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DOI: 10.3791/3791-v
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This study presents an enhanced protocol for a multiplexed high-throughput antibody microarray with lectin detection, aimed at glycosylation profiling of specific proteins. The new method offers reliable reagents and significantly reduces time, cost, and equipment needs compared to previous techniques.
Dans cette étude, nous décrivons un protocole amélioré pour une puce anticorps à haut débit multiplexées avec la méthode de détection lectine qui peut être utilisé dans le profilage de glycosylation des protéines spécifiques. Ce protocole propose de nouveaux réactifs fiables et réduit considérablement le temps, le coût et les besoins en équipement de laboratoire par rapport à la procédure précédente.
Cet article vidéo décrit une procédure permettant d’obtenir des profils de glycosylation de 20 glycoprotéines différentes dans un échantillon de sérum de patient atteint d’un carcinome hépatocellulaire à l’aide d’une puce à anticorps bloquée chimiquement : première glycoprotéine : des anticorps spécifiques sont imprimés directement sur les lames de la puce et les glycanes d’anticorps sont bloqués pour empêcher la liaison des lectines. Lorsque des échantillons de sérum de patient sont appliqués, les glycoprotéines de l’échantillon sont capturées par les anticorps. Des protéines de liaison aux glycanes biotinylées sont ensuite ajoutées pour détecter les glycanes et du neu travain diconjugué est ajouté pour marquer les lectines biotinylées.
La lame de la puce est ensuite balayée pour détecter la fluorescence : l’analyse des données résultantes révèle les profils de glycosylation des protéines de l’échantillon. Cette technique présente plusieurs avantages par rapport aux méthodes existantes comme l’HPLC. Cette méthode permet de détecter les glycoprotéines individuelles dans leur état natif.
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