Imagerie des changements morphologiques chez les bactéries à l’aide de la microscopie à fluorescence à cellules vivantes

Commencez par une culture bactérienne immobilisée sous une dalle d’agarose dans un plat à fond de verre.

Les membranes cellulaires bactériennes sont marquées avec un colorant fluorescent.

Les bactéries sont également conçues pour exprimer un ARN antisens ciblant un ARNm spécifique, inhibant la production d’une protéine essentielle à la division cellulaire.

Ajoutez une goutte d’huile d’immersion à l’objectif du microscope à fluorescence inversée.

Placez la plaque dans un boîtier métallique et fixez-la sur la scène du microscope.

Augmentez l’objectif jusqu’à ce que l’huile touche la plaque, puis concentrez-vous sur les cellules.

Utilisez un logiciel d’imagerie pour définir des Z-stacks afin de capturer des images à plusieurs profondeurs.

Commencez à acquérir des images en accéléré fluorescent.

À mesure que les cellules répondent à l’expression de l’ARN antisens, elles ne se divisent pas et développent des formes gonflées.

L’organisation membranaire est perturbée, entraînant une fluorescence irrégulière et focale qui indique une division cellulaire défectueuse.

Pour imager l’échantillon, utilisez le bouton de mise au point d’ajustement grossier pour vous assurer que l’objectif est complètement