Dosage bactéricide sérique de l’activité bactéricide médiée par le complément d’anticorps

Prélevez un échantillon de sérum dilué en série contenant des anticorps monoclonaux contre les lipopolysaccharides, ou LPS - un composant de la membrane externe des bactéries à Gram négatif.

Introduisez des bactéries à Gram négatif. Les anticorps sériques se lient au LPS bactérien.

Ajouter des protéines complémentaires. Le complexe C1 se lie aux anticorps liés au LPS, formant un C1 enzymatiquement actif.

Le C1 activé clive C4 et C2 pour former la C3 convertase, qui clive C3 pour former la C5 convertase. La convertase clive C5 pour produire C5b, qui recrute C6 et C7. Le complexe résultant s’insère dans la membrane externe et s’associe à C8 et à plusieurs C9, formant un pore.

Les dommages à la membrane externe déstabilisent la membrane interne, provoquant la lyse cellulaire.

Placez le mélange sur une plaque de gélose et étalez-le. Incuber pour la croissance bactérienne. Recouvrir la plaque d’une gélose contenant du chlorure de triphényltétrazolium, ou TTC, qui est réduit par les déshydrogénases microbiennes, conférant une couleur rouge aux colonies bactériennes.

Le nombre de colonies augmente avec la dilution de l’échantillon, ce qui indique une activité bactéricide réduite avec une