Name: Assay Métastases expérimentales (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-08-24T17:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: Apprenez un essai de métastases expérimentales pour évaluer le potentiel métastatique des lignées cellulaires cancéreuses humaines par injection dans la veine de la queue chez des souris immunodéficientes.

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Ce protocole a été testé et optimisé initialement dans le laboratoire du Dr Richard Hynes (MIT). Le financement est assuré par le prix IDEA NYSTEM (à LX) et Ruth L. Kirschstein Prix national Research Service (à LX).

1. Préparation des échantillons <ol><li> Cultiver des cellules confluentes à ~ 70% dans leurs médias spécifiques avec des facteurs de croissance ou de FBS (par exemple, DMEM avec du FBS à 10% pour le MC-1 cellules). Aspirer des médias de la plaque et laver délicatement à plusieurs reprises avec 1 x PBS (8 g / L de NaCl, 0,2 g / L de KCl, 1,15 g / L de Na 2 HPO 4 .7 H 2 O, 0,2 g / L de KH 2 PO 4, pH 7,3). </li><li> Aspirer PBS et ajouter 2 mL de trypsine à 0,05% en versène (0,014 g / L de rouge de phénol et 0,2 g / L d'EDTA-Na dans 1 x PBS, pH 7,2). Secouez doucement la plaque pour faciliter le détachement des cellules de la plaque. Observez les cellules sous un microscope. Il prend généralement 2-5 minutes pour les cellules à se détacher. </li><li> Ajouter un volume suffisant de médias contenant FBS (ou inhibiteur de la trypsine de soja) pour étancher l'activité de la trypsine et de recueillir les cellules dans un tube de 50 ml faucon. Compter les cellules en utilisant un hématimètre. Charge 10 pi de suspension cellulaire sur un hématimètre propre. Le nombre de cellules par mL est égal à la moyenne # des cellules dans chacune des cinq carrés multipliée par 10 4. </li><li> Centrifuger les cellules à 1000 RPM (ou ~ 200 xg) dans une centrifugeuse de paillasse pendant 3 minutes. </li><li> Retirez délicatement les médias, sans perturber le culot cellulaire. Resuspendre les cellules dans un volume approprié de solution tampon Hanks Balanced (HBSS) pour atteindre une concentration finale de ~ 5 x 10 6 cellules / ml. </li><li> Filtrer à travers les cellules d'un Falcon 70 tamis cellulaire um d'exclure des agrégats à grandes cellules. Placez l'extrémité de la pipette directement sur le filtre sur un tube étiqueté culture 5mL Falcon. Vite éjecter la suspension à travers le filtre dans le tube de culture. </li><li> Compter les cellules de nouveau en utilisant un hématimètre et les diluer à une concentration finale de 2,5 x 10 6 / mL. Gardez les cellules sur la glace. </li><li> Déterminer la viabilité des cellules. Mélanger quelques cellules au bleu trypan et de mesurer le pourcentage de morts (en bleu) des cellules sur les cellules total en utilisant un hématimètre. La viabilité des cellules doit être ≥ 90% avant l'injection. </li></ol> 2. Injection par voie intraveineuse <ol><li> Changer de gants. Doucement attraper la queue d'une souris immunodéficientes (nude, NOD-SCID, ou GFN, Laboratoire Jackson) et tirez dans le dispositif de retenue de la souris, avec son dos contre la fente et sa queue qui sortait de la petite ouverture dans le dos de la de contention . </li><li> Faites glisser lentement vers l'intérieur de l'anneau le long de la fente et le verrouiller en place une fois l'anneau des prises de l'embouchure de la souris. La souris ne doit pas être en mesure de se déplacer librement, mais doivent avoir le taux normal de la respiration. </li><li> Trouvez les veines de la queue majeur. Quatre vaisseaux sanguins principaux sont présents dans une queue de souris. Les vaisseaux sanguins sur les côtés dorsale et ventrale de la queue sont les artères. Les veines sont sur les côtés latéraux de la queue. </li><li> Attirer plus de 200 ul de cellules préparées dans une seringue 1ml. Fixez l'aiguille 30 G 1 / 2 pouce et pousser les bulles d'air qui peuvent exister. Le volume final de cellules dans la seringue doit être 200 uL (soit 5 x 10 5 cellules au total). </li><li> Injecter des cellules dans la veine de la queue. <ol class="lalpha"><li> Démarrer à partir de l'extrémité distale de la queue, donc si le premier essai échoue, une région plus proximale de la queue pourrait être utilisé pour un deuxième essai. </li><li> Essuyez la queue avec 70% d'éthanol. Tirez sur la queue droite. Maintenez la pointe de la queue avec le pouce et l'appui du point d'injection avec l'index. </li><li> Insérez l'aiguille de la veine et injecter les cellules. Assurez-vous que l'aiguille et la seringue sont parallèles à la veine lors de l'injection, sinon l'aiguille se pointer à travers la paroi du vaisseau et d'injecter les cellules