JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
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Commencez par une tranche de cerveau riche en neurones dopaminergiques.
Incuber la tranche dans un LCR contenant de faux neurotransmetteurs fluorescents ou FFN.
Les FFN sont des marqueurs sensibles au pH qui imitent la dopamine et émettent une fluorescence plus intense dans les environnements neutres qu’acides.
Ces FFN pénètrent sélectivement dans les neurones dopaminergiques et sont chargés dans des vésicules synaptiques acides, où le changement de pH réduit la fluorescence des FFN.
Transférez cette tranche dans une chambre d’imagerie, fixez-la et perfuser en continu avec de l’aCSF pour éliminer les FFN non liés.
Imagez la coupe pour confirmer l’accumulation de FFN sous forme de puncta fluorescents.
Ensuite, positionnez une électrode de stimulation pour délivrer une stimulation électrique.
Les impulsions électriques font pénétrer le calcium dans le neurone, provoquant la fusion des vésicules synaptiques avec la membrane neuronale et la libération de FFN dans la fente synaptique extracellulaire.
Dans l’environnement à pH neutre de la fente synaptique, la fluorescence FFN s’intensifie.
Imagez à nouveau la coupe pour observer la fluorescence diffuse dans l’espace extracellulaire, confirmant la libération de FFN par les vésicules synaptiques.