Évaluation de la colonisation des racines de semis de tomates par une bactérie pathogène à l’aide de comptages cellulaires viables

Prenez des contenants contenant des plants de tomates cultivés dans du sable stérile.

Les racines des semis sont inoculées soit avec une souche sauvage productrice de cellulose, soit avec une souche mutante déficiente en cellulose d’une bactérie pathogène végétale.

Retirez le matériau de scellement d’un contenant, inversez-le sur un papier stérile, puis tapotez pour libérer le cylindre de sable contenant la plante.

Fendez le cylindre de sable dans le sens de la longueur pour exposer la racine.

Ensuite, trempez la racine dans un tampon stérile et secouez pour déloger les bactéries faiblement attachées.

Répétez le processus pour l’autre racine.

Transférez les racines lavées dans un nouveau tampon. Sonicez-les pour libérer des bactéries bien adhérentes.

Utiliser ces suspensions sonique pour préparer des dilutions en série, les plaquer sur de l’agar et les incuber pour permettre aux bactéries viables de former des colonies.

Des taux de viabilité plus élevés chez la souche sauvage, comparés à ceux du mutant carent en cellulose, soulignent le rôle crucial des fibrilles cellulosiques dans la promotion de l’adhésion bactérienne à la surface racinaire.

Pour déterminer le nombre de bactéries viables trouvées sur les plantes cultivées dans le sable, commencez par retirer le matériau scellant du haut et du dessous du contenant.

Placez le contenant sur une feuille de papier stérile et frappez doucement le contenant contre la surface pour desserrer le sable avant de soulever délicatement le sable avec la plante hors du pot.

Lorsque le cylindre de sable et la plante sont libres sur le papier, fendez le sable en deux pour révéler la racine de la plante. Si désiré, prélevez des échantillons de sable près du bord du contenant ainsi que près de la racine. Cela peut être utile pour déterminer la propagation, l’accumulation et la croissance des bactéries.

Ramassez la racine et enlevez le sable et les bactéries faiblement adhérés en trempant la racine dans un volume mesuré d’eau ou de tampon et en secouant doucement. Déterminez le nombre de cellules viables des bactéries dans la suspension résultante en la plaquant sur un milieu approprié tel que Luria agar. Cela représente le nombre de bactéries faiblement associées à la racine. Enfin, retirez les bactéries étroitement liées par sonique et déterminez leur nombre.