Évaluation des effets des toxines sur le développement du réseau neuronal de l’embryon de poulet à l’aide de réseaux de multiélectrodes

Commencez par des cultures adhérentes de neurones embryonnaires précoces de poussin sur des réseaux de multiélectrodes recouverts de matrice extracellulaire, ou MEA.

La base des AEM contient des grilles de minuscules électrodes qui enregistrent l’activité neuronale.

Dans la culture test, les neurones se développent en présence d’une toxine, tandis que dans la culture témoin, les neurones se développent sans la toxine.

Avant l’enregistrement, remplacez le support dans les deux MEA par un support exempt de toxines et incubez brièvement.

Ensuite, placez un MEA dans l’appareil d’enregistrement et commencez l’enregistrement.

Les neurones communiquent par le biais d’impulsions électriques appelées potentiels d’action ou pointes.

Au niveau de la synapse, ces potentiels d’action déclenchent la libération de neurotransmetteurs, propageant le signal au neurone suivant.

Les électrodes MEA enregistrent les pointes générées par les neurones synaptiquement connectés.

Dans la condition de contrôle, le réseau neuronal mature sain présente une activité de pic synchrone.

Dans la culture test, la réduction de l’enrichissement et de la synchronie suggère une altération de la maturation du réseau neuronal causée par la toxine.

Le jour de l’acquisition, remplacez le milieu de culture par un milieu neurobasal frais et remettez les matrices dans l’incubateur de_CO2 pendant au moins deux heures avant l’enregistrement. Démarrez le logiciel d’enregistrement et réglez la température du réseau multi-électrodes à 37 degrés Celsius en cliquant sur l’icône de température. Définissez les paramètres d’acquisition en sélectionnant les flux dans le panneau de gauche et en cliquant avec le bouton droit de la souris sur l’icône de la muse. Ensuite, sélectionnez Ajouter un traitement et un détecteur de pointes et cliquez sur OK dans la fenêtre contextuelle. Spike Detector 6 de STD apparaîtra sous le nom du fichier.

Ensuite, faites un clic droit sur le détecteur de pointes, sélectionnez Ajouter un traitement et un détecteur de rafale, puis cliquez sur OK dans la fenêtre contextuelle. Le détecteur de rafale ISI apparaîtra sous l’icône de la muse. Ensuite, faites un clic droit sur Détecteur de rafale, sélectionnez Ajouter un compilateur de traitements et de statistiques neuronales. Dans la fenêtre contextuelle, assurez-vous que En-tête de fichier, Statistiques de puits agrégées et Synchronisation sont sélectionnés. Cliquez sur OK.

Le compilateur de statistiques apparaîtra ci-dessous. Cliquez sur l’icône de l’horloge en bas de l’écran et modifiez les informations dans la section Paramètres pour enregistrer toutes les 5,1 minutes et enregistrer pendant cinq minutes. Celle-ci sera lancée immédiatement et sera exécutée une fois. Après avoir récupéré le réseau multi-électrodes de l’incubateur, placez-le sur l’unité d’enregistrement et verrouillez-le en place. Démarrez l’enregistrement de l’activité réseau en cliquant sur Démarrer l’enregistrement dans la section d’enregistrement programmé.