dans les tissus adjacents queue. </li><li> Retirez l'aiguille après l'injection. Le sang doit abondante à partir du site d'injection si l'injection est allé avec succès. Appuyez sur un morceau propre de serviette en papier ou un coton tige sur le site d'injection pour faciliter la coagulation, et palper la queue vers le haut pour pousser tout échantillon résiduel dans la veine en circulation. </li><li> Relâchez la souris à partir du dispositif de retenue et de le retourner à la cage. Enregistrez le processus d'injection (par exemple, combien d'essais il a fallu à injecter les cellules et combien cellules ont été injectées) dans un cahier de laboratoire. </li><li> Déterminer la viabilité des cellules après l'injection, comme décrit dans la Section de préparation des échantillons, étape 9. Cette étape permet de rassurer que les cellules rester en vie tout au long du processus d'injection. A la fin d'une expérience d'injection, la viabilité des cellules vont diminuer, mais devrait être supérieure à 80%. </li><li> (Optionnel) Isoler les cellules et rincer les restes les boulettes avec du PBS fois. Congelez les boulettes à -80 oC pour les analyses futures (par exemple, Western blot pour confirmer l'expression des gènes ou des passes rabattues). </li></ol></li><li> Généralement, après un ou deux mois, les souris seront disséqués et les emplacements des métastases sont grossièrement déterminée. Du poumon est le site principal de métastases, car il contient le premier lit capillaire que les cellules après leur rencontrepénétrer dans la circulation. </li><li> Après rinçage avec du PBS, chaque lobe du poumon (ou d'autres tissus contenant des métastases) est observé sous un microscope à dissection (figure 1). Le nombre de métastases décelables sur les deux côtés du poumon est compté et le nombre de métastases pulmonaires sur l'ensemble des quatre lobes sont ajoutées comme le nombre total de métastases pulmonaires. 1 métastases pulmonaires sont plus facilement détectées si les poumons sont fixés dans le formol durant la nuit , puisque les métastases se apppear que taches blanchâtres, contrairement à l'sombres adjacents tissus pulmonaires brun. </li></ol> 3. La culture de cellules de métastases pulmonaires <ol><li> Métastases pulmonaires sont isolés de souris injectées. Chacun doit être cultivées séparément. </li><li> Chaque métastase est hachée par la fin d'un capuchon de l'aiguille (stérile) sur un tamis 70 pm cellule. </li><li> Rincer la crépine de cellule avec plusieurs mls de milieu et les cellules recueillies qui passent par le filtre dans une boîte de culture. </li><li> Incuber les cellules à 37 ° C pendant au moins quatre jours sans perturbation. </li><li> Laver le sang ou les débris de tissu sur le plat avec du PBS. </li><li> Ajouter un milieu frais. Au début, les cellules cancéreuses et les cellules fibroblastes se développent sur les plaques, mais progressivement, les cellules de fibroblastes va mourir et être remplacées par des cellules cancéreuses. Si les cellules cancéreuses portent pas de gènes résistant aux médicaments, sélectionnez les cellules avec des antibiotiques correspondants. </li><li> La pureté des cellules dérivées est évaluée par immunomarquage utilisant des anticorps contre des protéines spécifiques de l'homme. Nous utilisons un anticorps anti-vimentine humaine (NCL-VIM-V9, Novocastra). Les cellules nous avons dérivé contiennent typiquement plus de 99% de cellules humaines, même en l'absence de sélection des médicaments. Les cellules nouvellement obtenues pourraient être injectés dans des souris immunodéficientes nouveau de tester leurs capacités métastatiques, comme décrit ci-dessus. </li></ol> 4. Les résultats représentatifs <ol><li> A la fin de cet essai, une ligne du cancer métastatique des cellules hautement donne habituellement lieu à de nombreuses métastases pulmonaires (figure 1), 1 alors que les métastases pulmonaires très peu proviennent d'une lignée de cellules cancéreuses métastatiques mal. </li><li> Les cellules obtenues à l'aide de cette méthode donne généralement lieu à plus de métastases que la lignée parentale, quand ils sont testés à nouveau en utilisant ce dosage. 1-3 </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1942/1942fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Images représentant la figure 1. Des poumons de souris après des injections dans la veine caudale des cellules cancéreuses. 5 x 10 5 de la ligne de mélanome métastatique de cellules humaines, cellules SM, 4 ont été injectés dans la veine de la queue des souris immunodéficientes. Deux mois plus tard, les poumons ont été isolées et les métastases ont été trouvés dispersés parmi le tissu pulmonaire normal.

