$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Commencez par des tubes contenant le stade persistant non réplicatif, ou NRP, de Mycobacterium tuberculosis, qui présente une couche externe épaissie.
Ajoutez des billes de verre dans un tube et secouez-le pour perturber mécaniquement la couche externe des mycobactéries, améliorant ainsi la perméabilité.
Ensuite, transférez la suspension mycobactérienne battue par la perle dans un tube frais.
Ajoutez de la rifampicine marquée par fluorescente, un antibiotique antituberculeux, aux suspensions cellulaires non traitées et battues par des perles.
Incubez en secouant pour permettre à la rifampicine marquée fluorescentement d’entrer dans les mycobactéries.
Avec le temps, davantage de rifampicine pénètre dans les mycobactéries.
Centrifugez les échantillons pour séparer les cellules et retirer le surnageant contenant de la rifampicine non liée.
Resuspendez les mycobactéries dans un milieu frais.
Analysez les échantillons à l’aide de la cytométrie en flux. Lorsque les cellules traversent un faisceau laser, elles émettent une fluorescence proportionnelle à la rifampicine fluorescente intracellulaire.
À différents moments donnés, les cellules NRP non traitées présentent une fluorescence plus faible que celles battues par des perles.
Cela indique que la couche externe épaissie limite l’entrée dans la rifampicine, favorisant la persistance bactérienne lors de l’interaction hôte-pathogène.