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DOI: 10.3791/57374-v
Yu Okazawa1,2, Kosuke Mizukoshi1,2, Yu Koyama2,4, Shoki Okubo5, Hiromitsu Komiyama1, Yutaka Kojima1, Michitoshi Goto1, Sonoko Habu3, Okio Hino2, Kazuhiro Sakamoto1, Akira Orimo2
1Department of Coloproctological Surgery,Juntendo University Faculty of Medicine, 2Department of Molecular Pathogenesis,Juntendo University Faculty of Medicine, 3Atopy Research Center,Juntendo University Faculty of Medicine, 4Department of Oral Pathobiological Science and Surgery,Tokyo Dental College, 5Department of Gastroenterology,Juntendo University Faculty of Medicine
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Pour permettre une détection très sensible de la diffusion du cancer colorectal humain cellules (CRC) qui colonisent les tissus, nous montrons ici un protocole pour la transduction efficace des Particules Lentivirales protéine fluorescente verte (GFP) dans les cellules organoïde CRC PDX-dérivés avant leur injection à des souris bénéficiaires, avec l’observation au microscope stéréo-fluorescence.
Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la biologie tumorale sur les micrométastases trouvées chez les patients atteints d’un cancer du côlon. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet une détection très sensible avec des micrométastases induites par des organoïdes de cancer du côlon marqués à la GFP et dérivés de patients chez la souris. En général, les personnes qui ne connaissent pas cette méthode auront du mal car il peut être difficile de détecter les micrométastases dérivées d’organoïdes de tumeurs du côlon dans des organes distants chez la souris.
Kosuke Mizukoshi et Yu Koyama, tous deux doctorants et chirurgiens de mon groupe, feront la démonstration de la procédure avec Yu Okazawa. Pour générer des organoïdes de cellules cancéreuses colorectales humaines, ajoutez d’abord 150 microlitres de matrice extracellulaire artificielle par puits à une plaque de 12 puits sur glace. Lorsque tous les puits ont été revêtus, incubez la plaque pendant 30 à 60 minutes dans un incubateur à 37 degrés Celsius et 5 % de CO2 pour solidifier les gels.
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