Visualisation des modèles de projection axonale des motoneurones embryonnaires chez la drosophile

Commencez par un tube contenant des embryons de drosophile de stade 16 avancé dans un milieu de montage.

Les motoneurones de la drosophile sont immunomarqués.

Transférez un embryon sur une lame de verre et retirez-le du support de montage.

Ensuite, placez l’embryon côté ventral vers le haut et disséquez-le.

Orientez la partie antérieure contenant les motoneurones avec le côté dorsal vers le haut.

À l’aide d’une aiguille en tungstène, coupez le long de la ligne médiane dorsale et étalez la paroi du corps. Déplacez l’embryon dans le support de montage. Ensuite, retirez les organes internes pour exposer les

neurones marqués.

Transférez l’embryon sur une nouvelle lame, puis montez-le et scellez-le.

Observez à l’aide d’un microscope à contraste interférentiel différentiel la lumière traverser l’embryon, générant ainsi une image à haute résolution.

Les neurones marqués avec des motifs de projection axonale apparaissent brun foncé sur un fond clair.

Les motoneurones se ramifient en deux nerfs principaux : les nerfs intersegmentaire et segmentaire, et une branche mineure, le nerf transverse, qui innerve les muscles.

Pour fileter les embryons, placez-les sur une lame de verre

Tout d’abord, déplacez-les dans une goutte de glycérol côté ventral vers le haut. Ensuite, sous un microscope de dissection, coupez la partie antérieure à 1 quart de la longueur du corps. Et retirez la région la plus postérieure, qui est libre d’axones moteurs.

Maintenant, à l’aide d’une sonde à aiguille, déplacez la préparation hors du glycérol, côté dorsal orienté vers le haut, et positionnez-la horizontalement dans le champ de vision. L’étape suivante nécessite une fine aiguille en tungstène qui a été insérée dans la région creuse d’une sonde à aiguille, puis pliée à l’extrémité. À l’aide de l’aiguille de tungstène, faites une petite incision à l’extrémité postérieure de l’embryon et continuez à couper la ligne médiane dorsale.

Assurez-vous que la pointe de l’aiguille en tungstène ne touche pas la surface de la lame de verre pendant la dissection, car l’aiguille se pliera facilement contre le verre.

Puis à l’aide de la sonde, renvoyez la préparation dans la goutte de glycérol, et positionnez-la côté dorsal vers le haut. Là, détachez l’intestin de la paroi corporelle en dépliant chaque paroi corporelle dans une direction latérale ventrale. Les deux parois du corps doivent se séparer. Maintenant, à l’aide de la sonde, déplacez avec précaution les rabats de la paroi du corps sur une lame de verre. Sur la lame, utilisez une aiguille en tungstène pour retirer les organes internes en les poussant latéralement.

Pour stabiliser l’aiguille de tungstène et éviter qu’elle ne soit endommagée, maintenez les sondes d’aiguille creuses qui maintiennent l’aiguille de tungstène calées contre la surface de la lame de verre tout en manipulant l’aiguille de tungstène.

Montez maintenant les préparations et 8 microlitres de solution de montage sur une nouvelle lame en verre. Fixez une lamelle et scellez les bords avec du vernis à ongles ordinaire. Ensuite, capturez des images à haute résolution à l’aide de l’optique DIC.