<ol><li>Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+changes+in+an+animal+melanoma+model+correlate+with+aggressiveness+of+human+melanoma+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases.</a> Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).</li>
<li>Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+analysis+of+metastasis+reveals+an+essential+role+for+RhoC%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genomic analysis of metastasis reveals an essential role for RhoC.</a> Nature. 406 (6795), 532-532 (2000).</li>
<li>Xu, L., Begum, S., Hearn, J. D., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPR56%2C+an+atypical+G+protein-coupled+receptor%2C+binds+tissue+transglutaminase%2C+TG2%2C+and+inhibits+melanoma+tumor+growth+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">GPR56, an atypical G protein-coupled receptor, binds tissue transglutaminase, TG2, and inhibits melanoma tumor growth and metastasis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (24), 9023-9023 (2006).</li>
<li>Kozlowski, J. M., Hart, I. R., Fidler, I. J., Hanna, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+human+melanoma+line+heterogeneous+with+respect+to+metastatic+capacity+in+athymic+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">A human melanoma line heterogeneous with respect to metastatic capacity in athymic nude mice.</a> J Natl Cancer Inst. 72 (4), 913-913 (1984).</li>
<li>Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multigenic+program+mediating+breast+cancer+metastasis+to+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone.</a> Cancer Cell. 3 (6), 537-537 (2003).</li>
</ol>

