Visualisation de l’infection des voies urinaires dans un modèle murin utilisant la bioluminescence

Commencez par une souris anesthésiée et, à l’aide d’un cathéter, injectez une suspension de bactéries pathogènes dans la vessie urinaire.

Ces bactéries portent un opéron bioluminescent, qui permet une production autonome de lumière pour suivre l’infection.

La muqueuse interne de la vessie est un épithélium spécialisé qui sépare la lumière du tissu sous-jacent.

Les protéines d’adhésion bactériennes se lient aux récepteurs des glycoprotéines à la surface épithéliale de l’hôte, déclenchant une endocytose médiée par les récepteurs.

Les bactéries intériorisées se répliquent pour former des communautés bactériennes intracellulaires denses.

Les bactéries expriment l’opéron bioluminescent, produisant une enzyme luciférase et un complexe enzymatique qui synthétise le substrat de la luciférase.

La luciférase oxyde le substrat pour émettre de la lumière visible.

Placez la souris à l’intérieur de la chambre d’imagerie et capturez le signal bioluminescent.

Sélectionnez une région d’intérêt et quantifiez l’intensité de la bioluminescence.

Surveillez ce signal dans le temps comme indicateur en temps réel de la charge bactérienne et de la progression de l’infection.

Ouvrez le logiciel d’acquisition BLI et cliquez sur Initialiser dans l’appareil d’imagerie pour tester la caméra et le système de contrôle de scène et refroidir la caméra de l’appareil à couplage à moins 90 degrés Celsius. Cliquez sur Acquisition, Sauvegarde automatique. Sélectionnez la luminescence et photographiez-la. Vérifiez les réglages luminescents par défaut en mettant le filtre d’excitation sur Block et le filtre d’émission sur Ouvert.

Réglez le temps d’exposition en mode automatique lors de la première photo. Pour les mesures in vivo et les signaux lumineux, réglez le temps d’exposition à environ 30 secondes. Réduisez le temps d’exposition si un avertissement apparaît à cause d’une image saturée.

Sélectionnez le bining moyen, le F/stop de celui-ci, et choisissez le bon champ de vision. Réglez la hauteur du sujet à 1 centimètre lors de l’imagerie des souris. Imagez jusqu’à 5 souris simultanément et séparez les animaux à l’aide du déflecteur lumineux pour éviter la réflexion.

Fermez la porte et cliquez sur Acquérir pour lancer la séquence d’imagerie. Ensuite, remplissez des informations détaillées sur l’expérience. Retirez les souris de la chambre d’imagerie et remettez-les dans leur cage. Vérifiez la récupération complète après anesthésie. Ensuite, remettez les cages dans les supports ventilés jusqu’au prochain cycle d’imagerie.

Lance le logiciel d’imagerie et charge le fichier expérimental en cliquant sur Parcourir. Utilisez la palette d’outils pour ajuster la gamme de couleurs de l’image. Utilisez les outils ROI pour dessiner une région d’intérêt sur l’image, en veillant à ce qu’elle soit suffisamment grande pour couvrir toute la surface et en utilisant les mêmes dimensions pour toutes les images. Ensuite, cliquez sur mesure du ROI pour quantifier l’intensité lumineuse.