Effet de la Femme accessoire Gland produits sur la ponte dans les gastéropodes

L’objectif général de ce protocole est de caractériser les effets des protéines du liquide séminal sur le comportement de ponte d’une espèce hermaphrodite simultanée. Pour ce faire, on isole d’abord les individus à partir d’une culture de laboratoire standardisée, puis on dissection les organes cibles. Deuxièmement, les spermatozoïdes sont collectés et une solution de traitement est préparée.

Après cela, les escargots sont inséminés artificiellement. Ensuite, ils sont mis dans un essai biographique. Dans des conditions standard, les masses d’œufs sont recueillies, scannées et placées dans des BS individuelles pour éclore.

Après quelques semaines, les nouveau-nés sont comptés et scannés, après quoi toutes les images peuvent être analysées à l’aide d’un logiciel gratuit. Ce protocole peut aider à répondre aux questions sur les processus de sélection sexuelle qui sont médiés par les protéines du liquide séminal. Parce que nous examinons ici les hermaphrodites simultanés, nous pouvons également déterminer si ces processus fonctionnent de manière similaire ou différente comme ils le font chez des espèces sexuées distinctes.

Pour ce protocole, nous avons utilisé le grand IL in les, que nous maintenons à l’Université VU d’Amsterdam. Nous utilisons cette espèce pour étudier les questions relatives à la sélection sexuelle et à la reproduction. Chez les Hermaphrodites, en raison de sa taille corporelle relativement grande, il est expérimentalement très accessible.

De plus, parce qu’il est utilisé dans de nombreuses disciplines biologiques différentes en tant qu’espèce modèle, nous en savons beaucoup sur la biologie de base de ces animaux. Je m’appelle Yumi. Je suis titulaire d’un doctorat au Département des sciences écologiques.

En pleine université, je démontrerai les protocoles suivants. Commençons. Pour réaliser une biose fiable, une culture en laboratoire est le plus souvent utilisée pour exclure les variables cachées.

L’eau à faible teneur en cuivre est maintenue à 20 degrés Celsius et le cycle d’obscurité légère est de 12 par 12 heures. À l’Université VU, la culture en laboratoire est maintenue dans des bassins d’élevage avec échange d’eau continu. Dans des conditions standard, les escargots adultes sont nourris de laitue à libido et séparés en fonction de leur classe d’âge.

Une fois que les escargots sont retirés de l’installation d’élevage, ils seront considérés comme utilisés et ne pourront pas être renvoyés dans les bassins d’élevage. Avant de commencer la procédure, vous aurez besoin d’un stéréomicroscope, d’une plaque de dissection avec des épingles, de petits ciseaux chirurgicaux, d’une pince, d’une seringue remplie d’une solution de chlorure de magnésium et de quelques serviettes en papier pour euthanasier l’escargot, pénétrer le pied avec l’aiguille d’injection à un angle de 45 degrés et appliquer doucement une pression continue jusqu’à ce que l’escargot se détende et reste étendu. Retirez l’aiguille d’injection et assurez-vous que l’escargot est euthanasié.

Ensuite, prenez la pince et retirez soigneusement la coquille. En suivant la courbure à mi-chemin, grattez doucement le muscle ular de la coquille. Ensuite, tournez doucement l’escargot hors de sa coquille en suivant le sens d’enroulement de la coquille.

Maintenant, l’escargot a été retiré de sa coquille et la coquille peut être jetée. Ensuite, placez l’escargot sur la plaque de dissection et placez une épingle à travers l’extrémité arrière du pied. Placez ensuite une épingle dans la tête.

Mettez un peu de tension sur l’escargot et placez la goupille dans la plaque. Maintenant, l’escargot est prêt pour la dissection. Allumez la lumière du stéréomicroscope et ajustez le microscope.

Avant de faire la première incision, il est important de localiser le porto féminin. Ce sera plus tard un point de référence. Faites une première incision juste sous le bord du manteau et coupez vers le poror femelle.

Faites un tour autour du pore bonno vers la tête. Assurez-vous de ne couper que la peau et de ne toucher aucun organe et de couper en ligne droite. Pour cette étude, nous disséquerons la prostate et les vésicules séminales pour le liquide séminal et les spermatozoïdes respectivement.

