Détection et mesure de peptides cibles à l’aide d’un biocapteur d’immunosonde capacitif

Commencez avec un fil de platine recouvert de perfluoroalcoxy assemblé avec une couche de polydopamine.

Trempez cette sonde dans une solution contenant des anticorps spécifiques du peptide cible, qui s’immobilisent sur la polydopamine, formant ainsi une sonde immunitaire.

Lavez et placez l’immunosonde dans une chambre d’écoulement avec une électrode de terre en chlorure d’argent, en établissant un circuit.

Tout d’abord, introduisez le tampon et appliquez une tension pour activer l’immunosonde, ce qui lui permet de fonctionner comme une batterie ou un condensateur, stockant l’énergie sous forme de charge électrique.

Enregistrez le signal électrique pour générer la ligne de base.

Maintenant, exposez le biocapteur à une solution contenant les peptides cibles.

Ces peptides se lient aux anticorps de la sonde, provoquant une altération de la charge locale et de l’énergie stockée dans le biocapteur.

Enregistrez le signal électrique. Une augmentation du signal indique la présence du peptide cible, tandis que l’amplitude de ce signal est corrélée à la concentration du peptide cible.

Tout d’abord, coupez une longueur de 25 centimètres de fil de platine recouvert de perfluoroalcoxy. Ensuite, à l’aide d’un scalpel, dénudez environ 5 millimètres de revêtement perfluoroalcoxy d’une extrémité, en prenant soin de ne pas couper le fil de platine. Maintenant, insérez l’extrémité dénudée du fil de platine dans une broche de connecteur mâle plaquée or de 1 millimètre. Ensuite, à l’aide d’une pince à bec effilé, sertissez les dents de la goupille du connecteur autour de l’extrémité dénudée du fil de platine et soudez le fil de platine à la broche du connecteur plaquée or.

Ensuite, préparez la solution de dopamine en ajoutant 50 milligrammes de chlorhydrate de dopamine dans 50 millilitres de PBS de 10 millimolaires, avec un pH de 6, et mélangez en agissant. Après avoir complètement dissous la dopamine, placez l’extrémité du fil de platine dans le récipient contenant le PBS fraîchement préparé et supplémenté en dopamine. Connectez l’électrode du disque de chlorure d’argent au canal de terre dans l’étage de tête. Ensuite, placez le disque de chlorure d’argent dans le récipient contenant du PBS et du fil de platine supplémentés en dopamine.

Avant de poursuivre, connectez un shunt de fil aux canaux de référence de l’étage de tête. Ouvrez le logiciel interactif d’acquisition de données et définissez un protocole de potentiel de commande d’électrodéposition en dents de scie en réglant le potentiel de départ à moins 0,6 volts, le potentiel de fin à 0,65 volts, la vitesse de balayage à 0,04 volts par seconde et la durée de dépôt à 420 secondes.

Après avoir terminé le dépôt de polydopamine, retirez la pastille de chlorure d’argent moulue et la pointe du fil de platine du récipient. Placez l’embout métallique dans un microtube contenant du PBS de pH 7,4 pendant 2 à 5 minutes et assurez-vous que l’embout métallique n’entre pas en contact avec les côtés ou le fond du microtube. Ensuite, préparez la solution d’anticorps en combinant l’anticorps d’intérêt avec le PBS de pH 7,4, dans un rapport de 1 à 20, dans un récipient de taille appropriée.

Ensuite, faites tremper l’extrémité déposée de polydopamine de l’électrode de platine dans une solution d’anticorps pendant deux heures à température ambiante, en vous assurant que l’extrémité du fil de platine est suspendue dans la solution et ne repose pas sur la surface intérieure du microtube. Placez l’embout fonctionnel de l’immunosonde capacitive dans la chambre d’écoulement, en prenant soin de ne pas déranger l’extrémité de l’électrode de quelque manière que ce soit, car cela pourrait endommager l’embout sensoriel de la sonde.

Avant le premier test expérimental, effectuez une exécution standard TBS pour conditionner l’immunosonde capacitive et, pour le protocole de tension, réglez le potentiel de pas positif à 110 millivolts, le potentiel de pas négatif à moins 5 millivolts, la durée du pas à 20 millisecondes et la durée d’acquisition à 600 secondes.

Ensuite, créez la solution peptidique d’intérêt, en utilisant le même TBS. Pour maintenir la composition du superfusat, configurez un système de collecteur où le superfusat peut être commuté entre le TBS et le TBS supplémenté en peptides. Utilisez les paramètres standard TBS et configurez le protocole d’acquisition de données de détection de peptides en définissant la durée d’acquisition sur 360 secondes.