Détection quantitative de bactéries multiplexées à l’aide de microsphères magnétiques marquées à un colorant

Prenez une plaque de dosage contenant un mélange de microsphères de polystyrène magnétiques teintées à l’intérieur avec des fluorophores spectralement différents.

Chaque ensemble de microsphères est couplé de manière covalente à des anticorps de capture spécifiques aux bactéries pathogènes distinctes.

Ajouter un mélange de bactéries pathogènes tué par la chaleur. Couver.

Les anticorps de capture se lient aux antigènes bactériens cibles, formant des complexes microsphères-bactéries.

Utilisez un séparateur magnétique pour décanter les complexes. Jetez les bactéries non liées et lavez avec un tampon.

Ajoutez des anticorps de détection tampons et biotinylés, qui se lient spécifiquement aux bactéries liées aux microsphères.

Séparez magnétiquement les complexes et lavez-les avec un tampon.

Remettre les complexes en suspension dans le tampon. Molécules rapporteures de pipette comprenant de la streptavidine couplée à des fluorophores, qui se lient aux anticorps de détection biotinylés.

Séparez et lavez magnétiquement les complexes. Suspendre à nouveau dans la mémoire tampon.

Au cours de l’analyse basée sur l’écoulement, le premier laser excite les fluorophores internes de la microsphère, g