Les métastases sont la principale cause de décès chez les patients atteints de cancer. Elle comporte quatre grandes étapes: le détachement des cellules cancéreuses de leurs loci primaire, leur mise en circulation (intravasation), leur sortie de la circulation (extravasation), et la survie et la croissance dans un organe à distance. Métastase dans l&#39;homme est considéré comme un processus lent et qui se manifeste souvent après des années de latence. Pour étudier sa progression en temps opportun, le test ci-dessus rela...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>10313-021</td><td></td></tr><tr><td>SFB</td><td>Hyclone</td><td>SH30088.03</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Invitrogen</td><td>14175-095</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Mallinckrodt Baker Inc.</td><td>6838-04</td><td></td></tr><tr><td>Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;.7H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Mallinckrodt Baker Inc.</td><td>7896-04</td><td></td></tr><tr><td>KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Mallinckrodt Baker Inc.</td><td>7100-12</td><td></td></tr><tr><td>Rouge de phénol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3532</td><td></td></tr><tr><td>EDTA-Na</td><td>EMD Millipore</td><td>4010</td><td></td></tr><tr><td>Bleu de trypan</td><td>Invitrogen</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>Tripsine 2,5 %</td><td>Invitrogen</td><td>15090-046</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol</td><td>Ultrapure</td><td>200-CSGP</td><td></td></tr><tr><td>Tubes Falcon de 50 ml</td><td>VWR international</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>Tubes microcentrifuges</td><td>Axygen Scientific</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>Filtre cellulaire Falcon de 70&amp;mu;m</td><td>BD Biosciences</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Tubes de culture Falcon de 5 ml</td><td>VWR international</td><td>60818-576</td><td></td></tr><tr><td>Hémacytomètre</td><td>Hausser Scientific</td><td>15170-208</td><td></td></tr><tr><td>Seringue de 1 ml</td><td>BD Biosciences</td><td>329650</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille de calibre 30 &amp;frac12;</td><td>BD Biosciences</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Restriction murin</td><td>Plas Labs Inc.</td><td>551-BSRR</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux chirurgicaux</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-940</td><td></td></tr><tr><td>Pince</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-902</td><td></td></tr><tr><td>Microscope stéréoscopique</td><td>Nikon Instruments</td><td>SMZ1500</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse de banc</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>75003491</td><td></td></tr></tbody></table>

assay métastases expérimentales

Experimental Metastasis Assay

Les métastases sont la principale cause de décès chez les patients atteints de cancer. Pour comprendre le mécanisme de métastases, un essai de métastases expérimentales a été établi en utilisant des souris immunodéficientes. Cet article définit les procédures impliquées dans cet essai, y compris la préparation des échantillons, l&#39;injection intraveineuse, et la culture de cellules de métastases pulmonaires. Brièvement, un nombre prédéterminé de cellules cancéreuses humaines ont été préparés<em&gt; In vitro</em&gt; Et directement injectées dans la circulation des souris immunodéficientes dans leurs veines de la queue. Un petit nombre de cellules à survivre aux turbulences dans la circulation et de grandir comme des métastases dans les organes internes, comme les poumons. Les souris injectées sont disséqués après une certaine période. La distribution tissulaire des métastases est déterminé sous un microscope à dissection. Le nombre de métastases dans un tissu spécifique est compté et il est directement corrélée avec la capacité métastatique des cellules cancéreuses injectées. Les métastases sont apparues isolées et cultivées<em&gt; In vitro</em&gt; Que les lignées cellulaires, qui présentent souvent des capacités accrues métastatique à la lignée parentale lorsqu&#39;il est injecté à nouveau dans des souris immunodéficientes. Ces dérivés hautement métastatiques deviennent des outils utiles pour identifier les gènes ou les voies moléculaires qui régulent la progression métastatique.

Cet article décrit les procédures d&#39;un essai de métastases expérimentales qui est utilisé pour déterminer le potentiel métastatique de lignées cellulaires humaines de cancer.

Assay Métastases expérimentales

Les métastases sont la principale cause de décès chez les patients atteints de cancer. Afin de comprendre le mécanisme des métastases, un essai expérimental de métastase a été mis en place...

