Name: La construction de base de cellules fluorescentes neurotransmetteur Engineered Reporters (CNiFERs) pour la détection optique des neurotransmetteurs In Vivo (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 48 s
Description: Découvrez la construction de CNiFERs utilisant des cellules HEK293 pour la détection optique des neurotransmetteurs in vivo. Cette méthode permet de surveiller en temps réel la libération de neuromodulateurs dans le cerveau.

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Nous remercions B. Conklin (Université de Californie, San Francisco) pour fournir les qi5 G et G QS5 cDNA, A. Schweitzer pour l&#39; assistance à l&#39;électronique, N. Taylor pour l&#39; aide au dépistage des clones, Ian Glaaser et Robert Rifkin pour la relecture et Olivier Griesbeck pour TN-XXL. Ce travail a été soutenu par des subventions de recherche par le biais de l&#39;Institut national américain sur l&#39;abus des drogues (NIDA) (DA029706; DA037170), l&#39;Institut national d&#39;imagerie biomédicale et Bioengineering (NIBIB) (EB003832), Hoffman-La Roche (88610A) et le &quot;Neuroscience liés à la drogue de subvention de formation des abus »par NIDA (DA007315).

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</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à dévoiler.

La création de CNiFERs offre une stratégie innovante et unique pour mesurer optiquement la libération de neurotransmetteurs dans le cerveau in vivo. CNiFERs sont parfaitement adaptés pour la mesure de libération extrasynaptique, à savoir, le volume de conduction, pour les neurotransmetteurs. Surtout, chacun CNiFER possède les propriétés du RCPG natif, fournissant une mesure optique physiologique des changements dans les niveaux de neurotransmetteurs dans le cerveau. À ce jour, CNiFERs ont été créés pou...

Pour bien comprendre comment les neurones communiquent dans le cerveau, il est nécessaire d&#39;avoir une méthode pour mesurer la libération de neurotransmetteurs in vivo. Il existe plusieurs techniques bien établies pour la mesure in vivo des neurotransmetteurs. Une technique couramment utilisée est microdialyse, dans laquelle une canule est insérée dans le cerveau et un faible volume de liquide céphalorachidien est recueillie et analysée par chromatographie en phase liquide à haute performance et détection électrochimique 1. Microdialyse a une résolution spatiale de l&#39;ordre de quelques diamètres de la sonde, par exemple environ 0,5 mm pour un diamètre microsonde 200 um. La résolution temporelle de cette technique, cependant, est lente en raison des intervalles d&#39; échantillonnage qui durent généralement environ 5 minutes ou plus 1. En outre, les analyses ne sont pas faites en temps réel. Une autre technique consiste à balayage rapide voltamétrie cyclique (FSCV), qui utilise une sonde en fibre de carbone qui est insérée dans le cerveau. FSCV a une excellente températurerésolution orale (subsecond), haute sensibilité (nanomolaire), et la résolution spatiale avec des diamètres de sonde de 5 à 30 um. Cependant, FSCV est limitée aux émetteurs qui produisent une oxydation caractéristique et le profil de réduction avec la tension sur une sonde potentiométrique de carbone 2. Une troisième technique pour mesurer les neurotransmetteurs est directement à travers neurotransmetteurs génétiquement codés (NT) biocapteurs 3. Avec cette méthode, une protéine de fusion est créée qui contient un domaine de liaison de ligand pour un émetteur couplé à un transfert d&#39;énergie de résonance de fluorescence (FRET) paire à base de fluorophores 4 ou 5 permuté une GFP. Contrairement aux deux procédés précédents, ces biocapteurs sont génétiquement codées et exprimées sur la surface d&#39;une cellule hôte, telle qu&#39;un neurone, grâce à la production d&#39;animaux transgéniques ou aiguë avec l&#39;utilisation d&#39;agents viraux pour infecter des cellules. À ce jour, les biocapteurs génétiquement codés ont été seulement développé pour detecting de glutamate et de GABA 05/03. Limitations avec ces techniques ont été la faible sensibilité, dans la gamme nM, et l&#39;incapacité à élargir la détection du grand nombre d&#39;émetteurs, par exemple, les neurotransmetteurs classiques, neuropeptides et neuromodulateurs, qui signalent par G récepteurs couplés aux protéines (RCPG). En fait, il y a près de 800 GPCR dans le génome humain. Pour combler ces lacunes, nous avons développé un outil innovant pour mesurer optiquement la libération de tout neurotransmetteur qui signale par un GPCR. CNiFERs (fluorescente neurotransmetteur à base de cellules rapporteurs modifiés) sont des cellules HEK293 clonales modifiées pour exprimer un GPCR spécifique qui, lorsqu&#39;il est stimulé, provoque une augmentation intracellulaire [Ca 2+] , qui est détecté par un capteur à base de Ca 2+ FRET codé génétiquement, TN-XXL. Ainsi, CNiFERs transformer la liaison en un changement de fluorescence, en fournissant un r optique en temps réel directe et récepteur neurotransmetteuread-out de l&#39;activité des neurotransmetteurs local. En utilisant le récepteur natif pour un neurotransmetteur donné, CNiFERs conserver la spécificité chimique, l&#39; affinité et la dynamique temporelle des récepteurs endogènes exprimés. À ce jour, nous avons créé trois types de CNiFERs, un pour la détection de l&#39; acétylcholine en utilisant le récepteur M1, un pour la détection de la dopamine en utilisant le récepteur D2 et une pour la détection de la norépinéphrine à l&#39; aide du 6,7 récepteur α1a. La technologie CNiFER est facilement extensible et évolutive, ce qui rend prête à tout type de GPCR. Dans cet article JoVE, nous décrivons et illustrons la méthodologie pour concevoir, réaliser et test CNiFERs in vivo pour toute application.