Veuillez noter que pour des réserves complètes de spermatozoïdes et de liquide séminal, les escargots doivent être isolés pendant une semaine et nourris ad libido. La dissection est la même que celle expliquée précédemment. Les vésicules séminales sont situées dans la partie postérieure de l’animal.

Ensuite, la prostate sera suspendue dans une solution saline et mise sur de la glace. Plus tard. Ceux-ci seront mélangés aux solutions de traitement.

Avant l’injection intravaginale, les spermatozoïdes collectés seront ajoutés au liquide séminal ou aux protéines individuelles à une dose pertinente. Pour cette technique d’insémination artificielle, vous aurez besoin d’une seringue d’un millilitre contenant la solution de test, installez une aiguille d’injection sur les seringues, en vous assurant qu’il n’y a pas de bulles coincées dans les seringues pour l’injection, utilisez le tube en silicone avec précaution. Faites glisser le tube en silicone sur l’aiguille d’injection.

Assurez-vous que le tube est percé et retirez l’air du tube. Avant l’injection, l’escargot doit être sédatif. Cela suivra le même protocole que dans le chapitre deux.

L’escargot recevra une dose de deux à trois millilitres de 50 micromolaires de chlorure de magnésium. Lorsque l’escargot est correctement sédaté et détendu, déposez-le dans le moule pour le maintenir dans une position stable. Ensuite, saisissez l’extrémité du tube en silicone avec une paire de pinces fines et poussez-le doucement dans le poror femelle.

Ensuite, appliquez doucement une pression sur la seringue et injectez soigneusement le volume prescrit de la solution d’essai. Attendez une demi-minute pour que la pression dans le tube se propage dans l’organe féminin. Après cela, retirez délicatement le tube et mettez l’escargot dans son propre récipient spécifique.

Après tout, les escargots ont été inséminés artificiellement. Ils peuvent être transportés vers leurs réservoirs expérimentaux et le bioessai biologique peut commencer. Les escargots se remettront de la sédation après quelques heures. Essais biologiques.

Pour la sélection sexuelle, les expériences prennent normalement deux semaines avant que le biosa puisse être commencé. Il est important de mettre tous les individus dans leurs propres contenants et de les étiqueter. Ensuite, mesurez la longueur de la coquille de chaque escargot.

C’est un bon indicateur de leur taille, qui peut avoir un effet sur le comportement sexuel. Après cela, les escargots sont mis dans un réservoir expérimental. Ce réservoir a les mêmes conditions standard que l’installation d’élevage.

Comme nous l’avons vu dans le premier chapitre, il est important de placer les récipients dans la bonne orientation afin que les ouvertures suivent le débit d’eau dans le réservoir. Pendant les essais biologiques, les escargots doivent être nourris régulièrement. Une quantité standard de disques de laitue est coupée avec une perforatrice en métal.

Une dose suffisante est de deux disques tous les deux jours. Avec l’espèce modèle, lumia stauss, les escargots doivent être vérifiés pour les masses d’œufs tous les deux jours. Ces masses d’œufs seront collectées pour les mesures.

Pour la numérisation des œufs, vous aurez besoin d’un ordinateur portable contenant le pilote du scanner, d’un scanner à plat, d’une échelle millimétrique standard, d’une cuillère à masse d’œufs et de plaques de verre à pondre sur les masses d’œufs. Tout d’abord, prenez la cuillère et grattez les masses d’œufs des parois du récipient. Les masses d’œufs opaques viennent d’être pondues et ne peuvent pas être utilisées.

Lors de cette mesure, placez les masses d’œufs sur les plaques de transfert et répétez ces étapes jusqu’à ce que les plaques soient pleines. Après cela, placez les masses d’œufs sur les carreaux de verre dans le même ordre que les plaques de transfert. Les masses d’œufs colleront au carreau de verre, le retourneront et le placeront soigneusement sur le scanner à plat juste en dessous de la balance.

