Name: Développement dun modèle Colite antigène conduit à étudier la présentation des antigènes par les cellules présentatrices dantigènes aux cellules T (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Découvrez un modèle de colite antigène pour étudier les interactions entre phagocytes mononucléaires CX3CR1+ et cellules T CD4+ dans la lamina propria intestinale. Cette méthode permet de suivre les réponses immunitaires et de comprendre les mécanismes de la maladie inflammatoire de l'intestin.

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Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Comme avec tous les autres modèles, le modèle de colite entraîné antigène décrit ci-dessus peut présenter quelques questions que l&#39;enquêteur effectuant la technique doit être au courant. Lors de l&#39; injection du OT-II Les cellules / Red + T CD4 + CD62L + dans les armées, le chercheur doit être très doux et prudent d&#39;insérer l&#39;aiguille dans la cavité péritonéale. Ne pas le faire peut conduire à la déchirure de l&#39;intestin de la souris qui pourrait conduire à la mort, ou ...

L&#39;intestin est la plus grande surface du corps qui est exposé à l&#39;environnement extérieur. De vastes réseaux de microbes résidents colonisent l&#39;intestin humain pour former le microbiote intestinal (ou microflore). Ceci est estimé à compter jusqu&#39;à 100 trillions de cellules microbiennes et constitue l&#39; un des habitats bactériens les plus densément peuplées connus en biologie 1-3. Dans le GIT bactéries colonisent une niche intestinale où ils survivent et se multiplient 4. En retour, le microbiote confère à l&#39;hôte avec des caractéristiques fonctionnelles supplémentaires non codées sur son génome 1. Par exemple , le microbiote stimule la prolifération des cellules épithéliales, produit des vitamines qui héberge ne ​​peut pas produire par eux - mêmes, régule le métabolisme et la protège contre les agents pathogènes 4-6. Compte tenu de cette relation bénéfique, certains auteurs ont suggéré que les humains sont des «super-organismes» ou «holobionts» qui sont un mélange de gènes bactériens et humains 7,8. Compte tenu de l&#39;impact bénéfique du microbiote sur le (humain) hôte, le système immunitaire intestinal doit tolérer les microbes commensaux pour permettre leur existence dans la lumière , mais aussi tuer les agents pathogènes qui envahissent de côté luminal 9-11. Le système immunitaire intestinal a développé des mécanismes permettant de distinguer entre les microbes luminal inoffensifs et potentiellement nuisibles; Cependant , ces mécanismes ne sont pas encore bien compris 12. Le maintien de l&#39; intégrité intestinale nécessite une homéostasie immunitaire étroitement régulée pour maintenir l&#39;équilibre entre la tolérance et l&#39; immunité 13. Un déséquilibre dans l&#39; homéostasie immunitaire contribue à l&#39;induction de maladies intestinales telles que les maladies inflammatoires de l&#39; intestin (MICI) 3,14. Il existe deux grands types de MICI: la maladie de Crohn (MC) et la colite ulcéreuse (CU). Les patients atteints de ces maladies souffrent généralement de saignements rectaux, des diarrhées sévères et des douleurs abdominales 15,16. La seule cause des MII est encoreinconnue, mais une combinaison de facteurs génétiques, les influences environnementales et les réponses immunitaires dérégulées pourrait être l&#39;événement clé pour le développement de la maladie 15. Les modèles animaux pour les MII ont été utilisés depuis plus de 50 ans. Au cours des dernières décennies , de nouveaux systèmes modèles MII ont été développés pour tester les différentes hypothèses concernant la pathogenèse des MICI 17,18. Le modèle le mieux caractérisé de la colite chronique est le modèle de transfert de cellules T qui induit une perturbation de l&#39; homéostase des lymphocytes T 19,20. Ce modèle consiste à transférer des cellules T naïves de souris immunocompétentes dans des hôtes qui ne disposent pas T et des lymphocytes B (tels que RAG - / - et les souris SCID) 16,21. Le développement de la maladie dans ce modèle est surveillée pendant 3-10 semaines en évaluant