<table><tbody><tr><td>pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro&nbsp ;</td><td>System Biosciences</td><td>CD510B-1</td><td>Clonage : pour la génération de lentivirus</td></tr><tr><td>12 x 75 *BD Falcon Tube à essai à fond rond en polypropylène haute clarté</td><td>BD Biosciences 352063</td><td></td><td>FACS</td></tr><tr><td>BD 40 um Falcon strainers</td><td>BD Biosciences</td><td>352340</td><td>FACS</td></tr><tr><td>0,05 % Trypsine EDTA&nbsp ;</td><td>Invitrogen</td><td>25200056</td><td>FACS</td></tr><tr><td>96 Plaque à puits, fond plat, transparent&nbsp ;</td><td>Corning&nbsp ;</td><td>3596</td><td>FACS</td></tr><tr><td>Plaques de culture cellulaire 96 puits&nbsp ;</td><td>Corning&nbsp ;</td><td>CLS3997</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Optilux fond noir transparent&nbsp ;</td><td>Corning&nbsp ;</td><td>3603</td><td>Flexstation Pointes</td></tr><tr><td>de pipette Flexstation</td><td>Dispositifs moléculaires</td><td>9000-0911</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Chlorure d’acétylcholine&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2661</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Norepinephrine&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Chlorhydrate de dopamine Sigma-Aldrich</td><td>A7256</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PHR1090</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>GABA&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2129</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Histamine&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H7125</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Glutamate&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>49621</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Épinéphrine&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4642</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Somatostatine&nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1763</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>5HT&nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9523</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>VIP&nbsp ;</td><td>Alpha Diagnostics Inc.&nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>SP-69627</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Orexin A</td><td>Alpha Diagnostics Inc.&nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>12-P-01</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Substance &nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6883</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Adénosine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4036</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Mélatonine&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5250C</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Lecteur de plaques de fluorescence & logiciel</td><td>Dispositifs moléculaires</td><td>Flexstation 3</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>&nbsp ; DMEM (hyperglycémie) avec Glutamax&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Life Technologies</td><td>10569-010</td><td>Culture tissulaire</td></tr><tr><td> Sérum fœtal bovin</td><td>Life Technologies</td><td>10082-139</td><td>Culture tissulaire</td></tr><tr><td>&nbsp ; Stylo/Streptocoque&nbsp ; antibiotiques</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122</td><td>Culture tissulaire</td></tr><tr><td>&nbsp ; Puromycine&nbsp ; &nbsp ;</td><td>InvivoGen</td><td>ant-pr-1</td><td>Culture tissulaire</td></tr><tr><td>&nbsp ; Fibronectine&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0895</td><td>Culture</td></tr><tr><td>tissulaire CoolCell LX Boîte de congélation cellulaire sans alcool à débit contrôlé</td><td>Bioexpress</td><td>D-3508)</td><td>Culture tissulaire</td></tr><tr><td>colle cyanoacrylate&nbsp ;</td><td>Loctite</td><td>Loctite n° 495</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>film de paraffine plastique.</td><td>VWR</td><td>Parafilm&reg ;</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Nanoinjecteur</td><td>Drummond</td><td>3-000-204</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Électrodes en verre</td><td>Drummond</td><td>3-000-203G</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Foret à main</td><td>OSADA</td><td>Exl-M40</td><td>Chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Meules pour foret</td><td>Fine Scientific</td><td>19007-05 ; 19007-07)</td><td>chirurgie et injection</td></tr> <tr><td>stéréotaxiqueBain de stérilisation</td><td>FST</td><td>18000-45, Stérilisateur à billes chaudes</td><td>pour la chirurgie et l’injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Chambre/masque isoflurane</td><td>Highland Medical Equipment</td><td>564-0427, HME 109 Machine