Name: Imagerie en direct et caractérisation de la dynamique de la microglie chez l’embryon de poisson-zèbre (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Découvrez l'imagerie en direct de la microglie dans le tectum optique de l'embryon de poisson-zèbre par microscopie confocale rapide. Cette méthode permet d'analyser la dynamique cellulaire in vivo pendant le développement embryonnaire.

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<meta charset="utf8"></head><body>Élucider le comportement de la microglie dans le développement du tectum optique du poisson-zèbre

<ol><li>Wolf, S. A., Boddeke, H. W., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+physiology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Microglia in physiology and disease.</a> Annu Rev Physiol. 79, 619-643 (2017).</li>
<li>Nimmerjahn, A., Kirchhoff, F., Helmchen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resting+microglial+cells+are+highly+dynamic+surveillants+of+brain+parenchyma+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Resting microglial cells are highly dynamic surveillants of brain parenchyma in vivo.</a> Sci Rep. 308 (5726), 1314-1318 (2005).</li>
<li>Peri, F., Nusslein-Volhard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+neuronal+degradation+by+microglia+reveals+a+role+for+v0-ATPase+a1+in+phagosomal+fusion+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Live imaging of neuronal degradation by microglia reveals a role for v0-ATPase a1 in phagosomal fusion in vivo.</a> Cell. 133 (5), 916-927 (2008).</li>
<li>Marın-Teva, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+promote+the+death+of+developing+Purkinje+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microglia promote the death of developing Purkinje cells.</a> Neuron. 41 (4), 535-547 (2004).</li>
<li>Paolicelli, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+pruning+by+microglia+is+necessary+for+normal+brain+development%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Synaptic pruning by microglia is necessary for normal brain development.</a> Science. 333 (6048), 1456-1458 (2011).</li>
<li>Hattori, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microglia-blood+vessel+interactions+in+the+developing+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">The microglia-blood vessel interactions in the developing brain.</a> Neurosci Res. 187, 58-66 (2023).</li>
<li>Colonna, M., Butovsky, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+function+in+the+central+nervous+system+during+health+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microglia function in the central nervous system during health and neurodegeneration.</a> Annu Rev Immunol. 35, 441-468 (2017).</li>
<li>Xu, H. -T., Pan, F., Yang, G., Gan, W. -B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choice+of+cranial+window+type+for+in+vivo+imaging+affects+dendritic+spine+turnover+in+the+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Choice of cranial window type for in vivo imaging affects dendritic spine turnover in the cortex.</a> Nat Neurosci. 10 (5), 549-551 (2007).</li>
<li>Shin, J., Park, H. -C., Topczewska, J. M., Mawdsley, D. J., Appel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+cell+fate+analysis+in+zebrafish+using+olig2+BAC+transgenics%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Neural cell fate analysis in zebrafish using olig2 BAC transgenics.</a> Methods Cell Sci. 25 (1), 7-14 (2003).</li>
<li>Chi, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxn4+directly+regulates+tbx2b+expression+and+atrioventricular+canal+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Foxn4 directly regulates tbx2b expression and atrioventricular canal formation.</a> Genes Dev. 22 (6), 734-739 (2008).</li>
<li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+%28Danio+rerio%29+laboratory%3A+An+introduction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: An introduction.</a> J Vis Exp. (69), e4196(2012).</li>
<li>Bohnsack, B. L., Gallina, D., Kahana, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenothiourea+sensitizes+zebrafish+cranial+neural+crest+and+extraocular+muscle+development+to+changes+in+retinoic+acid+and+IGF+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Phenothiourea sensitizes zebrafish cranial neural crest and extraocular muscle development to changes in retinoic acid and IGF signaling.</a> PLoS ONE. 6 (8), e22991(2011).</li>
