Séparation par chromatographie sur couche mince de nucléotides (p)ppGpp isolés de bactéries induites par le stress

Commencer avec des extraits nucléotidiques radiomarqués obtenus à partir d’une culture bactérienne avant et après l’induction du stress.

En cas de stress, les enzymes bactériennes convertissent la guanosine triphosphate et la guanosine diphosphate en nucléotides induits par le stress, la guanosine pentaphosphate et la guanosine tétraphosphate.

Repérez les extraits sur une plaque de chromatographie sur couche mince pré-recouverte d’un polymère cationique en tant que phase stationnaire.

Placez la plaque dans une chambre contenant un tampon comme phase mobile, en veillant à ce que le liquide reste sous le spot pour éviter une diffusion précoce.

Laissez le tampon monter par capillarité, en séparant les nucléotides chargés négativement en bandes distinctes en fonction de leur charge et de leur taille.

Après le développement, retirez la plaque, séchez-la à l’air libre et coupez le dessus pour éliminer les isotopes libres et réduire le signal de fond.

Exposez la plaque à un écran sensible aux rayonnements pour détecter le signal radioactif.

L’augmentation des niveaux de guanosine tétraphosphate et de guanosine pentaphosphate après induction de stress révèle des changements dynamiques dans le poo