d’anesthésie de table avec vaporisateur d’isoflurane, débitmètre O2, vanne gang ; 564-0852, Chambre d’induction 16X7X7.5cm</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>3D scope avec bras</td><td>Chirurgie Zeiss</td><td></td><td>et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>chirurgie de la lumière</td><td></td><td></td> par fibre optique <td>et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Bétadine&nbsp ;</td><td></td><td></td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>70 % (v/v) alcool isopropylique</td><td></td><td></td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Povidone-Iodine Prep Pads</td><td>dynarex</td><td>1108</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>NaCl 0,9 % (injection, USP, 918610)</td><td></td><td></td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>CYCLOSPORINE (INJECTION, USP)</td><td></td><td></td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Buprenex (injection) buprénorphine (0,03 &mu ; g par g rongeur)</td><td>Chirurgie Sigma-Aldrich</td><td></td><td>et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Pommade ophtalmique&nbsp ;</td><td>Akorn</td><td>NDC 17478-235-35</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Surgifoam</td><td>Chirurgie Ethicon</td><td></td><td>et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Grip ciment dentaire</td><td>Dentsply</td><td>#675571,</td><td>chirurgie 675572 et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Instant SuperGlue&nbsp ;</td><td>NDindustries</td><td></td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>LOCTITE 4041</td><td></td><td></td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>METABOND</td><td>C& B</td><td></td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>n° 0 verre de couverture Chirurgie</td><td>Fisher</td><td></td><td>et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>cadre stéréotaxique&nbsp ;</td>Chirurgie <td>Kopf</td><td></td><td>et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Sonde rectale et coussin chauffant</td><td>FHC</td><td>40-90-8D, Régulateur de température DC, 40-90-2-06, Coussin chauffant 6,5X9,5cm40-90-5D-02, Sonde à thermistance rectale</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Plaque d’essai optique pour l’imagerie</td><td>Chirurgie Thorlabs</td><td></td><td>et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Huile minérale</td><td>Fisher</td><td>S55667</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Kwik-Cast (élastomère de silicone)</td><td>World Precision Instruments</td><td></td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Suture&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Ethicon</td><td>18' ', 1667, 4-0</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Ciseaux</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>91500-09, 15018-10</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Forcepts</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>11252-30 ; #55, 11295-51 ; Grafe, 11050-10</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Student Halsted-Mosquito Hemostats</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>91308-12</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Kit de cautérisation des petits vaisseaux</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>18000-00</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Stérilisateurs à billes chaudes</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>18000-45</td><td>chirurgie et injection</td></tr> <tr><td>stéréotaxiqueBoîtier d’instrument avec tapis en silicone</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>20311-21</td> chirurgie <td>et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Récipients de stérilisation en plastique avec tapis en silicone</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>20810-01</td><td>chirurgie et injection stéréotaxique</td></tr><tr><td>Lunette de fluorescence à platification fixe 2P pour l’imagerie in vivo</td><td>Olympus</td><td>FV1200 MPE</td><td>Imagerie in vivo</td></tr><tr><td>Laser</td> <td>multiphotonSpectraPhysics</td><td>Mai Tai DeepSee</td><td>Imagerie in vivo</td></tr><tr><td>Green Laser</td><td>Olympus</td><td>473 nm Laser</td><td>Imagerie in vivo</td></tr><tr><td>xy base translationnelle</td><td>Scientifica</td><td>MMBP</td><td>Imagerie in vivo</td></tr><tr><td>Cube de filtre FRET pour YFP et CFP</td><td>Olympus</td><td></td><td>Imagerie in vivo</td></tr><tr><td>Objectifs d’immersion dans l’eau 10x et 40x</td><td>Olympus</td><td></td><td>Imagerie in vivo</td></tr><tr><td>table d’air</td><td>Imagerie in vivo</td> <td>Newport</td><td></td></tr><tr><td>cage étanche à la lumière construite sur mesure</td><td>Imagerie in vivo</td> <td>Thorlab</td><td></td></tr></tbody></table>