L'objectif général de l'expérience suivante est de tester les capacités métastatiques de cellules cancéreuses humaines par des injections intraveineuses via la veine caudale. Chez des souris immunodéficientes, les cellules sont préparées pour injection. Ces cellules sont ensuite injectées dans des souris immunodéficientes, ce qui entraîne la formation de métastases pulmonaires après un à deux mois.Les souris sont disséquées et les métastases pulmonaires sont quantifiées et mises en culture. Les résultats de ce type de test indiquent l'importance des métastases d'un type particulier de cellule cancéreuse. Bonjour, je suis Sonali Mohanty du laboratoire du Dr LE, du Département de génétique biomédicale de l'Université de Rochester.Aujourd'hui, nous allons vous présenter une procédure pour réaliser un test de métastase expérimentale. Nous utilisons cette procédure dans notre laboratoire pour étudier la métastase cancéreuse. Commençons donc.Commencez avec des cellules cultivées à environ 70 % de confluence. Aspirez le milieu de la plaque et rincez délicatement une fois avec un X PBS. Ensuite, ajoutez deux millilitres de trypsine 0,05 % en inversant. Secouez doucement la plaque pour faciliter le détachement des cellules.Observer les cellules au microscope pendant qu'elles se détachent. Ajouter un volume suffisant de milieu contenant du FBS pour inhiber l'activité de la trypsine. Ensuite, transférer dans un tube de 50 millilitres.Compter les cellules à l'aide d'un hémocytomètre. Une fois la concentration déterminée, centrifuger à environ 200 ×g pendant trois minutes sans perturber le culot cellulaire. Retirer soigneusement le milieu et resuspendre dans un volume approprié de solution tampon équilibrée de Hank ou HBSS afin d'obtenir une concentration finale d'environ cinq fois 10⁶ cellules par millilitre.Ensuite, filtrez à l’aide d’un tamis cellulaire Falcon de 70 micromètres. Pour éliminer les agrégats cellulaires de grande taille, placez la pointe de la pipette directement sur le filtre, positionné au-dessus d’un tube de culture de cinq millilitres. Éjectez rapidement la suspension à travers le filtre dans le tube.Compter à nouveau les cellules à l'aide de bleu de trypan pour déterminer la viabilité. La viabilité doit être supérieure à 90 % avant l'injection. Ensuite, diluer jusqu'à une concentration finale de 2,5 × 10⁶ cellules par millilitre.Gardez sur glace. Saisissez délicatement la queue d'une souris immunodéficiente et faites-la entrer dans le dispositif de contention, le dos contre la fente, la queue sortant par l'ouverture arrière. Faites lentement glisser l'anneau vers l'intérieur le long de la fente.Une fois que l'anneau a saisi la bouche de la souris, fixez-le en place. La souris ne doit pas pouvoir bouger librement, mais doit présenter un rythme respiratoire normal. Repérez les veines principales de la queue.Quatre vaisseaux sanguins majeurs sont présents dans la queue d'une souris. Les artères se trouvent sur les côtés dorsal et ventral de la queue. Les veines sont situées sur les côtés latéraux.Aspirez au moins 200 microlitres des cellules préparées dans une seringue d'un millilitre. Fixez une aiguille de 30 gauge de demi-pouce et expulsez toutes les bulles d'air. Le volume final dans la seringue doit être de 200 microlitres.Préparez-vous à injecter à l'extrémité distale de la queue. Ainsi, si la première tentative échoue, une région plus proximale de la queue pourra être utilisée pour une deuxième tentative. Après avoir nettoyé le site d'injection avec de l'éthanol à 70 %, tirez la queue en la maintenant droite.Tenez la pointe avec le pouce et soutenez l'extrémité destinée à l'injection avec l'index. Insérez l'aiguille dans la veine et injectez les cellules. Veillez à ce que l'aiguille et la seringue restent parallèles à la veine pendant l'injection.Dans le cas contraire, l'aiguille transpercera la paroi du vaisseau et les cellules seront injectées dans les tissus adjacents de la queue. Retirez l'aiguille si la procédure s'est déroulée avec succès. Le sang doit perfuser à partir du site d'injection.Appuyez un coton propre pour faciliter le passage du fil dentaire et