Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 5:21 min • July 8th, 2025
Prenez une lame de microréseau contenant des peptides d’histones avec des modifications post-traductionnelles cibles et non cibles ou PTM.
Les peptides sont immobilisés via la biotine conjuguée à des endroits spécifiques de la lame de verre fonctionnalisée par la streptavidine.
Les taches contiennent également un fluorophore vert immobilisé conjugué à la biotine, facilitant l’identification des taches.
Introduire un tampon de blocage, empêchant l’interaction d’anticorps non spécifiques.
Retirez le tampon et centrifugez-le pour sécher la lame.
À l’intérieur d’une imprimante à cire, bordez le réseau avec de la cire.
Équilibrez le réseau à l’aide d’un tampon d’hybridation.
Incuber avec les anticorps primaires spécifiques d’un PTM cible.
Introduire des anticorps secondaires conjugués au fluorophore rouge qui se lient aux anticorps primaires.
Retirez les anticorps non liés et centrifugez pour sécher la lame.
Imagez la lame à l’aide d’un scanner à microréseaux. La fluorescence verte aide à identifier les taches, tandis que la fluorescence rouge indique l’interaction PTM-anticorps, démontrant la spécificité de l’anticorps.
La reconnaissance du PTM cible démontre la spécificité de l’antico
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