la construction de base de cellules fluorescentes neurotransmetteur engineered reporters (cnifers) pour la détection optique des neurotransmetteurs<em&gt; in vivo</em

Construction of Cell-based Neurotransmitter Fluorescent Engineered Reporters (CNiFERs) for Optical Detection of Neurotransmitters In Vivo

Reporters base de cellules fluorescentes neurotransmetteur d&#39; ingénierie (CNiFERs) fournissent un nouvel outil pour les neuroscientifiques pour détecter optiquement la libération de neurotransmetteurs dans le cerveau in vivo. Un CNiFER spécifique est créé à partir d&#39; une cellule de rein embryonnaire humain qui exprime de manière stable un récepteur spécifique G couplé à la protéine, qui couple à G q / 11 protéines G, et un Ca 2+ -detector à base de FRET, TN-XXL. L&#39;activation du récepteur conduit à une augmentation du signal FRET. CNiFERs ont une sensibilité nM et une réponse temporelle de secondes parce qu&#39;un clone CNiFER utilise le récepteur natif pour un neurotransmetteur particulier, par exemple, D2R pour la dopamine. CNiFERs sont directement implantés dans le cerveau, ce qui leur permet de détecter la libération des neurotransmetteurs avec une résolution spatiale inférieure à cent um, ce qui les rend idéales pour mesurer la transmission de volume in vivo. CNiFERs peut également être utilisé pour dépister d&#39; autres médicaments pour la réactivité croisée potentielle dans vivo. Nous avons récemment élargi la famille de CNiFERs pour inclure GPCR ce couple à G i / o protéines G. CNiFERs sont disponibles pour la détection de l&#39;acétylcholine (Ach), la dopamine (DA) et la norepinephrine (NE). Étant donné que toute GPCR peut être utilisé pour créer un roman CNiFER et qu&#39;il ya environ 800 GPCR dans le génome humain, nous décrivons ici la procédure générale pour concevoir, réaliser et tester tout type de CNiFER.

Un CNiFER est dérivé d&#39;un rein embryonnaire (HEK293) cellule humaine qui est modifiée pour exprimer de façon stable au moins deux protéines: une protéine G spécifique des récepteurs couplés (GPCR) et une [Ca2 +] capteur codé génétiquement, TN-TTG. TN-XXL subit un transfert de résonance de fluorescence d&#39;énergie (FRET) entre cyan et jaune fluorescent protéines, ECFP et Citrine, respectivement, en réponse à des ions Ca 2+ 6,15. L&#39; activation de ...

Nous présentons un protocole pour créer journalistes neurotransmetteur fluorescents à base de cellules modifiées (CNiFERs) pour la détection optique de la libération de neurotransmetteurs volumétrique.

La construction de base de cellules fluorescentes neurotransmetteur Engineered Reporters (CNiFERs) pour la détection optique des neurotransmetteurs<em&gt; In Vivo</em

Cell-based neurotransmitter fluorescent engineered reporters (CNiFERs) provide a new tool for neuroscientists to optically detect the release of ...

L'objectif général de cette vidéo est de décrire la méthodologie de conception et de test des capteurs fluorescents basés sur des cellules pour les neurotransmetteurs, ou CNiFERs, qui peuvent être utilisés pour surveiller optiquement la libération de neurotransmetteurs spécifiques in vivo. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés en neurosciences concernant le moment et la libération de neuromodulateurs dans le cerveau. Le principal avantage de cette technique est qu'elle peut être adaptée à tout type de neurotransmetteur ou de neuromodulateur signalant par l'intermédiaire de récepteurs couplés aux protéines G (GPCS).La démonstration régionale de cette méthode est utile. L'injection in vivo et l'imagerie ultérieure des CNiFERs sont techniquement difficiles. Pour commencer cette procédure, observez les cellules HEK293 contenant le détecteur de calcium de type front et la protéine G chimérique dans un flacon T-25.Ensuite, cultiver les cellules dans un incubateur humidifié à 37 degrés Celsius, avec 5 % de CO2, jusqu'à ce qu'elles atteignent une confluence d'environ 50 %. Ensuite, aspirer le milieu du flacon T-25. Ajouter deux millilitres du mélange de milieu viral lent

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Avec l'intérêt croissant pour les thérapies de cellules souches, des techniques d'imagerie moléculaire sont idéales pour le comportement des cellules souches de surveillance après la transplantation. Gènes rapporteurs luciférase ont permis non invasive, l'évaluation répétitive de la survie cellulaire, l'emplacement et la prolifération in vivo. Cette vidéo vous montrera comment suivre la prolifération des CSEh dans une souris vivante.

