Dosage de l’absorption du calcium mitochondrial : méthode basée sur un lecteur de plaque pour mesurer l’absorption du calcium dans des mitochondries isolées

Les mitochondries absorbent le calcium cytosolique car il est essentiel à leur bon fonctionnement.

Un afflux excessif de calcium dans la matrice mitochondriale - surcharge calcique mitochondriale - déclenche l’ouverture d’un canal membranaire interne, le pore de transition de perméabilité mitochondriale, ou MPTP. Le pore ouvert permet une augmentation de l’efflux de calcium des mitochondries, provoquant un dysfonctionnement mitochondrial.

Pour mesurer l’absorption de calcium mitochondrial, commencez par une plaque multipuits contenant des mitochondries isolées en suspension dans un tampon approprié. Complétez le puits avec du pyruvate et du malate, qui sont des substrats producteurs d’ATP. Mélangez le contenu du puits et incuber.

Pendant l’incubation, le pyruvate et le malate sont convertis en ATP, dynamisant les mitochondries. Ajoutez une solution contenant des molécules de colorant fluorescent sensibles au calcium et imperméables à la membrane mitochondriale. Distribuez le tampon contenant du calcium aux mitochondries énergisées.

Surveillez la fluorescence calcique du colorant pendant que les molécules de colorant se lient au calcium libre dans le tampon.

Ajoutez plus d’ions calc