Microinjection de gonades : une méthode d’administration de composés directement dans la lignée germinale de C. elegans

- Pour préparer l’injection, utilisez un pic à vis sans fin pour poser une trace d’huile d’halocarbure sur un tampon d’agarose. Placez les vers dans l’huile et immobilisez-les en les poussant doucement sur le tampon gélosée. Assurez-vous que l’huile recouvre complètement les animaux. Il permet à l’oxygène d’atteindre les vers tout en empêchant la dessiccation. Ensuite, placez le tampon d’agarose sur un microscope à injection et positionnez l’aiguille perpendiculairement au ver, en ciblant l’extrémité distale d’un bras gonadique.

Poussez doucement l’aiguille à travers la cuticule et injectez dans le bras gonadique l’acide nucléique ou le composé d’intérêt. Chaque bras gonadique contient un syncytium germinal qui se développera en ovocytes individuels. Le matériel injecté dans la gonade distale sera incorporé dans ces ovocytes et affectera la génération suivante.

Après avoir injecté des vers, remplacez l’huile par un tampon M9. Une fois que les vers commencent à bouger, transférez-les dans une plaque de gélose NGM avec de la nourriture bactérienne. Dans le protocole suivant, la méthode de micro-injection de gonades est utilisée pour délivrer un complexe Cas9 afin de cibler et d’édite