Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 6:59 min • July 8th, 2025
Les complexes protéiques multimériques sont essentiels à divers processus biologiques.
Pour séparer les complexes protéiques à l’état natif par multimère-PAGE, prenez du lysat tissulaire contenant les complexes souhaités. Chargez le lysat sur un assemblage de gel pour Blue native PAGE.
Remplissez le système d’un tampon alcalin contenant un colorant anionique bleu et connectez-le à l’alimentation électrique. À un pH alcalin, les molécules de colorant se lient au complexe protéique, lui conférant une charge négative globale sans se dénaturer. Ce complexe protéique intact chargé négativement migre à travers le gel sous la forme d’une bande bleue.
Après une course minimale, et en laissant la protéine intacte migrer dans le gel de résolution, exciser la bandelette contenant le complexe. Incuber la bandelette dans une solution contenant un agent de réticulation pour permettre à ses groupes réactifs d’interagir avec les groupes amines de la protéine proximale, stabilisant ainsi le complexe multimérique.
Remplacez la solution de réticulation par un réactif d’extinction pour calmer l’activité des agents de réticulation n’ayant pas réagi. Ajoutez du SDS - un détergent anionique - qui confère
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