Analyse de la relation antigénique entre les virus à l’aide d’un test de microneutralisation basé sur l’image

0 views • 3:17 min • July 8th, 2025

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Ajouter des milieux et des antisérums traités à des enzymes destructeurs de récepteurs dilués en série sur des monocouches de cellules de mammifères, empêchant ainsi la liaison virale non spécifique.

Ajouter une suspension de virus de la grippe. Les anticorps antisérums, spécifiques des protéines virales, se lient, neutralisent les virus et empêchent l’entrée cellulaire.

Une faible concentration d’anticorps neutralisants ou des anticorps non neutralisants permettent une liaison inefficace de l’antigène viral, permettant au virus de se fixer aux récepteurs cellulaires.

Jetez le support. Appliquer un substrat contenant de la cellulose, formant une couche semi-solide.

Le virus utilise la machinerie cellulaire de l’hôte pour former des particules virales et provoquer la lyse cellulaire.

La superposition limite le mouvement du virus, facilitant l’infection localisée et créant des trous dans les monocouches cellulaires.

Retirez la superposition. Fixer et perméabiliser les cellules.

Laver avec un tampon. Ajoutez des anticorps liant les antigènes viraux dans les cellules perméabilisées.

Pipette raifort : des anticorps secondaires conjugués à la peroxydase se lient aux anticorps primaires.

Introduisez des substrats de peroxydase et du peroxyde d’hydrogène, ce qui donne un produit bleu.

Puits d’image pour quantifier les populations cellulaires infectées par le virus contre les dilutions d’antisérum.

Identifier les dilutions d’antisérums indiquant une réduction spécifiée d’une population de cellules infectées afin de déterminer les titres de neutralisation.

Pour effectuer la neutralisation du virus, préparez la monocouche cellulaire deux ou trois jours à l’avance, puis ajoutez 50 microlitres de VGM dans chaque puits de la plaque. Utilisez les colonnes 11 et 12 pour le contrôle du virus et le contrôle cellulaire, respectivement. Ajoutez des aliquotes de 50 microlitres d’une dilution de 1 sur 20 d’enzyme destructrice de récepteurs ou de sérum traité par RDE à la première rangée des colonnes 1 à 10.

Effectuez des dilutions en série en transférant 50 microlitres de la rangée A à la rangée H, et en jetant 50 microlitres de la rangée H. Ensuite, ajoutez 50 microlitres de diluant dans chaque puits de la colonne de contrôle de la cellule. Ajoutez 50 microlitres du virus dans chaque puits de la plaque, à l’exception de la colonne de contrôle cellulaire. Incuber l’assiette à 37 degrés Celsius pendant deux à trois heures. Ensuite, retirez l’inoculum et ajoutez la superposition dans chaque puits. Incuber la plaque toute la nuit à 37 degrés Celsius sans être dérangé. Ensuite, fixez et teignez les plaques.

Pour quantifier la neutralisation, placez une plaque à puits dans la zone de balayage d’un scanner à plat. Scannez la plaque et exécutez le logiciel de lecture de plaques pour calculer les titres viraux requis.

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Last updated: 18 July 2026