<li>Ariga, J., Walker, S. L., Mumm, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicolor+time-lapse+imaging+of+transgenic+zebrafish%3A+visualizing+retinal+stem+cells+activated+by+targeted+neuronal+cell+ablation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Multicolor time-lapse imaging of transgenic zebrafish: visualizing retinal stem cells activated by targeted neuronal cell ablation.</a> J Vis Exp. (43), e2093(2010).</li>
<li>Ferrero, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+microglia+derive+from+primitive+macrophages+and+are+replaced+by+cmyb-dependent+definitive+microglia+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Embryonic microglia derive from primitive macrophages and are replaced by cmyb-dependent definitive microglia in zebrafish.</a> Cell Rep. 24 (1), 130-141 (2018).</li>
<li>Xu, J., Wang, T., Wu, Y., Jin, W., Wen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+colonization+of+developing+zebrafish+midbrain+is+promoted+by+apoptotic+neuron+and+lysophosphatidylcholine%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Microglia colonization of developing zebrafish midbrain is promoted by apoptotic neuron and lysophosphatidylcholine.</a> Dev Cell. 38 (2), 214-222 (2016).</li>
<li>Svahn, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+ramified+microglia+from+early+macrophages+in+the+zebrafish+optic+tectum%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Development of ramified microglia from early macrophages in the zebrafish optic tectum.</a> Dev Neurobiol. 73 (1), 60-71 (2013).</li>
<li>Thion, M. S., Garel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+ontogeny%2C+diversity+and+neurodevelopmental+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Genet+Dev%22%5BJournal%5D)">Microglial ontogeny, diversity and neurodevelopmental functions.</a> Curr Opin Genet Dev. 65, 186-194 (2020).</li>
<li>Bohlen, C. J., Friedman, B. A., Dejanovic, B., Sheng, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+brain+development%2C+homeostasis%2C+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Microglia in brain development, homeostasis, and neurodegeneration.</a> Annu Rev Genet. 53, 263-288 (2019).</li>
<li>Squarzoni, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+modulate+wiring+of+the+embryonic+forebrain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Microglia modulate wiring of the embryonic forebrain.</a> Cell Rep. 8 (5), 1271-1279 (2014).</li>
<li>Schafer, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+sculpt+postnatal+neural+circuits+in+an+activity+and+complement-dependent%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microglia sculpt postnatal neural circuits in an activity and complement-dependent.</a> Neuron. 74 (4), 691-705 (2012).</li>
<li>Parkhurst, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+promote+learning-dependent+synapse+formation+through+brain-derived+neurotrophic+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microglia promote learning-dependent synapse formation through brain-derived neurotrophic factor.</a> Cell. 155 (7), 1596-1609 (2013).</li>
<li>Green, L. A., O'Dea, M. R., Hoover, C. A., DeSantis, D. F., Smith, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+embryonic+zebrafish+brain+is+seeded+by+a+lymphatic-dependent+population+of+mrc1%2B+microglia+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The embryonic zebrafish brain is seeded by a lymphatic-dependent population of mrc1+ microglia precursors.</a> Nat. Neurosci. 25 (7), 849-864 (2022).</li>
<li>Hughes, A. N., Appel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+phagocytose+myelin+sheaths+to+modify+developmental+myelination%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia phagocytose myelin sheaths to modify developmental myelination.</a> Nat Neurosci. 23 (9), 1055-1066 (2020).</li>
<li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C1q+is+essential+for+myelination+in+the+central+nervous+system+%28CNS%29%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">C1q is essential for myelination in the central nervous system (CNS).</a> iScience. 26 (12), 108518(2023).</li>
<li>Zengeler, K. E., Lukens, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immunity+at+the+crossroads+of+healthy+brain+maturation+and+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Innate immunity at the crossroads of healthy brain maturation and neurodevelopmental disorders.</a> Nat Rev Immunol. 21 (7), 454-468 (2021).</li>
<li>Paolicelli, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+states+and+nomenclature%3A+A+field+at+its+crossroads%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microglia states and nomenclature: A field at its crossroads.</a> Neuron. 110 (21), 3458-3483 (2022).</li>
