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DOI: 10.3791/52056-v
Ruth Tevlin*1, Adrian McArdle*1,2, Charles K.F. Chan2, John Pluvinage2, Graham G. Walmsley1,2, Taylor Wearda1,2, Owen Marecic1,2, Michael S. Hu1, Kevin J. Paik1, Kshemendra Senarath-Yapa1, David A. Atashroo1, Elizabeth R. Zielins1, Derrick C. Wan1, Irving L. Weissman1,2, Michael T. Longaker1,2
1Hagey Laboratory for Pediatric Regenerative Medicine, Division of Plastic and Reconstructive Surgery, Department of Surgery,Stanford University School of Medicine, 2Institute for Stem Cell Biology and Regenerative Medicine,Stanford University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Les ostéoclastes sont des cellules du capital de résorption osseuse dans le corps. Une capacité à isoler les ostéoclastes en grand nombre a conduit à des avancées significatives dans la compréhension de la biologie des ostéoclastes. Dans ce protocole, nous décrivons une méthode pour l'isolement, la culture et la quantification de l'activité des ostéoclastes in vitro.
L’objectif global de cette procédure est d’isoler les ostéoclastes de la moelle osseuse de souris en grand nombre. Ceci est accompli en prélevant d’abord des os de souris euthanasiées. Ensuite, les cellules sont libérées de la moelle osseuse à l’aide d’un mortier et d’un pilon pour écraser les os dans un tampon de faits.
Ensuite, la solution de moelle osseuse est superposée sur le milieu de séparation cellulaire à gradient de densité et la séparation cellulaire à gradient de densité est effectuée. Enfin, la couche contenant les cellules d’intérêt est aspirée et les cellules sont placées dans un milieu d’induction de microphages de moelle osseuse. En fin de compte, la coloration au piège est utilisée pour montrer la présence d’un grand nombre d’ostéoclastes.
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