Détection de la liaison de la vitronectine aux surfaces bactériennes à l’aide de la cytométrie en flux

Prenez des tubes de cytomètre en flux contenant des souches sauvages et mutantes d’Haemophilus influenzae, type f.

Pipette un tampon contenant des protéines bloquantes et de la vitronectine. Couver.

Les protéines bloquantes réduisent les interactions non spécifiques à la surface bactérienne, tandis que les molécules de vitronectine se lient à la protéine H, une protéine de liaison à la vitronectine, sur les surfaces bactériennes de type sauvage. Dans la souche mutante, la vitronectine ne se lie pas en raison de l’absence de protéine H.

centrifugeuse. Retirez la vitronectine non liée et les protéines bloquantes.

Ajoutez un tampon contenant des anticorps anti-vitronectine primaires, qui se lient spécifiquement à la vitronectine attachée aux surfaces bactériennes de type sauvage.

Ensuite, introduisez des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores, qui se lient aux anticorps primaires de la vitronectine et facilitent la détection de la vitronectine.

centrifugeuse. Retirer les anticorps secondaires non liés. Remettez les bactéries en suspension dans le tampon.

Effectuez une cytométrie en flux pour déterminer la liaison de la vitronectine à la surface bactérienne.

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