<li>Réu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lifespan+and+turnover+of+microglia+in+the+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">The lifespan and turnover of microglia in the human brain.</a> Cell Rep. 20 (4), 779-784 (2017).</li>
<li>Ajami, B., Bennett, J. L., Krieger, C., Tetzlaff, W., Rossi, F. M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+self-renewal+can+sustain+CNS+microglia+maintenance+and+function+throughout+adult+life%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life.</a> Nat Neurosci. 10 (12), 1538-1543 (2007).</li>
<li>Mildner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+the+adult+brain+arise+from+Ly-6ChiCCR2%2B+monocytes+only+under+defined+host+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia in the adult brain arise from Ly-6ChiCCR2+ monocytes only under defined host conditions.</a> Nat Neurosci. 10 (12), 1544-1553 (2007).</li>
<li>Cook, Z. T., Brockway, N. L., Weissman, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+developing+brain+in+living+zebrafish+using+Brainbow+and+time-lapse+confocal+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Visualizing the developing brain in living zebrafish using Brainbow and time-lapse confocal imaging.</a> J Vis Exp. (157), e60593(2020).</li>
<li>Tayanloo-Beik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+modeling+of+autism+spectrum+disorders%2C+current+status+and+future+prospective%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Zebrafish modeling of autism spectrum disorders, current status and future prospective.</a> Front Psychiatry. 13, 911770(2022).</li>
<li>D'Amora, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+an+innovative+tool+for+epilepsy+modeling%3A+State+of+the+art+and+potential+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as an innovative tool for epilepsy modeling: State of the art and potential future directions.</a> Int J Mol Sci. 24 (9), 7702(2023).</li>
<li>Langova, V., Vales, K., Horacek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+zebrafish+and+laboratory+rodents+in+schizophrenia+research%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">The role of zebrafish and laboratory rodents in schizophrenia research.</a> Front Psychiatry. 11, 549232(2020).</li>
<li>Chia, K., Klingseisen, A., Sieger, D., Priller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+organism+for+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model organism for neurodegenerative disease.</a> Front Mol Neurosci. 15, 940484(2022).</li>
<li>Astell, K. R., Sieger, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+in+vivo+models+of+cancer+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">Zebrafish in vivo models of cancer and metastasis.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 10 (8), 037077(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 L Cuves d’élevage</td><td>Tecniplast</td><td>ZB10BTE</td><td></td></tr><tr><td>1-phényl-2-thiourée (PTU)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7629</td><td>Dilué à 0,2 mM dans E3 pour prévenir la pigmentation embryonnaire</td></tr><tr><td>Boîte d’imagerie en verre inférieure</td><td>FluoroDish</td><td>FD3510-100</td><td></td></tr><tr><td>Jetable Pipette de transfert graduée</td><td>avantor</td><td>16001-188</td><td></td></tr><tr><td>Chauffe-bloc sec</td><td>Novolab</td><td>Grant QBD4</td><td>Pour maintenir une faible fusion d’agarose à 37 &deg ; C</td></tr><tr><td>Ethyl 3-aminobenzoate méthanesulfonate (Tricaine)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E10521-50G</td><td></td></tr><tr><td>Imaris 10.0</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td>logiciel d’analyse</td></tr><tr><td>Imaris File Converter</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td>https://imaris.oxinst.com/big-data</td></tr><tr><td>Microscope confocal à balayage laser</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ti2-E</td><td></td></tr><tr><td>Bleu de méthylène</td>Pointes de microchargeur <td>Sigma-Aldrich</td><td>M9140-25G</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Eppendorf</td><td>5242956003</td><td></td></tr><tr><td>NuSieve GTG Agarose</td><td>Lonza</td><td>&nbsp ; 50081</td><td></td></tr><tr><td>Boîtes de Pétri (90 mm)</td><td>avantor</td><td>391-0559</td><td></td></tr><tr><td>Pronase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11459643001</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp ; Pince en acier inoxydable Dumont n° 5</td><td>FineScienceTools</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Stéréomicroscope</td><td>Leica</td><td>Leica M80</td><td>Pour monter l’aiguille de taquinerie des embryons</td></tr><tr><td></td><td></td><td>avantor 76549-024</td><td></td></tr></tbody></table>