la présence de diarrhée, de l&#39;activité physique réduite et une perte de poids corporel. Il en est ainsi appelée le syndrome de dépérissement 16. Par rapport à la souris en bonne santé le tissu colique des hôtes transplantées est thicker, plus court et plus lourd 16. En utilisant le modèle de transfert de cellule T, il est possible de comprendre comment les différentes populations de cellules T peuvent contribuer à la pathogenèse des MICI 22. Le modèle de transfert de cellule T ne pas analyser les interactions entre les APC et les cellules T dans le processus de la maladie d&#39;une manière spécifique à un antigène. Il a été démontré que l&#39;interaction entre les cellules myéloïdes et des cellules lymphoïdes peut être responsable du développement de l&#39; inflammation intestinale 23. Bien que de nombreux aspects de la MII ont été clarifiées, les premiers événements qui mènent au développement de la maladie doivent encore être clairement compris. Il a été montré qu&#39;en l&#39;absence de transfert de microbiote colite ne peut être établie 24. Récemment, plusieurs théories suggèrent que l&#39; EIA peut être le résultat d&#39;une réponse immunitaire contre des bactéries commensales 25. Les auteurs ont également proposé que les bactéries commensales sont essentiels pour induire une inflammation dans l&#39;intestin distal26. En germe libre (GF) les animaux du système immunitaire intestinal est généralement altérée 27,28, mais une colonisation de ces souris avec un mélange de libre pathogènes spécifiques-bactéries résultats dans le développement du système immunitaire intestinal entièrement compétente 29. Par conséquent, le microbiote semble être un élément clé dans la pathogenèse des MII, soit comme un mécanisme qui prédispose ou protège contre le développement de l&#39; inflammation intestinale 30,31. Les théories actuelles suggèrent que les MII est un résultat d&#39; un déséquilibre microbien, appelé dysbiose, chez les patients génétiquement prédisposés 32, mais on ne sait pas encore si le dysbiose est la cause ou la conséquence de la maladie 12. Eu égard au rôle des micro - organismes dans le développement des IBD, des expériences in vitro ont montré que les cellules T CD4 + peuvent être activés par des APC puisées avec les bactéries intestinales 33,34. En outre, il a été montré que les antigènes dedifférentes espèces de bactéries commensales telles que E. coli, Bacteroides, Eubacterium et Proteus, sont capables d&#39;activer les cellules T CD4 + 35. Ceci indique que la présentation des antigènes bactériens à des cellules T est importante pour le développement des IBD. Pour réduire la complexité de plusieurs antigènes dérivés par la microflore dans le processus de maladie, d&#39; une souche de E. coli a été créée qui produit l&#39;antigène OVA. Colite de transfert a été induite par l&#39; injection de cellules T spécifiques de l&#39; OVA dans RAG - / - animaux colonisés par OVA exprimant E. coli. Ce modèle est basé sur des données récentes suggérant que CX 3 CR1 + députés, un sous - ensemble de cellules majeur dans la lamina propria colique (clp) 36, sont en interaction avec les cellules T CD4 + pendant le transfert colite 37. PM échantillonner la lumière intestinale pour antigène particulaire, comme des bactéries, en utilisant leurs dendrites 36, 38,39. Études précédentesa démontré que les députés peuvent également prendre des antigènes solubles, tels que OVA, introduits dans la lumière intestinale 40,41. Compte tenu de l&#39;abondance de CX 3 CR1 + députés dans le clp, il est possible que ces cellules peuvent goûter les bactéries luminales et d&#39; interagir avec des cellules T CD4. L&#39; imagerie confocale de souris transplantées avec des cellules T CD4 + spécifiques d&#39;OVA colonisés par E. coli CFP-OVA, montrent que CX 3 CR1 + députés sont en contact avec OT-II T CD4 + au cours du développement de la colite entraîné antigène. Ce modèle permet l&#39;étude du processus de présentation de l&#39;antigène entre les APC et les cellules T intestinales spécifiques uniquement pour notamment des bactéries exprimant l&#39;antigène dans la lumière intestinale.

