Expression génique inductible basée sur le système régulable Tet-On in vivo : un système d’expression génique induit par la tétracycline pour l’activation de la transcription du gène cible dans un modèle murin
Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:27 min • July 8th, 2025
Le système tétracycline-On ou Tet-On est un système d’expression génique conditionnel qui active l’expression du gène d’intérêt en présence de tétracycline ou de son analogue, la doxycycline.
Commençons par une souris génétiquement modifiée avec un génome modifié contenant un gène codant pour la protéine activatrice transcriptionnelle contrôlée par la tétracycline inverse, ou rtTA, pilotée par un promoteur spécifique du foie dans les cellules hépatiques ou les hépatocytes. De plus, la souris contient un gène d’intérêt sous le contrôle de séquences d’opérateurs tétracyclines ou de tetO situées en amont et fusionnées sélectivement à un promoteur minimal. Le tetO et le promoteur sont appelés l’élément sensible à la tétracycline, ou TRE.
La rtTA exprimée - une protéine de fusion comprenant le répresseur tet, tetR et le domaine de transactivation de la protéine virale VP16 - forme des dimères, qui sont inactifs et ne peuvent pas se lier à la séquence tetO du TRE, empêchant l’activation de l’expression du gène cible.
Préparez une solution contenant de la doxycycline et du saccharose. L’ajout de saccharose augmente l’appétence. Après le filtrage, fournissez la solution de doxycycline-sacc
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques