Modélisation du cancer de la prostate dans des modèles murins génétiquement modifiés : une technique d’édition de gènes localisée médiée par CRISPR/Cas9 dans des cellules du lobe antérieur de la prostate de souris

Commençons avec un modèle de souris knock-in CRISPR/Cas9 anesthésié et préparé portant un génome conçu pour exprimer les endonucléases Cas9 et les protéines fluorescentes vertes, ou GFP, par un fort promoteur en amont. Une cassette flox-STOP ou LSL insérée immédiatement en aval du promoteur bloque la transcription Cas9 et GFP dans des conditions normales.

Incisez la paroi abdominale de la souris pour exposer son lobe antérieur de la prostate attaché à la vésicule séminale. Injectez la suspension adénovirale souhaitée dans le lobe antérieur pour faciliter l’administration ciblée du génome viral dans les cellules. Replacez le lobe de la prostate dans la cavité abdominale et suturez l’incision.

Dans les cellules infectées par le virus, le génome viral exprime les enzymes Cre recombinase et les ARN-guides ciblant le gène à muter. Les enzymes Cre reconnaissent la cassette LSL et excisent le bloqueur de transcription floxé. Cette étape permet au promoteur de piloter l’expression des endonucléases et des GFP de Cas9.

Par la suite, les endonucléases Cas9 forment des complexes avec des ARN-guides codés par le virus qui dirigent ces complexes vers la séquence cible dans le gène à muter. Cett