imagerie en direct et caractérisation de la dynamique de la microglie chez l’embryon de poisson-zèbre

Live Imaging and Characterization of Microglia Dynamics in the Zebrafish Embryo

Cellules microgliales exprimant la protéine fluorescente verte (eGFP) et cellules endothéliales exprimant DsRed dans Tg(mpeg1 :eGFPgl22 ; KDRL :CRES898 ; actb2 :loxP-STOP-loxP-DsRedexpress,sd5) embryons transgéniquestriples 14 ont été imagés à 3 dpf, selon le protocole décrit. Un seul embryon de poisson-zèbre a été monté dans de l’agarose à faible point de fusion à 1 % sur une plaque de verre inférieure et le processus d’imagerie n’a pas entravé la croissance de l’embryon pendant la période d’acquisition. Le timelapse a été enregistré à l’aide d’un système commercial de microscopie confocale à balayage ponctuel équipé d’une lentille d’objectif sec 10x 0,45 NA, et des lasers d’excitation de 488 nm et 561 nm ont été utilisés pour l’imagerie des cellules microgliales et endothéliales, respectivement. De plus, l’intervalle de temps, la résolution de l’image, la taille des pixels et l’étape z étaient de 30 secondes (s), 1024x1024, 0,49 μm et 2,5 μm, respectivement. L’enregistrement en accéléré a duré 3,5 heures (h).
Le champ de vision acquis couvrait toute la tête de l’embryon, mais l’analyse s’est concentrée spécifiquement sur le tectum optique, car au cours de la première semaine de développement, les microglies sont principalement limitées à la couche neuronale du soma de cette région du mésencéphale dorsal, ce qui permet aux enquêteurs de visualiser l’ensemble de la population simultanément15. L’analyse de suivi 3D a été réalisée à l’aide d’Imaris 10.0, comme expliqué ci-dessus. Comme le montre la figure 4, le suivi a été couronné de succès, avec 25 traces, ce qui correspond au nombre attendu de cellules microgliales présentes dans le tectum optique à 3 dpf16. Une correction manuelle minimale des traces a été nécessaire. La figure 5 montre un exemple de données qu’il est possible d’extraire d’une expérience de suivi réussie. Le marquage simultané des macrophages et des cellules endothéliales permet de quantifier la position de la microglie par rapport à ces dernières, ce qui permet aux chercheurs de visualiser la distance relative de chaque cellule par rapport à la cellule endothéliale la plus proche dans le temps et d’examiner la fréquence et le nombre d’interactions potentielles (Figure 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66533/66533fig01.jpg"> Figure 1 : Vue d’ensemble de la procédure expérimentale. (A) Préparation et anesthésie de l’embryon de poisson-zèbre. (B) Montage et positionnement de l’échantillon. (C) Acquisition d’images. (D) Traitement d’images et extraction de données de motilité. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66533/66533fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66533/66533fig02.jpg"> Figure 2 : Imagerie de la microglie et interactions avec l’environnement cellulaire du cerveau chez l’embryon de poisson-zèbre. (A) Image en fond clair de la tête et du cerveau d’un poisson-zèbre embryonnaire de 3 dpf (vue dorsale), marquant le tectum optique et le cerveau postérieur. Le cerveau du poisson-zèbre embryonnaire peut être imagé dans son intégralité à ce stade en raison de sa petite taille et de sa transparence optique. (B-D) L’emplacement et le comportement de la microglie peuvent être visualisés à l’aide de lignées transgéniques telles que (B,C) Tg(mpeg1 :eGFP)gl22 et (D) Tg(mpeg1 :mcherry)gl23, et en se concentrant sur l’OT. (B) Les neurones et leurs corps cellulaires peuvent être identifiés à l’aide de la lignée rapporteuse Tg(XlTubb:D sRed)zf148 et les interactions microglie-neurone peuvent être visualisées en fusionnant les deux canaux dans des lignées qui co-expriment les deux transgènes. On voit une fusion des signaux vert (microglie) et rouge (neurones, en magenta). (C, D) Les lignes rapporteures peuvent également mettre en lumière les interactions de la microglie (en vert) avec les cellules endothéliales, ici étiquetées en rouge à l’aide du (C) double Tg(kdrl :cres898 ; actb2 :LOXP-STOP-LOXP-Dsredexpress, sd5), ou avec des cellules gliales telles que les oligodendrocytes et leurs précurseurs, en utilisant le (D) double Tg(olig2 :EGFP ; mpeg1 :mcherry ) lignée transgénique. 