Enregistrement d'EEG dans des rats néonatals à déplacement libre à l'aide d'une nouvelle méthode

L’objectif global de cette méthode est d’enregistrer les EEG de petits rats nouveau-nés se déplaçant librement, à l’aide d’une nouvelle configuration d’électrodes stable pendant une semaine ou plus. Cette méthode aura répondu à des questions clés dans le domaine des neurosciences et sera bénéfique dans l’étude d’une épilepsie néonatale. En utilisant cette technique, on peut enregistrer des signaux EEG stables et de haute qualité pendant de plus longues périodes.

Ce qui aidera au diagnostic de divers troubles neuropathologiques. En général, les personnes qui ne connaissent pas cette méthode auront du mal car les rats nouveau-nés à p8 à p15 sont très difficiles à manipuler et nécessitent beaucoup de soins. L’électrode nécessite un contact à broches pour fonctionner comme interface de signal avec les dispositifs de communication.

Un ordinateur pin lo sai remplit ce rôle. Séparez soigneusement les broches mâles et femelles d’une goupille d’ordinateur à l’aide d’une pince. Ensuite, connectez les broches mâle et femelle ensemble pour former une électrode et fixez la connexion avec du cyanoacrylate.

Fabriquez plusieurs électrodes de ce type. Une fois que les liaisons ont durci, placez les électrodes dans un bécher rempli d’eau distillée pendant dix minutes. Ensuite, placez-les dans un nettoyeur à ultrasons pour nettoyer les électrodes.

Ensuite, transférez le bécher dans un four réglé à 45 degrés Celsius et chauffez-les pendant une demi-heure. Enfin, stérilisez les électrodes avec une exposition UV de 30 minutes. Dans une cagoule de bio-sécurité, installez d’abord les outils chirurgicaux stérilisés et un appareil stéréotaxique stérilisé pour la chirurgie.

Ensuite, anesthésiez le petit rat nouveau-né à l’aide de deux virgule cinq pour cent d’isoflurane. Lorsque le chiot est profondément anesthésié, réduisez l’isoflurane à un pour cent. Avant de continuer, pincez les orteils pour vous assurer que la souris est suffisamment anesthésiée.

Ensuite, fixez la tête du chiot dans l’appareil stéréotaxique. Positionnez les barres d’oreille dans les conduits auditifs et serrez doucement les barres. Attention : le crâne néonatal est très mou.

Maintenant, faites une incision médiane de quinze millimètres dans le crâne. Ensuite, à l’aide d’une pince, écartez doucement le cuir chevelu pour élargir l’incision. Pour garder l’incision ouverte, utilisez un morceau de coton imbibé de solution saline.

Maintenant, localisez le bregma et le lambda, et marquez-les avec un crayon. Les étapes suivantes d’implantation des électrodes sont essentielles et doivent être exécutées avec précision. Tout d’abord, à l’aide d’une aiguille de calibre 26, faites un trou de bavure dans le cortex préfrontal, deux millimètres en avant du bregma et à moins de cinq millimètres du point zéro de la ligne médiane.

Ensuite, faites un trou de bavure dans l’hippocampe à un point de huit millimètres en arrière du bregma et à zéro point cinq millimètres latéraux de la ligne médiane. L’aiguille ne doit pas pénétrer à plus de deux millimètres sous la surface corticale pour minimiser les lésions cérébrales. Maintenant, à l’aide d’une pince, insérez l’électrode de référence dans le trou du cortex et insérez les électrodes d’enregistrement dans le trou de l’hippocampe.

Ensuite, appliquez une pommade à l’érythromycine autour des électrodes et fixez les électrodes en place avec du cyanoacrylate. Pendant que la colle adhère, préparez le ciment dentaire à une consistance collante et visqueuse. La viscosité du ciment dentaire est critique.

Si le ciment dentaire est trop fin, cela peut entraîner l’accumulation d’une couche isolante indésirable sous l’électrode. Si le ciment est trop dense, les électrodes se détacheront plus facilement en raison de l’excès de masse. Avant d’appliquer le ciment, séchez soigneusement le crâne et les électrodes.

Ensuite, fixez les électrodes au crâne avec du ciment dentaire. Ensuite, appliquez un peu d’acide picrique sur les électrodes pour leur ajouter une autre couche de protection. Maintenant, retirez l’animal du cadre stéréotaxique et injectez 300 microlitres de solution de glucose à dix pour cent par voie sous-cutanée.

Ensuite, transférez l’animal dans une couverture chauffante pour le maintenir à 37 degrés Celsius jusqu’à ce qu’il soit ambulatoire. Une fois ambulatoire, administrez de la buprénorphine pour atténuer la douleur post-chirurgicale et transférez le chiot dans sa cage d’origine avec sa mère. Avant d’utiliser l’implant, attendez au moins deux jours que le chiot se rétablisse.

Après la période de récupération, hébergez le chiot seul pour faire des enregistrements pendant une dizaine de minutes afin qu’il puisse se familiariser avec l’environnement. Connectez les électrodes à un amplificateur et connectez l’amplificateur à un convertisseur AD connecté à un ordinateur. Veillez à ne pas emmêler ces connexions.

Ensuite, sur l’unité d’acquisition de données, sélectionnez une fréquence d’échantillonnage d’au moins 10 000 hertz pour l’enregistrement et vérifiez que la transmission des données est correcte. Collectez un enregistrement de base. Après avoir effectué un enregistrement de base, injectez de l’acide kaïnique par voie intrapéritonéale au petit pour provoquer des crises d’épilepsie.

Quinze minutes après l’injection, observez et notez les décharges épileptiques. Enregistrez les données numérisées et analysez-les à l’aide d’un logiciel de traitement du signal. Révélez le niveau de puissance des différentes composantes de fréquence dans les EEG néonatals à l’aide de l’analyse du spectre de puissance.

Calculez la puissance à partir de périodes d’une minute en trouvant la racine carrée moyenne de l’amplitude carrée de un à cent hertz, qui est la bande EEG. Dix minutes après l’injection d’acide kainique, des schémas de décharge interictale et ictale EEG récurrente ont été enregistrés. Les crises les plus courantes enregistrées étaient de type tonique clonique.

La durée de la tonique ictale a duré une quinzaine de secondes. Il a également été observé que les décharges toniques étaient suivies de rafales cloniques. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’implanter des électrodes et d’obtenir des enregistrements EEG de haute qualité de chiots rats nouveau-nés p8 à p15.

Une fois rassemblée, l’implantation cervicale peut se faire en moins de dix minutes selon la complexité de l’intervention.