<table><tbody><tr><td>LB Broth, Miller (Luria-Bertani)</td><td>Difco</td><td>244620</td><td></td></tr><tr><td>Rotary Shake</td><td>Reiss Laborbedarf e. K.</td><td>Modèle 3020 GFL</td><td></td></tr><tr><td>Couvettes 2 mm d’écart.</td><td>Peqlab Biotechnologie GmbH</td><td>71-2020</td><td></td></tr><tr><td>Glycérol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Gène Pulser Système Xcell&nbsp ;</td><td>BioRad Laboratories GmbH</td><td>1652660</td><td></td></tr><tr><td>LB Agar, Miller (Luria-Bertani)</td><td>Difco</td><td>244510</td><td></td></tr><tr><td>Ampicilline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9393-5G</td><td></td></tr><tr><td>SOC Medium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1797-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Kit d’isolement de plasmides hautement purs</td><td>Roche</td><td>11754777001</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Carl Roth GmbH & Co</td><td>3810.1</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9884-100G</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5941</td><td></td></tr><tr><td>Acide acétique glacial</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>537020&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Chambre de gel</td><td>PEQLAB Biotechnology GmbH</td><td>40-0708</td><td></td></tr><tr><td>Colorant de chargement</td><td>Thermo Fisher</td><td>R0611</td><td></td></tr><tr><td>GeneRuler 1 kb Échelle d’ADN&nbsp ;</td><td>Thermo Fisher</td><td>SM0312</td><td></td></tr><tr><td>Solution de bromure d’éthidium</td><td>Carl Roth GmbH & Co. KG</td><td>2218.3</td><td></td></tr><tr><td>Système de photodocumentation&nbsp ;</td><td>Decon Science Tech GmbH</td><td>DeVision G&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Séquençage de l’ADN&nbsp ;</td><td>MWG-Biotech GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sérum salin tamponné au phosphate (PBS)</td><td>Biochrom</td><td>L182-50</td><td></td></tr><tr><td>Microscope fluorescent&nbsp ;</td><td>Zeiss</td><td>HBO 100</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra System</td><td>Bio-Rad Laboratories GmbH</td><td>1658005</td><td></td></tr><tr><td>PageRuler Échelle de protéines précolorées&nbsp ;</td><td>Fermentas, St. Leon-Rot, Allemagne</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IstanBlue Solution</td><td>Expedeon, Cambridgeshire, Royaume-Uni</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Membrane nitrocellulosique&nbsp ;</td><td>Macherey-Nagel GmbH & Co. KG</td><td>741280</td><td></td></tr><tr><td>Buvard électro</td><td>Biometra GmbH</td><td>846-015-600</td><td></td></tr><tr><td>Albumines sériques bovines (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6003-25G</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-ovalbumine&nbsp ;</td><td>Abcam</td><td>ab181688</td><td></td></tr><tr><td>Anti-lapin IgG&nbsp ; HRP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0545&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Substrat de transfert Western Pierce ECL Plus</td><td>, Thermo Fischer Scientific Inc</td><td>32132</td><td></td></tr><tr><td>Forene</td><td>Abbott</td><td>2594.00.00</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>10500-064</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Cell Strainers</td><td>Fischer Scientific&nbsp ;</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure d’ammonium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>254134-5G</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10708976001</td><td></td></tr><tr><td>CD4+ CD62 L+ Kit d’isolation T&nbsp ;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-227&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Colonnes MACS LS&nbsp ;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>Colonnes MACS MS&nbsp ;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>MidiMACS Séparateur</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>Séparateur MiniMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille d’alimentation 20G</td><td>SouthPointe Surgical Supply, Inc</td><td>FN-7903</td><td></td></tr><tr><td>Solution de formol, neutre tamponné, 10 %</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Paraffine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1496904</td><td></td></tr><tr><td>Hématoxyline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9627</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>230251&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Collagénase de type VIII</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C-2139</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) moyen</td><td>AppliChem</td><td>A2044, 9050</td><td></td></tr><tr><td>Azoture de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>438456</td><td></td></tr><tr><td>souris BD Fc Block</td><td>BD Pharmingen</td><td>553141</td><td></td></tr><tr><td>Liaison d’anticorps monoclonaux conjugués FITC V&szlig ; 5.1, 5.2&nbsp ;</td><td>BD Pharmingen</td><td>553189</td><td></td></tr><tr><td>Liaison d’AcM conjuguée à l’APC CD4 GK1.5&nbsp ;</td><td>eBioscience</td><td>17-0041-83</td><td></td></tr><tr><td>FACS Calibur&nbsp ;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FCS Express V3 logiciel</td><td>DeNovo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Meta microscope confocal à balayage&nbsp ;</td><td>Zeiss</td><td>LSM 710°</td><td></td></tr><tr><td>Station de travail Zeiss</td><td>Zeiss</td><td>LSM 7</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel Zeiss ZEM&nbsp ;</td><td>Zeiss</td><td>v4.2.0.121</td><td></td></tr><tr><td>Plaques immunitaires Maxisorp&nbsp ;</td><td>NUNC, Roskilde</td><td>442404</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin phosphatase alcaline conjuguée</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>016-050-084</td><td></td></tr><tr><td>Substrat de la phosphatase alcaline 4-Nitrophényl phosphate disodique sel hexahydraté</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71768-5G</td><td></td></tr><tr><td>mAb R4-6A2</td><td>BD Biosciences</td><td>551216</td><td></td></tr><tr><td>mAb XMG1.2&nbsp ;</td><td>BD Biosciences</td><td>554410</td><td></td></tr><tr><td>TECAN lecteur de microplaques-ELISA</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Logiciel EasyWin</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNase I recombinant</td><td></td><td>4536282001</td><td></td></tr></tbody></table>

