌誘導性肥満、HFD の術前数週間、少なくとも 12 を誘発します。水と HFD をラットの無料のアクセスを与えます。
注: HFD は、45% を含んでいる精製所 hypercaloric 齧歯動物ダイエット脂肪 (材料の表を参照してください)。 - ラットが 600-800 g の間で重量と、手術の時に肥満であることを確認します。
- 食餌誘導性肥満、HFD の術前数週間、少なくとも 12 を誘発します。水と HFD をラットの無料のアクセスを与えます。
2. 材料
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手術用機器
- オートクレーブ手術前にすべての手術器械。
- 手続きに必要なすべての手術器具をレイアウト (材料の表を参照してください)。
- 従来、顕微鏡下の楽器を使用して、拡大鏡下で吻合を実行します。
- ラットは、37 ° C の熱ランプの下で温度で温暖化のプレートに配置されることを確認します。必要に応じて、等温の電気基板を配置します。
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麻酔と動物の準備
- 齧歯動物で麻酔導入のための空気で 3% 集イソフルレンの吸入ラットを麻酔します。
- 温暖化のプレートにラットを転送および 3% 同じ流量でフェイス マスクで麻酔を維持します。動物の尻尾をつまんで、anesthetization が完了したことを確認します。
- 開腹術の切開ゾーン、~ 3 cm に対応する前方の毛皮を剃る-電気かみそりを使用して動物の骨盤に、剣から広いゾーン。
- 動物の首を中心とした動物の背中に 3 cm 幅のゾーンを剃る。この手順は、単極パワー伝導を促進します。
- サイト運営上、アルコール ベースの消毒液をスプレーします。
3. 手術
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開腹
- 剃毛の皮膚にアルコール ベースのローカル防腐剤を適用します。
- メスで長さ約 3 センチの剣状突起から正中皮膚切開で腹部を開きます。筋膜と腹膜に沿って開く、リネア アルバ単極メスを使用します。
- 皮膚切開の長さ全体に腹膜腔を開くことを確認します。
自己リトラクターで腹腔内を公開します。
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大きいカーブと裂孔の解剖
- 外科はさみと腹部食道の左側に腺および nonglandular 胃間の接合部から大きい胃曲線を解剖します。
- 徐々 に、彼の偉大な胃曲線を完全に解放するためにモノポーラのメスと胃脾血管を凝固角度。薄い靭帯の切断によって食道裂孔の周辺は、公開します。
- 左胃動脈と迷走神経神経、手動凝固切開装置を使用して維持、腹部食道の右側を解剖します。
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胃の袋菓子
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Nonglandular 胃切除
- 適用 35 mm ステープル胃食道接合部の左側にある胃腺と nonglandular 間の接合部 (材料の表を参照) を銃。Nonglandular 胃をホッチキスの右側にあるを確認します。
- 銃を発射し、nonglandular 胃を削除します。
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胃ポーチ
- 開腹 (TA) デバイス (3 〜 3.5 mm) を使用して 2 番目のホッチキスを適用、最初ステープルの前庭部と胃体部を除外する胃食道接合部の右側に平行に (材料の表を参照してください)。
- 定番の 2 行の結果が胃ポーチ幅約 0.5 cm であることを確認します。
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Nonglandular 胃切除
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OAGB
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小腸の測定
- 下の角度を探します。近位空腸は小腸部分のコロンの内側の部分の下にあります。ラット小腸のだけ非モバイルの一部です。
- 5 cm 長いテープで下の角度から 35 cm を手動で測定します。対側腸の punctiform 結石を実行します。
-
主吻合
- 胃嚢の大きい曲線側をモノポーラ メス punctiform 胃を実行、正確に前の 2 つの定番ライン。胃ポーチが完全でない場合は、空、それを空にする胃ポーチに手動で穏やかな圧力を実行します。
- 非外傷性鉗子と小さな針ホルダー側に主吻合を行います。
- 7-0 アイソタクチックポリプロピレンの 2 つの下肢ステッチで縫合を開始 (材料の表を参照)、結石の四肢と胃の両端を縫合します。
- その後、2 下肢ステッチで使用される同じスレッド、吻合部のそれぞれの側に 2 つ実行縫合を実行します。必要な場合は、操縦を容易にする吻合を返します。近くに配置することによって吻合の品質ステッチ、少なくとも 7 または 8 吻合部の両側を確認します。
- すべてのステッチの 1 mm 幅の漿膜を取る。ステッチでそっと縫合中腸と胃の粘膜を埋めるために、粘膜の服用を避けます。
注: この結果は左側の胆道膵下肢と右の消化 (AL)/CL terminolateral 主吻合です。吻合部は胃ポーチに穏やかな圧力と透過性を確認します。
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小腸の測定
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閉鎖と即時ケア
- 0.9 %nacl 水溶液で腹腔内を洗浄し、手動で、生理学的な位置に腹部臓器を置き換えます。
- すぐの 1 つ実行縫合と腹壁はポリエステル縫合糸 2-0 (材料の表を参照してください) 古典のニードル ホルダーを編みこみ。
- Polyglactin 910 4-0 (材料の表を参照) の 1 つの実行縫合で皮膚を閉じます。
- 術中の各側にリドカイン 1% の 2 つの頭頂部注射を実行します。直腹筋の腱膜にリドカイン 1 %1 mL/kg の総線量を管理します。
4. 術後のケア
- 20,000 単位/kg ペニシリン g. の筋肉内注射を行う
