Détermination de la capacité de rétention calcique des mitochondries isolées
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:42 min • July 8th, 2025
Placez les mitochondries isolées des cellules du neuroblastome dans un tampon contenant un colorant fluorescent imperméable à la membrane et liant le calcium.
Incuber pour permettre aux mitochondries de se stabiliser dans le tampon.
Ajouter un tampon contenant du calcium et incuber en secouant.
Les ions calcium se lient aux molécules de colorant, provoquant leur fluorescence.
À l’aide d’un spectromètre de fluorescence, surveillez la fluorescence du colorant en temps réel.
Maintenant, injectez un tampon contenant du calcium à intervalles réguliers.
L’augmentation de la concentration de calcium favorise l’absorption du calcium mitochondrial, réduisant les ions calcium libres disponibles pour se lier au colorant, ce qui entraîne une diminution de la fluorescence.
Une fois que les mitochondries atteignent leur capacité maximale de stockage de calcium, un ajout supplémentaire de calcium déclenche l’ouverture du pore de transition de perméabilité mitochondriale (mPTP).
Cette ouverture des pores libère le calcium des mitochondries dans le tampon, où il se lie au colorant et provoque une fluorescence accrue.
Déterminez la quantité totale de calcium nécessaire pour induire l’ouverture du mP
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