Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:15 min • August 7th, 2025
Prenez un chiot souris génétiquement modifié portant une cassette STOP flanquée de loxP qui bloque l’expression de la protéine fluorescente rouge ou RFP.
Fixez le chiot sur un cadre stéréotaxique sur mesure et couvrez-le de glace pour maintenir l’anesthésie.
Désinfectez le cuir chevelu et marquez lambda comme point de référence.
Alignez l’aiguille d’injection sur les coordonnées striatales par rapport à lambda et perforez le crâne.
Rétractez l’aiguille à la surface du crâne, puis insérez-la dans la profondeur cible.
Injecter le vecteur viral mélangé à un colorant dans le striatum à un rythme contrôlé. Le vecteur code pour des protéines fluorescentes vertes ou GFP et une recombinase Cre.
Retirez l’aiguille lentement pour éviter le reflux de la solution.
Retirez le chiot et laissez-le récupérer.
Dans les cellules striatales, le virus libère son génome, permettant l’expression de la Cre recombinase et de la GFP. Cre excise la cassette STOP flanquée de loxP, activant l’expression RFP.
L’expression simultanée de GFP et de RFP confirme la réussite de la manipulation génétique.
Placez le chiot avec le gant dans le plateau de tête et mettez de la glace pilée autour du manchon en latex pour mainteni
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