1 : oligodendrocytes et cellules progénitrices dans l’OT, 2 : neurones eurydendroïdes dans le cervelet. Barres d’échelle = 50 μm. Abréviations : dpf = jours après la fécondation ; OT = tectum optique ; HB = cerveau postérieur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66533/66533fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66533/66533fig03.jpg"> Figure 3 : Disparité morphologique et spatiale entre les macrophages cutanés et la microglie chez un embryon de poisson-zèbre de 3 dpf. (A,B) Vue dorsale d’un embryon de poisson-zèbre Tg(mpeg1 :eGFP)gl22 à 3 dpf, représentant (A) des cellules microgliaires parenchymateuses (marquées par des astérisques magenta) par rapport aux macrophages cutanés (astérisques blancs), identifiés en fonction de leur position relative le long de l’axe z, comme on le voit en (B), qui affiche l’image 3D monochrome rendue avec le codage couleur de l’axe z. (C, D) Vue latérale de (C) A et (D) B, mettant en évidence les profondeurs z des cellules mpeg1 :eGFP+ dans la tête de l’embryon et mettant en évidence la localisation superficielle des macrophages cutanés par rapport aux cellules microgliales. (E-K) Grossissement élevé de chaque cellule indiqué par un astérisque en A et B, fournissant une visualisation détaillée des morphologies distinctes entre la microglie amiboïde (E-G) et les macrophages cutanés allongés (H-K). Barres d’échelle = 30 μm. Abréviation : dpf = jours après la fécondation. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66533/66533fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66533/66533fig04.jpg"> Figure 4 : Suivi des cellules microgliales dans un embryon de poisson-zèbre 3 dpf. (A) Vue dorsale de la tête d’un Tg(kdrl :cres898 ; actb2 :LOXP-STOP-LOXP-Dsredexpress,sd5 ; mpeg1 :eGFPgl22) embryon transgénique triple, montrant la microglie (vert) et le rendu superficiel des vaisseaux (magenta). (B-D) Suivi représentatif des mouvements de la microglie sur une fenêtre de temps de (B) 3,5 heures. On voit des cellules individuelles suivre des trajectoires complexes. (C) Détail du timelapse, montrant une vue agrandie de la région en B délimitée par le carré en pointillés. Six images du film (à 45 minutes d’intervalle) sont présentées, documentant l’établissement de contacts transitoires entre les microglies et les cellules endothéliales dans leur microenvironnement. (D) Trajectoires de migration des cellules microgliales individuelles dans le tectum optique, les axes X, Y et Z représentant les dimensions spatiales. Barre d’échelle = 50 μm. Abréviation : dpf = jours après la fécondation. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66533/66533fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66533/66533fig05.jpg"> Figure 5 : Visualisation des données obtenues. Exemple de données spatiales pouvant être obtenues à l’aide du protocole décrit. Les graphiques représentent (A) la vitesse moyenne des cellules microgliales, (B) la distance moyenne qu’elles parcourent en 1 h, (C) leur déplacement carré moyen et (D) leur distribution dans l’espace à différents moments. Le rendu de la surface du vaisseau a également permis de mesurer la distance la plus courte entre la microglie et les cellules endothéliales à un moment donné, à la fois au niveau (E) de la cellule unique et en tant que moyenne mondiale (F). Pour A, B et D, chaque point représente une cellule individuelle. N = un embryon. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66533/66533fig05large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
Fichier supplémentaire 1 : <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66533/66533_20240306_SupplementalFile1%20(2).zip" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.</a>

