Génération efficace de hiPSC neurones Lineage Reporters Knockin spécifique en utilisant l'CRISPR / Cas9 et Cas9 Système Double Nickase

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28 mai 2015

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Les outils d’édition du génome tels que le système CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)/Cas (associé à CRISPR) ont considérablement amélioré l’efficacité du ciblage génique dans les cellules souches pluripotentes induites humaines (hiPSC). Ce manuscrit décrit un protocole permettant de générer un rapporteur hiPSC spécifique à la lignée à l’aide de la recombinaison homologue assistée par le système CRISPR/Cas.

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G n ration de rapporteurs knock in

Chapters in this video

0:05

Title

1:54

Design of Targeting Vectors

2:41

Design and Vector Construction of sgRNAs for CRISPR/Cas9 System

5:20

Design and Construction of Cas9n Double Nickase sgRNA

8:06

Evaluation of sgRNAs by T7 Endonuclease1

11:03

In Silico Prediction of Potential Off Target Sites

12:32

Results: The T7E1 Assay is Used to Evaluate sgRNAs Prior to Transfecting hiPSCs

13:56

Conclusion

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