Quantification de la formation de volants membranaires à l’aide de la microscopie électronique à balayage

Les stimulateurs externes activent les cellules et induisent une protrusion membranaire circulaire tridimensionnelle, ou formation de volants membranaires, essentielle pour diverses activités cellulaires.

Pour visualiser la formation de volants de membrane, commencez par une plaque multi-puits contenant une lamelle à la base. Le sommet de la lamelle a des macrophages cultivés.

Traitez ces macrophages avec des molécules stimulatrices qui activent les cellules, facilitant la réorganisation du cytosquelette et la formation de protrusions membranaires. Superposez les cellules avec une solution fixatrice, en réticulant les protéines et en préservant la structure cellulaire.

Traitez les macrophages fixes avec des concentrations d’alcool croissantes pour une déshydratation complète. Desséchez ces macrophages à l’aide d’un sécheur à point critique, en éliminant toute trace d’eau pour une meilleure imagerie.

Montez la lamelle sur un porte-échantillon de microscopie électronique à balayage, ou MEB, à l’aide d’un ruban conducteur. Recouvrez la lamelle contenant des macrophages d’une fine couche métallique, assurant une bonne conductivité électronique pendant l’imagerie.

Placez la lamelle dans