développement d&#39;un modèle colite antigène conduit à étudier la présentation des antigènes par les cellules présentatrices d&#39;antigènes aux cellules t

Development of an Antigen-driven Colitis Model to Study Presentation of Antigens by Antigen Presenting Cells to T Cells

La maladie inflammatoire de l’intestin (MICI) est une inflammation chronique qui affecte le tractus gastro-intestinal (TCM). L’une des meilleures façons d’étudier les mécanismes immunologiques impliqués au cours de la maladie est le modèle de transfert de lymphocytes T de la colite. Dans ce modèle, des souris immunodéficientes (receveuses de RAG-/-) sont reconstituées avec des lymphocytes T CD4+ naïfs provenant d’hôtes sains de type sauvage.
Ce modèle permet d’examiner les premiers événements immunologiques conduisant à la maladie et à l’inflammation chronique, lorsque l’inflammation intestinale se perpétue mais ne dépend pas d’un antigène défini. Pour étudier le rôle potentiel des cellules présentatrices d’antigènes (CPA) dans le processus de la maladie, il est utile de disposer d’un modèle de maladie induit par l’antigène, dans lequel un antigène défini dérivé de commensaux conduit à la colite. Un modèle de colite induite par l’antigène a donc été développé. Dans ce modèle, les lymphocytes T CD4+ OT-II, qui ne peuvent reconnaître que des épitopes spécifiques de la protéine OVA, sont transférés dans des hôtes RAG-/- confrontés à E. coli exprimant CFP-OVA. Ce modèle permet d’examiner les interactions entre les APC et les lymphocytes T dans la lamina propria.

Pour établir un modèle de colite entraîné antigène un E. coli a été construit qui contient un plasmide dans lequel le gène de la PCP est fusionnée à la séquence codant pour la protéine ovalbumine de poulet et de la construction de fusion est exprimé sous le contrôle du promoteur constitutif fort P hyper (figure 1A). La microscopie de fluorescence montre que le recombinant E. coli PCFP OVA, mais pas E. parentale <e...

