Name: Comptage des cellules souches humaines (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 37 s
Description: Apprenez à compter les cellules souches neuronales humaines à l'aide d'un hémacytomètre et du bleu de Trypan. Cette méthode permet de différencier les cellules vivantes des cellules mortes pour les cultures tissulaires.

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Les auteurs tiennent à remercier le Dr Philip H. Schwartz, de la National des Ressources Humaines des cellules souches neurales à l&#39;Hôpital des enfants s, Orange County Institut de recherche pour fournir des cultures hNSPC.

Le repiquage des cellules souches humaines Note: S'il vous plaît se référer à l' <a href="/index/details.stp?ID=263">homme neuronal repiquage Cellules souches</a> article sur la façon de se détacher et de remettre en suspension les cellules. https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263 Préparer la suspension cellulaire pour le comptage <ol><li> Placer 25 ul de solution de 0,4% au bleu Trypan et 20 pi de milieu cellulaire dans un tube Eppendorf. </li><li> Resuspendre les cellules pour être comptés en tapotant doucement le tube contenant les cellules dans un volume connu des médias pour créer une suspension homogène. Placer 5 ul de cellules dans le tube eppendorf de l'étape précédente. Cette étape dilue la concentration cellulaire d'un facteur 10. </li><li> Placez le couvercle en verre sur le hématimètre et la charge d'environ 11-12 ul de la suspension cellulaire. <img src="/files/ftp_upload/old/262_2008_7_18_4/262_Figure-01.png" alt="262_Figure-01" width="511" height="139"> </li></ol> Comptage des cellules dans le hémacytomètre <ol><li> Observez la grille entière de l'hématimètre dans un microscope à contraste de phase. Focus sur un quadrant de la grille (comme celui en rouge). <img src="/files/ftp_upload/old/262_2008_7_18_5/262_Figure-02.png" alt="262_Figure-02" width="492" height="278"> </li><li> Les cellules mortes ou mourantes apparaîtra bleu parce que leur membrane a été endommagée et ne sont pas en mesure d'exclure le colorant bleu trypan. Les cellules viables n'apparaîtra pas bleu et sera entouré par un "halo" de lumière en contraste de phase (sera «phase-bright»). </li><li> Comptez le nombre de cellules viables dans un quadrant (zone 1 mm 2). Vous pouvez également déterminer la viabilité cellulaire en divisant le nombre de cellules viables par le nombre total de cellules. Compter les cellules dans 3-4 quadrants aléatoire et déterminer le nombre moyen de cellules par quadrant. Puisque le volume d'un quadrant est connu pour être de 10 ml ou 0,1 ul -4, la concentration de cellules peut être déterminé <img src="/files/ftp_upload/old/262_2008_7_18_6/262_Figure-03.png" alt="262_Figure-03" width="741" height="165"> </li><li> Vous pouvez utiliser le raccourci suivant pour déterminer les cellules # / ul: <img src="/files/ftp_upload/old/262_2008_7_18_7/262_Figure-04.png" alt="262_Figure-04" width="368" height="69"> Nombre total de cellules dans un tube = # cellules / ul ul X dans le tube </li></ol>

<ol><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passaging+Human+Neural+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Passaging Human Neural Stem Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. 7, 
 
 <a target="_blank" href="http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263">http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263</a> (2007).</li>
<li>Caprette, D. avidR. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+a+Hemacytometer%5BTitle%5D)+AND+%22BioEd+Online%22%5BJournal%5D)">Using a Hemacytometer.</a> BioEd Online. , 
 
 <a target="_blank" href="http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer&dpg=3">http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer&dpg=3</a> (2008).</li>
<li>Caprette, D. avidR. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counting+Chamber+%28Hemacytometer%29%5BTitle%5D)+AND+%22BioEd+Online%22%5BJournal%5D)">Counting Chamber (Hemacytometer).</a> BioEd Online. , 
 
 <a target="_blank" href="http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer%22&dpg=2
">http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer%22&dpg=2
</a> (2008).</li>
</ol>

Ce protocole décrit une méthode simple et rapide pour déterminer la concentration de cellules pour une variété d&#39;expériences impliquant des cellules. Utiliser le raccourci décrit en 3D, on peut déterminer rapidement et précisément la concentration de cellules et nombre total de cellules dans un volume donné.

<table><tbody><tr><td>Hémacytomètre en contraste de phase</td><td>Outil</td><td>Hausser Scientific</td><td>02-671-54</td><td>Distribué par Fisher sous le numéro de catalogue indiqué</td></tr><tr><td>Colorant bleu de trypan 0,4 %</td><td>Réactif</td><td>GIBCO, par Life Technologies</td><td>15250-061</td><td>Distribué par Invitrogen sous le numéro de catalogue indiqué</td></tr></tbody></table>

comptage des cellules souches humaines

Counting Human Neural Stem Cells

La connaissance du nombre exact de cellules viables dans un volume donné d&#39;une suspension cellulaire est nécessaire pour les manipulations de routine de nombreux culture de tissus, comme les cellules de placage pour l&#39;immunocytochimie ou pour transfections cellulaires. Ce protocole décrit une méthode simple et rapide pour différencier les cellules vivantes et mortes et de quantifier la concentration de cellules et nombre total de cellules en utilisant un hématimètre. Cette procédure exige d&#39;abord détacher les cellules d&#39;une surface de croissance et les remettre en suspension dans les médias. Ensuite, les cellules sont diluées dans une solution de bleu Trypan (idéalement à une concentration qui donne 20 à 50 cellules par quadrant) et placé dans le hématimètre. Enfin, la moyenne des chiffres de cellules viables dans plusieurs quadrants sélectionnés au hasard, en divisant la moyenne par le volume d&#39;un 1 mm 2 quadrants (0,1 pi) et en multipliant par le facteur de dilution donne le nombre de cellules par litre En multipliant cette concentration cellulaire par le volume total en ul donne le nombre total de cellules. Ce protocole décrit le comptage humaine souches neurales / cellules précurseurs (hNSPCs), mais peut aussi être utilisé pour de nombreux autres types cellulaires.