Appliquez ensuite une pression sur les plaques pour écraser les masses d’œufs. Cela ajoutera même maintenant tous les œufs afin qu’ils soient également bien scannés. Avant de numériser, il est conseillé d’ajuster les paramètres pour obtenir le meilleur résultat.

Pour la numérisation, il est important d’ajuster la résolution à son maximum pour effectuer un balayage de prévisualisation Pour recadrer ensuite la zone de travail, et enfin, pour ajuster la luminosité et le contraste avant d’effectuer le balayage final. Après le balayage, les masses d’œufs seront placées dans leurs propres flacons étiquetés pour mûrir et éclore. L’eau de ces flacons est rafraîchie tous les deux jours pour maintenir l’oxygène à un niveau approprié.

Au fur et à mesure que d’autres escargots éclosent, différentes techniques doivent être utilisées pour rafraîchir l’eau. Le meilleur ordre est de verser ou de déborder au début, puis d’aspirer l’eau avec une pipette ouvrir l’image JA tableur programme. Pour enregistrer les données et une photo à partir de l’image J, utilisez l’outil de zoom pour accéder à l’échelle millimétrique.

Zoomez et ajustez la fenêtre de manière à ce qu’un millimètre remplisse l’écran. Tracez une ligne à l’aide de l’outil ligne entre les deux lignes indicatrices. Ensuite, naviguez pour analyser, puis définissez l’échelle.

Dans le menu contextuel, vous verrez la longueur mesurée ajuster la distance connue à un et l’unité de à millimètres. Cochez la case global et fermez la fenêtre. Maintenant que l’échelle a été réglée, nous pouvons zoomer vers les premières masses d’œufs Jusqu’à 800 %Utilisez l’outil elliptique pour dessiner la circonférence des œufs.

Appuyez sur D pour dessiner la circonférence. Cela permettra d’éviter de mesurer deux fois le même œuf. Appuyez sur M pour mesurer la circonférence.

Une fenêtre s’ouvrira une fois que suffisamment de données auront été collectées. La fenêtre de données peut être enregistrée sous forme de fichier Excel. Les données peuvent également être copiées directement dans une feuille de calcul.

Si les mesures préférées n’apparaissent pas dans la fenêtre contextuelle, elles peuvent être ajustées et analysées. Des mesures définies, le comptage des œufs individuels par masses d’œufs peuvent également être effectués à l’aide du plugin de compteur de cellules. Accédez aux plugins.

Ensuite, analysez et sélectionnez le compteur de cellules. La fenêtre du compteur de cellules apparaîtra. Cochez la case Conserver l’original et appuyez sur Initialiser.

Une nouvelle fenêtre de compteur est apparue. Sélectionnez l’outil Croix ici dans la barre d’outils. Sélectionnez ensuite un type de compteur dans le menu du compteur de cellule.

En cliquant dans la fenêtre du compteur de cellules, les œufs seront comptés. Le nombre total se trouve à côté du type de compteur dans le menu du compteur de cellules. Plusieurs masses d’œufs peuvent être comptées avec le compteur de cellules.

Les types de compteurs peuvent être ajoutés et supprimés si vous le souhaitez, ce nombre doit être copié manuellement dans une feuille de calcul ou appuyez sur les résultats, et une fenêtre apparaîtra. Affichage de tous les résultats. Avec cette méthode, nous avons montré comment collecter des protéines de liquide séminal, comment les tester de manière significative.

Nous l’avons montré en utilisant l’extrait complet de la glande prostatique, mais bien sûr, les protéines individuelles du liquide séminal peuvent être testées de la même manière. De plus, il est possible d’examiner d’autres processus et la ponte des œufs. Les résultats de nos expériences ont montré qu’il existe une seule protéine du liquide séminal appelée statine avios qui médie une réduction de la voie de l’œuf.

De plus, nous constatons que le transfert de liquide séminal augmente la taille des tenons. La statine est la première protéine de liquide séminal entièrement caractérisée chez un hermaphrodite simultané. Bien que les effets du liquide séminal aient souvent été signalés chez des espèces de sexes distincts, nos résultats soulignent que les fluides séminal sont tout aussi importants chez les Hermaphrodites.