Dans ce modèle de colite induite par antigène, les lymphocytes T CD4+ OT-II exprimant une protéine fluorescente rouge ont été transférés adoptivement dans des souris RAG-/- qui expriment une protéine fluorescente verte dans des phagocytes mononucléaires (MP). Les hôtes ont été mis au défi par Escherichia coli (E. coli) exprimant la protéine ovalbumine (OVA) fusionnée à une protéine fluorescente cyan (CFP).

Développement d&#39;un modèle Colite antigène conduit à étudier la présentation des antigènes par les cellules présentatrices d&#39;antigènes aux cellules T

Inflammatory bowel disease (IBD) is a chronic inflammation which affects the gastrointestinal tract (GIT). One of the best ways to study the immunological ...

L'objectif général de ce modèle de colite induite par un antigène est de déterminer si les phagocytes mononucléés positifs pour CX3CR1 interagissent avec et activent les lymphocytes T CD4 positifs au cours d'une colite spécifique à l'antigène, et si cette expansion des lymphocytes T effecteurs dépendante des phagocytes mononucléés se produit au sein de la lame propre intestinale. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des maladies inflammatoires de l'intestin, telles que les types d'interactions qui se produisent entre les cellules présentatrices d'antigènes et les lymphocytes T effecteurs dans la lame propre colique. Le principal avantage de cette technique est qu'elle permet d'étudier les interactions entre cellules immunitaires ainsi que les éléments menant à la pathogénicité des maladies inflammatoires de l'intestin.Cette méthode utilise le modèle de colite par transfert de cellules T, dans lequel des cellules T CD4 naïves spécifiques de l'antigène, marquées par une fluorescence rouge, sont transférées chez un hôte immunodéficient exprimant la protéine fluorescente verte dans les cellules mononucléées. Le transfert cellulaire est suivi par une administration orale par sonde de bactéries exprimant un antigène marqué d'une fluorescence bleue. Les événements immunitaires se produisant dans la lame propria intestinale des hôtes peuvent être suivis à divers stades du développement de la maladie.Utilisez des ciseaux de dissection pour ouvrir le côlon longitudinalement et lavez le tissu dans une boîte de Pétri contenant 25 millilitres de PBS afin d'éliminer tous débris et mucus. Coupez le côlon en morceaux de cinq à huit millimètres et placez les fragments obtenus dans 20 millilitres de DPBS frais sans calcium ni magnésium, supplémenté avec 10 millimolaire de HEPES et 5 millimolaire d'EDTA. Agitez le tube contenant l'échantillon au vortex pendant 30 secondes à vitesse maximale.Ensuite, incuber à 37 degrés Celsius pendant dix minutes avec agitation douce pour éliminer l'épithélium. À la fin de l'incubation, vortexer à nouveau pendant 30 secondes. Puis, éliminer le surnageant contenant les cellules épithéliales.Transférez les morceaux de tissu dans un nouveau tube contenant 20 millilitres de tampon PBS, HEPES et EDTA frais, puis répétez l'incubation avec les étapes de vortexage avant et après. Après la troisième répétition, toutes les cellules épithéliales sont éliminées et le surnageant est clair. Lavez délicatement les fragments de tissu au PBS pour éliminer toute cellule épithéliale résiduelle.Couper les fragments de tissu en morceaux de deux millimètres sur deux millimètres et transférer les morceaux dans dix millimètres de milieu RPI pour la digestion, supplémenté avec 0,5 milligramme par millilitre de collagénase de type huit et dix unités par millilitre de DNase un. Vortexer les échantillons pendant 30 secondes. Ensuite, incuber les morceaux de tissu à 37 degrés Celsius sous agitation pendant 30 à 35 minutes et vortexer le tube toutes les cinq minutes pendant l'incubation.Lorsque le tissu est digéré, filtrer la suspension obtenue à l’aide d’un tamis cellulaire de 70 microns dans un tube conique de 50 millilitres. Rincer une fois le tamis cellulaire et centrifuger pour récupérer le culot de la suspension de cellules isolées. Enfin, laver les cellules une fois dans du PBS et centrifuger.Ensuite, déterminez le nombre de cellules viables par exclusion au bleu de trypan. La protéine de fluorescence cyan produisant l'ovalbumine chez E. coli active la production d'interféron gamma dans les cellules OT-II in vitro, contrairement à E.coli exprimant uniquement le CFP. L'imagerie confocale 3D ex vivo du tissu colique de souris transgéniques exprimant la protéine fluorescente verte, nourries avec des œufs de E. coli PCFP, démontre la présence de bactéries exprimant la protéine fluorescente à l'intérieur des cryptes coliques près des cellules épithéliales intestinales et co-localisées avec les phagocytes intestinaux de l'hôte.Dans les animaux rouges OT-II, les cellules T CD4 positives sont caractérisées par leur co-expression de la protéine fluorescente rouge et du V bêta cinq virgule un. Lorsqu'elles sont exposées à l'ovalbumine E. coli PCFP, les souris transgéniques déficientes en lymphocytes BNT et exprimant la protéine fluorescente verte, qui ont reçu une transplantation adoptive de cellules T CD4 positives OT-II rouges et positives pour le ligand CD62, perdent rapidement du poids corporel et développent des signes cliniques de colite.Sept jours après le transfert des cellules, seuls quelques phagocytes de l'hôte ont prélevé des ova E. coli PCFP et aucune cellule OT-II rouge positive n'est détectée. Quatorze jours après le transfert des cellules, les phagocytes de l'hôte ayant prélevé l'E.Les ovules PCFP d'E. coli se trouvent en étroite proximité avec les cellules OT-II rouges positives transférées de façon adoptive. À 21 jours après le transfert cellulaire, un grand nombre de cellules hôtes ont capté les ovules PCFP d'E. coli et les cellules donneuses OT-II rouges positives, qui sont réparties dans toute la lame propria colique et sont en contact étroit avec les phagocytes intestinaux de l'hôte.Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en quatre heures si elle est correctement exécutée. Après cette procédure, d'autres méthodes, telles que la coloration des lymphocytes intestinaux et l'analyse des cytokines sériques, peuvent être effectuées afin de répondre à des questions supplémentaires concernant l'état d'activation des cellules T CD4 et de confirmer la gravité de la colite. À chaque avancée, cette technique ouvre la voie à des recherches dans le domaine de l'immunologie pour explorer les petits événements menant à la maladie inflammatoire de l'intestin dans le modèle murin.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière d'isoler les cellules immunitaires de la lame propre colique pour une analyse ex vivo en aval.