La connaissance du nombre exact de cellules viables est nécessaire pour de nombreuses manipulations culture de tissus. Ce protocole décrit comment différencier entre les cellules vivantes et mortes et de quantifier les cellules en utilisant un hématimètre. Bien qu&#39;il décrit compter humaine souches neurales / cellules précurseurs (hNSPCs), il peut être utilisé pour d&#39;autres types cellulaires.

Comptage des cellules souches humaines

La connaissance du nombre exact de cellules viables dans un volume donné d'une suspension cellulaire est nécessaire pour de nombreuses manipulations courantes de culture tissulaire, telles que...

Maintenant, je vais vous montrer comment compter les cellules souches neuronales humaines. Vous devez compter vos cellules lorsque vous souhaitez les utiliser pour de l'immunochimie ou lorsque vous voulez effectuer une transfection avec un facteur nucléaire. J'utilise un hématomètre en contraste de phase doté d'une grille bordée, ainsi qu'un colorant appelé bleu de trypan. Ce colorant est utile car il permet de distinguer les cellules vivantes des cellules mortes.Les cellules mortes ou en voie de mort absorbent ce colorant et apparaissent bleues. Lorsque vous observez les cellules au compteur hématologique, les cellules vivantes sont capables d'exclure ce colorant et, par conséquent, elles n'apparaissent pas bleues. De cette manière, vous pouvez déterminer la viabilité de vos cellules afin de préparer une solution de bleu de trypan et de milieu.Je vais ajouter 20 microlitres de solution piège et bleue dans ce tube Eppendorf de 0,5 ml. Ensuite, je vais ajouter 25 microlitres de milieu. Ainsi, j'aurai actuellement 45 microlitres d'une solution composée de solution piège, de bleu et de milieu, de sorte que lorsque j'ajouterai 5 microlitres de suspension cellulaire, j'obtiendrai une di

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L'introduction d'un gène d'intérêt dans une cellule est une méthode puissante pour élucider sa fonction in vivo. Ce protocole décrit une méthode efficace de transfection d'une culture de souches neurales humaines / cellules précurseurs (hNSPCs) en utilisant l'appareil d'électroporation Nucleofector faite par Amaxa.

Transfection des cellules souches humaines à l&#39;Nucleofector Amaxa

La capacité de manipuler humaine souches neurales / cellules précurseurs (hNSPCs) in vitro permet d'étudier leur utilité comme les greffes de cellules à des fins thérapeutiques et d'explorer le développement humain de neurones. Ce protocole présente une méthode de culture et de hNSPCs repiquage dans l'espoir de reproductibilité croissante de la recherche des cellules souches humaines.

Le repiquage des cellules souches humaines

Immunocytochimie est une méthode puissante pour déterminer la présence, la localisation subcellulaire, et l'abondance relative d'un antigène d'intérêt dans les cellules cultivées. Ce protocole présente un outil facile à suivre la série d'étapes qui permettent de conserver les anticorps et tirer le meilleur parti de sa coloration.

Immunocytochimie: des cellules souches humaines

Ce protocole vidéo montre comment faire de la discrimination et d'énumérer bona fide des cellules souches neurales dans une population mixte de cellules précurseurs neurales utilisant le test sur des cellules neurales formant colonie.

Neural-Formant Colonie dosage cellulaire: Un test pour distinguer Bona Fide Cellules souches neuronales à partir de cellules progénitrices neurales

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Génération de cellules souches neurales à partir de tissus humains mis au rebut corticale fœtale

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Grandir cellules souches neurales de régions classiques et non conventionnelles du cerveau adulte rongeurs

Ce protocole décrit un procédé de découpage mécanique nouvelle qui permet l'expansion de souches et de cellules progénitrices neurales agrégats sphériques sans dissociation d'une suspension cellulaire unique. Maintenir le contact cellule / cellule permet une croissance rapide et stable depuis plus de 40 passages.

Une méthode d&#39;extension cGMP applicable pour les agrégats de neurones humains des cellules souches et progénitrices dérivées de cellules souches pluripotentes ou fœtale tissu cérébral

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Induction directe de neurales humaines cellules souches à partir de cellules progénitrices hématopoïétiques du sang périphérique

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Différenciation d&#39;un Neural Stem Cell humaine ligne sur Trois Cultures dimensionnelles, les gènes Analyse des microARN et Putative cibles

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Isolement de neurones cellules souches / progénitrices de la région périventriculaire du Rat des adultes et de la moelle épinière humaine

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Énumération des cellules souches neurales utilisant clonales Assays

Apprenez à compter les cellules souches neuronales humaines à l'aide d'un hémacytomètre et du bleu de Trypan. Cette méthode permet de différencier les cellules vivantes des cellules mortes pour les cultures tissulaires.

Comptage des cellules souches humaines

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