Structuration microfluidique et suivi par fluorescence de la croissance bactérienne unicellulaire

Commencez par une culture bactérienne marquée par fluorescence ajoutée à un tampon sans carbone.

Centrifuger pour granuler les bactéries et jeter le surnageant.

Remettez le granulé en suspension dans un tampon frais sans carbone contenant un détergent doux.

L’absence de source de carbone arrête la croissance, tandis que le détergent empêche l’agglutination et maintient les cellules en suspension.

Chargez la suspension bactérienne dans une seringue et connectez-la à une pompe.

Injecter la suspension dans l’entrée d’une puce microfluidique contenant un canal avec des pièges encastrés dans le sol.

Retirez lentement le liquide de la sortie du canal.

Lorsque le liquide se retire, les forces capillaires guident les bactéries vers la sortie.

Dans ce processus, des cellules bactériennes uniques s’installent dans les pièges, ce qui entraîne un motif bactérien.

Rincez continuellement le canal avec un bouillon préchauffé et riche en nutriments.

Les bactéries reprennent leur croissance et forment des microcolonies à l’intérieur des pièges.

Utilisez la microscopie à fluorescence pour capturer des images en accéléré et analyser la croissance bactérienne dans un environnement contrôlé.

Pipetez un millilitre