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Immunology and Infection

Immunologie et infection

Ici, nous détaillons une méthode pour l'isolement rapide des cellules dendritiques de souris intestinales (DCS) et les macrophages. Caractérisation phénotypique des CD intestinales et les macrophages est effectuée en utilisant plusieurs couleurs d'écoulement analyse cytométrique tandis magnétique enrichissement bourrelet suivie par tri cellulaire est utilisé pour donner des populations de grande pureté pour des études fonctionnelles.

L&#39;isolement et la caractérisation des cellules dendritiques et les macrophages de l&#39;intestin de souris

Cette vidéo présente une technique permettant de générer un modèle murin de colite induit par des produits chimiques, une maladie inflammatoire de l’intestin. La souris est autorisée à consommer une solution de sulfate de sodium de dextran (DSS) pendant une durée adéquate. Lors de la consommation, le DSS endommage la barrière de mucus et de la couche épithéliale dans le côlon, permettant aux microbes intestinaux de pénétrer dans les tissus sous-jacents - où ils sont détectés par les cellules...

Technique pour générer un modèle murin de colite induite par le sulfate de dextran sodique

DNBS / TNBS colite induite propose une méthode alternative et peu coûteuse pour étudier la pathobiologie de la maladie inflammatoire de l'intestin. Le protocole décrit dans ce document décrit l'application réussie de DNBS pour induire la colite chez les souris et les rats et permet d'étudier en profondeur les réponses intestinales médiés par l'hôte.