Imagerie en direct et caractérisation de la dynamique de la microglie chez l’embryon de poisson-zèbre

Microglia are highly dynamic cells and their migration and colonization of the brain parenchyma is a crucial step for proper brain development and ...

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Dans cette vidéo, nous démontrons une méthode permettant d'analyser le cerveau des vertébrés en développement dans embryons de poissons zèbres vivent à la résolution seule cellule par microscopie confocale. Cela inclut la méthode par laquelle nous injectons de l'embryon de poisson zèbre à cellule unique, puis monter et l'image du cerveau en développement.

En direct l&#39;imagerie du cerveau de poisson zèbre embryonnaires par microscopie confocale

Ce protocole décrit l'imagerie des neurones individuels ou des cellules de la crête neurale dans la vie des embryons de poisson zèbre. Cette méthode est utilisée pour examiner les comportements cellulaires actine et la localisation utilisant la fluorescence confocale time-lapse microscopie.

Imagerie en temps réel de la motilité cellulaire et cytosquelette d&#39;actine des neurones individuels et de la crête neurale dans les embryons de poissons zèbres

La clé de la compréhension des processus morphogénétiques qui façonnent l'embryon précoce est la capacité de cellules d'image à haute résolution. Nous décrivons ici une technique de marquage des cellules individuelles ou de petits amas de cellules dans des embryons de zebrafish entier avec membrane cible protéine fluorescente verte.

L&#39;étiquetage et l&#39;imagerie des cellules dans le cerveau postérieur Zebrafish

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Imagerie en direct de la mort cellulaire des macrophages lors d’une infection mycobactérienne chez les embryons de poisson-zèbre

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Un test d’absorption d’anticorps pour l’imagerie de la signalisation Notch/DeltaD chez les progéniteurs de la glie radiale du poisson-zèbre

Source : Lahne, M., et.al. Culture d’explants rétiniens de poisson-zèbre transgénique adulte pour l’imagerie de cellules vivantes par microscopie multiphotonique. J. Vis. Exp. (2017)Cette vidéo démontre l’imagerie de cellules vivantes de la migration nucléaire gliale de Muller dans des explants rétiniens de poisson-zèbre inclus dans de l’agarose suite à des lésions des photorécepteurs induites par la lumière. Le facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-α) libéré par les photorécepteurs endommagés...

Imagerie de cellules vivantes de la migration nucléaire gliale de Muller pendant la régénération rétinienne du poisson-zèbre

L’imagerie du comportement dynamique des organites et d’autres structures subcellulaires in vivo peut faire la lumière sur leur fonction dans des conditions physiologiques et pathologiques. Ici, nous présentons des méthodes de marquage génétique de deux organites, les centrosomes et les mitochondries, et d’imagerie de leur dynamique dans des embryons de poisson-zèbre vivants à l’aide de la microscopie à grand champ et confocale.

Imagerie Structures subcellulaires dans le Embryo Living Zebrafish

Une combinaison des techniques optiques avancées de lecture avec excitation de fluorescence multi-photons longue longueur d’onde de laser a été mis en œuvre pour capturer l’imagerie haute résolution, en trois dimensions, en temps réel de la migration de la crête neurale en Tg (sox10:EGFP) et les embryons de poissons zèbres Tg (foxd3:GFP).

Multiphotonique Time Lapse imagerie de visualiser le développement en temps réel : visualisation de la migration des cellules neurales de crête dans des embryons de poisson-zèbre

Microinjection des embryons de poisson-zèbre et des larves est une technique cruciale mais difficile utilisée dans de nombreux modèles de poisson-zèbre. Nous présentons ici une gamme d’outils de micro-échelle pour aider à la stabilisation et l’orientation du poisson-zèbre pour microinjection et l’imagerie.

Microstructurées dispositifs pour Microinjection optimisée et l’imagerie des larves de poisson zèbre

Nous rapportons une technique permettant l’imagerie en direct de la dynamique des microtubules dans les cellules de glioblastome (GBM) envahissant un tissu cérébral de vertébrés. Le couplage de l’injection orthotopique de cellules GBM marquées par fluorescence dans un cerveau de poisson-zèbre transparent avec une imagerie intravitale à haute résolution permet de mesurer la dynamique du cytosquelette lors de l’invasion in situ du cancer.

Imagerie en direct de la dynamique des microtubules dans les cellules de glioblastome envahissant le cerveau du poisson zèbre

Un protocole d’imagerie in vivo du cerveau entier de larves de poisson-zèbre à l’aide de la microscopie à fluorescence tridimensionnelle est présenté ici. La procédure expérimentale comprend la préparation des échantillons, l’acquisition d’images et la visualisation.

In vivo Imagerie du cerveau entier de larves de poisson-zèbre à l’aide de la microscopie à fluorescence tridimensionnelle

Découvrez l'imagerie en direct de la microglie dans le tectum optique de l'embryon de poisson-zèbre par microscopie confocale rapide. Cette méthode permet d'analyser la dynamique cellulaire in vivo pendant le développement embryonnaire.

Imagerie en direct et caractérisation de la dynamique de la microglie chez l’embryon de poisson-zèbre

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