- 等張性高分子ソリューション カリウム (KCl/L の 2 g、4 g/L の NaCl の 50 g のグルコース/L) の 10 mL の皮下注射を行います。この注射でブプレノルフィン (0.1 mg/kg) やメロキシカム (2 mg/kg) など適切な鎮痛剤と混合することが可能です。
- ランプがウォーム アップまで完全に目を覚ましている個々 のケージにラットを配置します。
- よく適切な鎮痛と水和 (等張性高分子溶液) 術後治療を管理するために動物を検査します。
- 適切な鎮痛薬を注入、ブプレノルフィン (0.1 mg/kg) およびメロキシカム (2 mg/kg)、皮下から即時術後期間日 4、12 時間間隔をそれまでいます。
- 1 日目の中に水への無料アクセスとラットを維持します。日に 2/3 無料で液体ダイエットへのアクセスを与える。4 日目、通常の食事にそれら自由アクセスを与えます。
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Representative Results
このプロトコルを再現して人間の実践として OAGB を模倣しています。このプロトコルの安全性は、パブリッシュされたデータ23,24低死亡率 12% と 25% の間でサポートされます。同様の死亡率と研究チームの別の外科医は、このプロトコルを実践しています。
それにもかかわらず、学習齧歯動物の手術は複雑であり、拡大鏡の使用は必須です。確かに、顕微鏡吻合の建設の重要なステップには、最適な器用さに到達する約 15 に 20 操作から学習期間が必要です。手術の欠陥は、我々 の経験で主な死亡原因である胃閉塞の縫合につながります。成功へもう一つの鍵は術後栄養物;確かに、早い術後固体栄養物は、危険です。このプロトコルは、安全であることが実証されている正確な術後栄養のプロトコルを提供します。この手術の人間およびラットの概念は図 1に示します。犠牲後操作の結果は図 2で示されます。
肥満ラットでの操作、約 20% の体重減少と人間観察にかなり類似していた後の減量の結果は、術後後安定しました。結果は、図 3に記載されています。経口ブドウ糖試験 (OGTT)、インスリン耐性によって assayed として、手術後 2 週間テスト (ITT) すぐによりよいインスリン感受性と耐糖能が認められました。これらの結果は、図 4に記載されています。HFD が誘発する肥満は Wistar ラット25; 耐糖能およびインスリン抵抗性を促進するために記載されています。比較可能なデータ (未発表) 私たちのユニットで収集されました。ラットは、2 型糖尿病モデルではありません。
図 1: OAGB 人間とラットのこのモデルの図。人間の OAGB の (A) 方式胃ポーチは長く、管状および BPL 150 〜 200 cm (B) ラット モデル、OAGB の間で測定します。BPL の AL/CL 比人間手術の練習を再現します。BPL 計測 35 cm。 略語: GP = 胃ポーチ。アナ = 吻合;アル = 消化手足。CL = 一般的な手足。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2: 犠牲後ラットの OAGB のイラスト。略語: GP = 胃ポーチ。アナ = 吻合;アル = 消化手足。CL = 一般的な手足。Oes = 食道;デュオ = 十二指腸この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3: 術後 OAGB 後進化 (平均 ± SD) を重量し、偽手術。偽手術非外傷性鉗子で開腹し, と偉大な胃曲線上のピンチから成ってください。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 4: OAGB の後のグルコース代謝と偽手術; 術後 OGTT と ITT 。(A) 術後 OGTT。OAGB と偽のラット経口ブドウ糖耐性を受ける前に高速テストを行った (OGTT: 1 g/kg 体重)。(B) 手術後 ITT: 1 U インスリン/kg 体重の投与。ラットは、インスリン注射を受ける前に高速の 4 h に行われました。尾静脈血を採取したt = 0、10、20、30、60、およびインスリンやブドウ糖の投与後 120 min。血糖値は、血糖測定器を用いて測定しました。血糖は、mg/dL ± 標準偏差で表現しました。略語: OGTT 経口ブドウ糖負荷試験; =ITT = インスリン負荷試験;BW = 体重。p < 0.05 * * p < 0.01 * * * p < 0.001;双方向分散分析統計の後をテストします。偽手術は、非外傷性非外傷性鉗子を使用して偉大な胃曲線ひとつまみと、開腹から成っていた。すべてのデータは、平均 ± SD. として掲載されてこの図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
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Discussion
このプロトコルには、OAGB 人間で定期的に練習を模倣するという利点があります。その安全性とラットにおける再現性は臨床的、代謝の結果で実証されています。
このプロトコルでは吻合は技術的な難しさを提起、メインの重要なステップです。このため、マイクロサージャリーの針ホルダーやルーペなど、特定の顕微鏡下ツールを使用する必要です。任意の狭窄なしハーメチック吻合を実現するために吻合部のそれぞれの側で少なくとも 7 ~ 8 近い縫合を実行し、任意のステッチの縫合中、それを埋めるために任意の粘膜の服用を避ける必要があります。前述の通り、痛み、動物福祉、進歩的な術後栄養の効果的な管理は必須です。
しかし、このプロトコルには、いくつかの制限があります。まず、外科的アプローチは、動物のサイズが小さいため、腹腔鏡ではなく開腹手術です。胃嚢の右側の区分がないです。この選択は、技術的な理由のためにしました。それにもかかわらず、胃ポーチの repermeabilization は観察されていない 15 術後数週間後。さらに、ラットの制限的効果を模倣非常に難しい自由食糧へのアクセスを維持しながら。動物は、胃ポーチ22,24の拘束の効果を相殺するために経口摂取の頻度を増やすことがあります。さらに、ラットの nonglandular 胃は切除しない場合大幅伸長可能に知られているに対し、人間の外科で胃切除術はありません。
人間の手術を密接に模倣の齧歯動物の OAGB のプロトコルまで公開されている他のチームによって。このプロトコルは、手術の可能性、安全性、および臨床的意義の良いバランスを提供しています。