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Nous avons développé une nouvelle technique de quantification des changements récepteurs de l'acétylcholine nicotiniques au sein des régions subcellulaires de sous-types spécifiques de neurones du SNC afin de mieux comprendre les mécanismes de dépendance à la nicotine en utilisant une combinaison d'approches, y compris le marquage fluorescent protein du récepteur à l'aide du knock-in approche et spectrale imagerie confocale.

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Source : Lacin, E., et al. Construction de neurotransmetteurs fluorescents à base de cellules (CNiFERs) pour la détection optique de neurotransmetteurs in vivo. J. Vis. Exp. (2016)Cette vidéo présente une technique d’imagerie de la libération de neurotransmetteurs in vivo à l’aide de neurotransmetteurs à base de cellules CNiFERs, des cellules rapporteures spécialisées pré-injectées dans le cortex de la souris. Positionnée sous un microscope à deux photons, la souris permet de visualiser la...

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Avec son petit corps, transparent et documenté neuroanatomie et une foule de techniques génétiques qui se prêtent et...

En imagerie calcique in vivo des neurones en C. elegans

Nous présentons ici un roman Ca 2+ -Imagerie approche utilisant un journaliste bioluminescente. Cette approche utilise une construction GFP-aequorine condensé qui se lie au Ca 2+ et émet de la lumière, éliminant le besoin d'une lumière d'excitation. Significativement cette méthode permet à long imagerie continue, l'accès à des structures profondes du cerveau et une haute résolution temporelle.

In Vivo cérébrale fonctionnelle approche d&#39;imagerie à base de calcium Bioluminescent Indicateur GFP-aequorine

Nous présentons ici un protocole au calcium image de signalisation dans les populations de types de cellules individuelles à la jonction neuromusculaire murine.

Ex Vivo Imagerie du Calcium cellulaire spécifique de signalisation à la Synapse Tripartite du diaphragme souris

Dans ce rapport, nous décrivons un protocole simple pour étudier la croissance neurite dans les neurones corticaux embryonnaires de rat en co-transfectant avec l'EGFP et la protéine d'intérêt.

Un meilleur assougo de fluorescence verte à base de protéines pour étudier la croissance de la neurite dans les neurones primaires

Nous présentons un protocole en deux parties qui combine l’imagerie fluorescente de calcium avec l’hybridation in situ, permettant à l’expérimentateur de corréler des modèles de l’activité de calcium avec des profils d’expression de gène sur un niveau unicellulaire.

Imagerie de calcium fluorescent et hybridation in situ subséquente pour la caractérisation neuronale de précurseur dans Les laevis de Xenopus

Deux méthodes connexes sont décrites pour visualiser les événements subcellulaires nécessaires à la transmission synaptique. Ces protocoles permettent de surveiller en temps réel la dynamique de l’afflux de calcium présynaptique et de la fusion de la membrane des vésicules synaptiques à l’aide de l’imagerie cellulaire vivante de neurones cultivés in vitro .

Mesure fluorescente en temps réel des fonctions synaptiques dans les modèles de sclérose latérale amyotrophique

À l’aide de souris fluorescentes transgéniques, des protocoles détaillés sont décrits pour évaluer le transport axonal in vivo des endosomes de signalisation et des mitochondries dans les axones moteurs et sensoriels du nerf sciatique intact chez les animaux vivants.

Élargir la boîte à outils pour l’imagerie in vivo du transport axonal

Les méthodes actuelles décrivent une approche non ratiométrique pour l’imagerie calcique sous-compartimentale à haute résolution in vivo chez Caenorhabditis elegans à l’aide d’indicateurs de calcium génétiquement codés facilement disponibles.

Imagerie subcellulaire de la manipulation neuronale du calcium in vivo

Découvrez la construction de CNiFERs utilisant des cellules HEK293 pour la détection optique des neurotransmetteurs in vivo. Cette méthode permet de surveiller en temps réel la libération de neuromodulateurs dans le cerveau.

La construction de base de cellules fluorescentes neurotransmetteur Engineered Reporters (CNiFERs) pour la détection optique des neurotransmetteurs In Vivo (Vidéo) | JoVE Journal

La construction de base de cellules fluorescentes neurotransmetteur Engineered Reporters (CNiFERs) pour la détection optique des neurotransmetteurs

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