Modèles DNBS / TNBS colite: Fournir connaissances sur les maladies inflammatoires de l&#39;intestin et des effets de graisses alimentaires

Ici, nous présentons un protocole pour induire une inflammation colique chez la souris par transfert adoptif de lymphocytes Tsyngéniques à haute teneur en CD4+CD45RB dans des receveurs déficients en lymphocytes T et B. Les caractéristiques cliniques et histopathologiques imitent les maladies inflammatoires de l’intestin humain. Cette méthode permet d’étudier l’initiation de l’inflammation colique et la progression de la maladie.

Induction de murin inflammation intestinale par transfert adoptif de effecteur CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Haute</sup&gt; T cellules dans des souris immunodéficientes

Des sous-ensembles distincts de cellules dendritiques existent en tant que populations rares dans les organes lymphoïdes, et sont donc difficiles à isoler en nombre suffisant et en pureté suffisante pour des expériences immunologiques. Nous décrivons ici une méthode à haute efficacité et à haut rendement pour l’isolement de tous les principaux sous-ensembles actuellement connus de cellules dendritiques spléniques de souris.

Une méthode de rendement efficace et haute pour l&#39;isolement des souris dendritiques sous-ensembles cellulaires

Nous décrivons ici un modèle de souris rapporteure transgénique pour visualiser les cellules productrices d’IL-22 à l’intérieur de différents tissus de souris. Cette méthode peut être utilisée pour suivre l’emplacement d’autres cytokines ou protéines de secrétaire chez la souris.

Visualisation de l&#39;IL-22 exprimant Lymphocytes en utilisant des souris Reporter

Colostomie distale murin fournit un modèle murin pour la colite détournement humaine, une colite lymphocytaire principalement dans le segment du côlon exclus du flux de matières fécal.

Murine colostomie distale, un nouveau modèle de colite détournement chez les souris C57BL/6

Le protocole présente un modèle murine TNBS-induit complet de Crohn' la maladie de s et des méthodes pour visualiser des récepteurs d’oestrogène par immunohistochemistry utilisant l’immunofluorescence des sections formelles-fixes de colon incorporées dans la paraffine.

Visualisation des récepteurs d’oestrogène dans les colons des souris atteints de la maladie de Crohn induite par le TNBS à l’aide de l’immunofluorescence

Dans ce protocole, un modèle de colite adoptive de transfert de lymphocytes T spécifiques à l’antigène du microbiote intestinal est décrit. Les lymphocytes T CD4+ sont isolés à partir de souris transgéniques TCR CBir1. Ceux-ci sont spécifiques pour un antigène immunodominant du microbiote intestinal CBir1 flagellin, qui est transféré dans les souris Rag1-/- receveuses, entraînant une inflammation intestinale.

Induction de l’inflammation intestinale par transfert adoptif de lymphocytes T CD4+ transgéniques CBir1 TCR à des souris immunodéficientes

Une méthode nouvelle DC indépendante pour l'induction et l'expansion des cellules T spécifiques d'antigènes est décrite. HLA A2-Ig des cellules à base Antigène artificielle Présentation (AAPC) sont chargés avec des peptides HLA-A2 restreint efficacement l'expansion des CTL spécificité antigénique divers. Cette technologie offre un grand potentiel pour CTL à base d'immunothérapie adoptive.

HLA-Ig des cellules à base Antigène artificielle Présentation d&#39;Efficient Ex vivo Extension du CTL humaines

Découvrez un modèle de colite antigène pour étudier les interactions entre phagocytes mononucléaires CX3CR1+ et cellules T CD4+ dans la lamina propria intestinale. Cette méthode permet de suivre les réponses immunitaires et de comprendre les mécanismes de la maladie inflammatoire de l'intestin.

Développement dun modèle Colite antigène conduit à étudier la présentation des antigènes par les cellules présentatrices dantigènes aux cellules T (Vidéo) | JoVE Journal

Développement d'un modèle Colite antigène conduit à étudier la présentation des antigènes par les cellules présentatrices d'antigènes aux cellules T

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