Génération de précurseurs d’interneurones corticaux à partir de cellules souches embryonnaires de souris
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:03 min • July 8th, 2025
Prenez des cellules souches embryonnaires de souris en suspension dans des milieux sans sérum contenant de petites molécules inhibitrices.
Ensemencez les cellules sur une plaque de culture non adhérente, leur permettant de proliférer et de s’agréger pour former des corps embryoïdes tridimensionnels ou EB.
De plus, les inhibiteurs bloquent les voies de signalisation non neuronales et induisent la différenciation des cellules souches embryonnaires vers un destin neural cortical.
Transférez les EB dans un tube, centrifugez et retirez le surnageant.
Remettre les EB en suspension dans une solution contenant un cocktail d’enzymes et de la DNase.
Les enzymes dissocient les EB en cellules uniques, tandis que la DNase dégrade l’ADN contaminant.
Ajouter un milieu sans sérum contenant des inhibiteurs pour arrêter l’activité enzymatique, puis centrifuger et éliminer les enzymes contenant le surnageant.
Remettre les cellules en suspension dans des milieux contenant de petites molécules inhibitrices et les transférer sur des plaques de culture recouvertes de facteurs d’adhésion.
Les cellules se fixent à la surface de la plaque revêtue.
Les inhibiteurs empêchent la mort cellulaire apoptotique et
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