palpez la queue vers le haut afin de pousser tout échantillon résiduel dans la circulation. Libérez la souris du dispositif de contention et remettez-la dans la cage. Notez le nombre de tentatives d'injection et le nombre de cellules injectées dans un cahier de laboratoire.Déterminer la viabilité des cellules après l'injection. Comme précédemment, cette étape permet de s'assurer que les cellules restent vivantes tout au long du processus d'injection. À la fin d'une expérience d'injection, la viabilité des cellules diminuera, mais devrait rester supérieure à 80 %. En tant qu'étape facultative, centrifuger les cellules restantes et rincer les culots une fois avec du PBS.Ensuite, congeler les culots à moins 80 degrés Celsius pour des analyses ultérieures telles que le western blot. Pour confirmer l'expression génique après les inhibitions par ARN interférent, dissez les souris au bout d'un à deux mois afin de déterminer les localisations des métastases. Commencez par placer la souris euthanasiée sur une station de dissection.Pulvérisez généreusement la souris avec de l'éthanol. Incisez la cage thoracique pour exposer les poumons et le cœur. Ensuite, excisez-les soigneusement et placez-les dans du PBS.Le poumon est le site principal de métastase car il contient le premier lit capillaire que les cellules rencontrent. Après leur entrée dans la circulation, retirez le cœur et rincez les poumons dans du PBS, puis observez chaque lobe du poumon au microscope stéréoscopique. Comptez le nombre de métastases détectables sur les deux côtés du poumon, puis additionnez les nombres de métastases pulmonaires sur les quatre lobes ensemble pour déterminer le nombre total de métastases pulmonaires.Ensuite, isolez individuellement les métastases pulmonaires par excision à l’aide de ciseaux. Transférez chaque métastase vers une passoire cellulaire de 70 micromètres et hachez-la en utilisant l’extrémité d’un capuchon stérile d’aiguille. Rincez la passoire cellulaire avec plusieurs millilitres de milieu et récupérez les cellules ayant traversé le filtre.Dans une boîte de culture, chaque boîte contient les cellules provenant d'une métastase. Incuber les cellules à 37 degrés Celsius pendant au moins quatre jours sans perturbation. Initialement, les cellules cancéreuses et les cellules fibroblastes pousseront sur les boîtes, mais progressivement, les cellules fibroblastes disparaîtront et seront remplacées par les cellules cancéreuses.Si les cellules cancéreuses portent des gènes de résistance aux médicaments, sélectionnez les cellules à l’aide des antibiotiques correspondants. Après trois jours, éliminez tout résidu sanguin ou tissulaire, ainsi que les débris présents sur la boîte à l’aide de PBS, puis ajoutez un milieu frais. Évaluez la pureté des cellules obtenues par immunomarquage à l’aide d’anticorps dirigés contre des protéines spécifiques humaines ; un anticorps anti-humain est utilisé même en l’absence de sélection par médicament. Plus de 99 % des cellules doivent être d’origine humaine.Les cellules nouvellement obtenues peuvent désormais être réinjectées dans des souris immunodéficientes afin de tester leurs capacités métastatiques à la fin de ce test. Une lignée cellulaire cancéreuse fortement métastatique donne généralement lieu à de nombreuses métastases pulmonaires, tandis qu'une lignée cellulaire cancéreuse faiblement métastatique en produit très peu. Ces images montrent des métastases pulmonaires deux mois après l'injection de la lignée cellulaire de mélanome humain.Un 3 7 5 sm. Les cellules dérivées à l’aide de cette méthode donnent généralement lieu à davantage de métastases que la lignée parentale lorsqu’elles sont testées. En utilisant à nouveau cet essai, nous venons de vous montrer la procédure à suivre pour réaliser un essai de métastase expérimentale.Lorsque vous effectuez cette procédure, il est très important de vous assurer que les cellules sont injectées dans la veine de la queue, mais pas dans les tissus environnants ni dans la queue elle-même. Voilà, c'est tout. Merci d'avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.

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