Procédé d’immunoprécipitation de réticulation amélioré pour l’identification efficace de l’ARN lié aux protéines dans les testicules de souris

Prenez un testicule de souris fraîchement récolté dans un tampon réfrigéré. Retirez la tunique albuginée, la couche de tissu fibreux.

Triturer le testicule pour libérer les tubes séminifères contenant des cellules germinales et des cellules de Sertoli.

Ajouter un tampon et soumettre les tubules à un rayonnement UV pour une réticulation irréversible de l’ARN avec les protéines associées, préservant ainsi les interactions.

Centrifugez et jetez le surnageant.

Remettre les tubules en suspension dans un tampon de lyse contenant des inhibiteurs de RNase et de protéase.

Sonicer le tissu, libérant des complexes protéine-ARN et d’autres composants intracellulaires. Les inhibiteurs de la RNase et de la protéase inactivent les RNases et les protéases endogènes.

Ajoutez de la DNase pour dégrader l’ADN. Introduire la RNase diluée pour la digestion partielle de l’ARN.

Centrifuger et transférer le surnageant contenant des complexes ARN-protéines dans une solution de billes magnétiques enrobée d’anticorps avec une spécificité élevée par rapport à la protéine de liaison à l’ARN cible.

Appliquez un champ magnétique pour séparer les complexes protéine-ARN liés aux billes. Jetez le surnageant.

Laver a