Isolement de la microglie par immunomarquage Tri cellulaire couplé : une méthode d’immunomarquage pour isoler la microglie des cellules cérébrales du poisson-zèbre à l’aide du tri cellulaire activé par fluorescence

Dans des conditions pathologiques, les microglies activées - des macrophages cérébraux spécialisés - aident à éliminer les agents pathogènes et les débris cellulaires. Ces microglies expriment des récepteurs uniques qui les différencient des autres macrophages.

Pour isoler la microglie, commencez par une culture de cellules cérébrales dérivée d’un poisson-zèbre transgénique, exprimant des molécules fluorescentes spécifiques dans différents types de cellules.

La culture contient un mélange de neurones exprimant la fluorescence rouge, de macrophages exprimant la fluorescence verte et de microglies non fluorescentes.

Maintenant, ajoutez un réactif bloquant et incubez la culture avec une agitation intermittente. Le réactif bloquant se lie aux sites non spécifiques des cellules et réduit le signal de fond.

Ensuite, ajoutez des anticorps primaires et incuberez. Ces anticorps se lient à des récepteurs spécifiques exprimés à la surface de la microglie.

Centrifugez la culture et retirez le surnageant contenant des anticorps non liés. Remettez en suspension la pastille cellulaire dans un milieu frais.

Ensuite, ajoutez des anticorps secondaires conjugués à un colorant fluorescent et incuberez