このメソッドを将来使用 RYGB 前後 OAGB 理論的な悪性腫瘍のリスクの増加と RYGB に比べて OAGB の高い変える malabsorptive 効果など、人間の生理の変化を強調します。
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Disclosures
著者が明らかに何もありません。
Acknowledgments
著者は彼の定数のヘルプとサポートのジャン ・ ピエール Marmuse を感謝したいです。エグランタイン Voitellier、ジャン = バティスト ・ Cavin、およびモデルと、イラストの設定 Houneyda エル金地アン シャーロット ジャリ、Andreia ゴンサルヴェスのビデオ;サラ ・ j ・ Zaat 英語でテキストを編集します。マチュー A. シーベルトとララ リベイロ Parenti 後援、財団からの受信者を注ぐラ精選された médicale (FRM) および協会・ フランセーズ ・ デ ・よう (AFC) であった。
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
High-Fat Diet, 45 % fat | Genestil, Royaucourt, France | C 1090-45 | http://www.genestil.com/ |
Metzenbaum Scissors | World Precision instrument, Sarasota, US | 501739 | https://www.wpi-europe.com |
Dumont Tweezers | World Precision instrument, Sarasota, US | 14098 | https://www.wpi-europe.com |
Iris Forceps | World Precision instrument, Sarasota, US | 15915 | https://www.wpi-europe.com |
Iris Scissors 10cm | World Precision instrument, Sarasota, US | 14218 | https://www.wpi-europe.com |
Needle Holder | World Precision instrument, Sarasota, US | 14110 | https://www.wpi-europe.com |
Alm Self Retaining Retractor | World Precision instrument, Sarasota, US | 14240 | https://www.wpi-europe.com |
Baby Mixter Hemostatic Forceps, Right Angle | World Precision instrument, Sarasota, US | 501240 | https://www.wpi-europe.com |
Non woven sterile swabs | LCH Medical Products, Paris, France | SN40-0755 | www.lch-medical.com |
Galilean Binocular Loupe 2.5x | World Precision instrument, Sarasota, US | 504056 | https://www.wpi-europe.com |
Digestive thread: Isotactic polypropylene, monofil Prolene 7-0 | Ethicon, Issy les Moulineaux, France | EH7813E | www.ethicon.com |
Parietal thread : Coated Braided Polyester Ti-Cron 2-0 | Covidien, Mannsfield, MA, USA | 3003-52 | www.covidien.com |
Cutaneous thread : Polyglactin, VICRYL RAPIDE 4-0 | Ethicon, Issy les Moulineaux, France | VR3100 | www.ethicon.com |
ETS-Flex 35- mm staple gun | Ethicon, Issy les Moulineaux, France | ATS45 | www.ethicon.com |
Proximate Reloadable Staplers | Ethicon, Issy les Moulineaux, France | XR30V | www.ethicon.com |
TA-DST 30mm-3.5mm | Ethicon, Issy les Moulineaux, France | TX30B | www.ethicon.com |
Alcoholic 5% Betadine | MEDA Pharma, Merignac, France | 41085 | www.medapharma.fr |
LIDOCAINE AGUETTANT 20 mg/ml | LABORATOIRE AGUETTANT, Lyon, France | 3400940000000.0 | https://www.aguettant.fr |
Penicillin G 5MUI | Panpharma, Luitre, France | 3.40E+12 | https://www.panpharma.eu/fr |
Bionolyte G5 ; Sodium chloride 0.4%, glucose 5%, potassium chloride 0.2%) | Baxter, Maurepas, France | ||
Liquid diet | Genestil, Royaucourt, France | C-0200T | http://www.genestil.com/ |
Isoflurane 100% | Centravet, Plancoet, France | ISO007 | http://cooperative.centravet.net |
References
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