Électrophorèse sur gel d’agarose d’amplicons d’ADN post-PCR : une méthode pour analyser les produits de la PCR multiplex et évaluer le succès de la réaction PCR

Pour analyser les amplicons d’ADN - des fragments d’ADN amplifiés de longueur spécifique - résultant de la réaction en chaîne par polymérase multiplexe, la PCR, en utilisant l’électrophorèse sur gel d’agarose, assemble un plateau de coulée avec un peigne pour créer des puits pour le chargement des échantillons.

Versez une concentration appropriée d’agarose fondue, un polysaccharide linéaire, dissous dans un tampon d’électrophorèse, complété par un colorant d’ADN fluorescent, sur le plateau de coulée et laissez solidifier.

L’agarose fondue polymérise, formant un gel tridimensionnel avec des pores microscopiques.

Placez le gel coulé dans une cuve d’électrophorèse, le côté peigne orienté près de la cathode négative. Le réservoir contient le tampon d’électrophorèse utilisé dans la préparation du gel pour maintenir une conductivité optimale. Retirez le peigne.

Transférez l’échantillon de produit PCR, mélangé à une solution de colorant de chargement pour surveiller la migration de l’échantillon, dans les puits. Chargez un puits avec des échelles d’ADN de longueur définie. Amorcez l’électrophorèse.

Les amplicons d’ADN, avec des groupes phosphate négatifs régulièrement espacés, migrent des