Génération de particules semblables au virus Chikungunya à l’aide d’un système d’expression de baculovirus dans des cellules d’insectes

particules semblables au virus Chikungunya, les VLP, sont des structures non infectieuses composées de protéines d’enveloppe virale intégrées dans une bicouche lipidique et dépourvues de matériel génétique.

Pour produire des VLP de Chikungunya, il faut infecter les cellules d’insectes Spodoptera frugiperda Sf9 avec des baculovirus recombinants exprimant une cassette de gènes structuraux du Chikungunya. La cassette est constituée d’un promoteur de baculovirus fusionné avec des gènes structurels du chikungunya codant pour des protéines de capside et d’enveloppe.

Pendant l’incubation, les glycoprotéines de l’enveloppe du baculovirus se lient aux récepteurs de surface des cellules de l’insecte. Cela facilite l’entrée du baculovirus et la libération de l’ADN viral dans le cytoplasme, générant des polyprotéines contenant des protéines de capside et d’enveloppe du chikungunya.

Après la synthèse, le clivage autocatalytique de la protéine de capside produit la polyprotéine précurseur possédant des protéines d’enveloppe dans le réticulum endoplasmique, RE. Dans la lumière du RE, les enzymes clivent la polyprotéine précurseur, générant des protéines individuelles qui pénètrent dans le compartiment de Golgi pour un traitement ultérieur, formant des hétérotrimères protéiques.

Les protéases résidentes de Golgi clivent les hétérotrimères protéiques, produisant des protéines d’enveloppe matures avec des protéines E2 et E1. Ces protéines d’enveloppe se transloquent vers la membrane, bourgeonnent en VLP et se libèrent dans le milieu.

Transférez la culture infectée dans un tube et centrifugez-la pour granuler les cellules d’insectes. Aspirez le surnageant contenant des VLP et filtrez-le pour éliminer les débris.

Le filtrat résultant, contenant des VLP de chikungunya, est prêt pour les études d’immunopathologie.

Cultivez des cellules de Spodoptera frugiperda préalablement préparées, ou Sf9, en suspension dans des flacons tournants en agitant continuellement à 130 tr/min sur un système de plaques d’agitation multipoints. Maintenir les volumes de culture à un niveau ne dépassant pas la moitié du volume de la fiole tournante pour une bonne aération. Ensuite, exprimez les VLP CHIK en infectant 250 millilitres de cellules Sf9 dans un flacon rotatif à une densité de 2 x 10⁶ cellules par millilitre avec un baculovirus recombinant préalablement préparé, et retournez les cellules dans un incubateur à 28 degrés Celsius.

Utilisez l’exclusion au bleu trypan pour déterminer si la viabilité cellulaire a diminué à 70 % à 80 %. Après confirmation, transférez les cultures directement de la suspension dans des tubes coniques de 50 millilitres et faites tourner les cellules vers le bas. Collectez les surnageants et filtrez-les à travers une membrane poreuse de 0,22 micron avant la sédimentation.