Génération d’un vaccin multivalent à vésicules de la membrane externe

Prenons l’exemple de polyplexes de transfection contenant des plasmides cibles liés à un polymère. Les plasmides codent pour un antigène viral fusionné à un marqueur peptidique et à un marqueur d’affinité.

Incuber les polyplexes avec des cellules de mammifères, qui internalisent les polyplexes à l’intérieur des endosomes.

Le polymère induit la rupture des vésicules. Les plasmides libérés expriment l’antigène viral, qui est sécrété extracellulairement.

Récoltez le surnageant contenant l’antigène et les contaminants. Ajouter un agent concurrent à faible concentration.

Chargez-le sur une colonne de chromatographie d’affinité.

Les étiquettes d’affinité se lient à la résine de la colonne, immobilisant l’antigène, tandis que l’agent concurrent diminue la liaison non spécifique.

Faire couler l’agent concurrent à une faible concentration, en éliminant les contaminants faiblement liés.

Laver avec des concentrations croissantes d’agents concurrents pour déplacer les antigènes fortement liés, en les éluant.

Introduisez des vésicules de membrane externe bactériennes, ou OMV, avec une protéine de capture liée à la surface et incuberez.

Les marqueurs peptidiques d’antigène se lient aux protéines