Name: Étiquetage des xénogreffes de patients dérivés cancer du sein avec traçables Reporters pour la croissance tumorale et la métastase études (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 53 s
Description: Découvrez l'étiquetage stable des xénogreffes dérivées de patients par particules lentivirales avec GFP et luciférase. Cette méthode permet le suivi de la croissance tumorale et la détection des métastases par imagerie in vivo.

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Les auteurs remercient le Dr Darrel Kotton à l&#39;Université de Boston pour fournir le-EF1aL-DsRed-UBC-GFP-W vecteur de phage et des protocoles pour la production de lentiviral à titre élevé utilisés dans ces études. Ce travail a été financé par le DOD BCRP W81XWH-11-1-0101 (DMC), ACS IRG # 57-001-53 (DMC), NCI K22CA181250 (DMC) et R01 CA140985 (CAS) .NCI P30CA046934 Centre subvention prise en charge dans l&#39; imagerie in vivo et la culture de tissus noyaux à l&#39;Université du Colorado AMC.

<ol><li>Jin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+human+tumour+tissue+xenografts+in+immunodeficient+mice%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived human tumour tissue xenografts in immunodeficient mice: a systematic review.</a> Clin Transl Oncol. 12 (7), 473-480 (2010).</li>
<li>Siolas, D., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+tumor+xenografts%3A+transforming+clinical+samples+into+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived tumor xenografts: transforming clinical samples into mouse models.</a> Cancer Res. 73 (17), 5315-5319 (2013).</li>
<li>DeRose, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+grafts+derived+from+women+with+breast+cancer+authentically+reflect+tumor+pathology%2C+growth%2C+metastasis+and+disease+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor grafts derived from women with breast cancer authentically reflect tumor pathology, growth, metastasis and disease outcomes.</a> Nat Med. 17 (11), 1514-1520 (2011).</li>
<li>Kabos, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+luminal+breast+cancer+xenografts+retain+hormone+receptor+heterogeneity+and+help+define+unique+estrogen-dependent+gene+signatures%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+cancer+research+and+treatment%22%5BJournal%5D)">Patient-derived luminal breast cancer xenografts retain hormone receptor heterogeneity and help define unique estrogen-dependent gene signatures.</a> Breast cancer research and treatment. 135 (2), 415-432 (2012).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+renewable+tissue+resource+of+phenotypically+stable%2C+biologically+and+ethnically+diverse%2C+patient-derived+human+breast+cancer+xenograft+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A renewable tissue resource of phenotypically stable, biologically and ethnically diverse, patient-derived human breast cancer xenograft models.</a> Cancer Res. 73 (15), 4885-4897 (2013).</li>
<li>Lum, D. H., Matsen, C., Welm, A. L., Welm, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+human+primary+tumorgraft+models%3A+comparisons+with+traditional+oncology+preclinical+models+and+the+clinical+relevance+and+utility+of+primary+tumorgrafts+in+basic+and+translational+oncology+research%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Overview of human primary tumorgraft models: comparisons with traditional oncology preclinical models and the clinical relevance and utility of primary tumorgrafts in basic and translational oncology research.</a> Curr Protoc Pharmacol. , (2012).</li>
<li>Marangoni, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+patient+tumor-derived+breast+cancer+xenografts+for+preclinical+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A new model of patient tumor-derived breast cancer xenografts for preclinical assays.</a> Clin Cancer Res. 13 (13), 3989-3998 (2007).</li>
<li>Garrido-Laguna, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+engraftment+in+nude+mice+and+enrichment+in+stroma-+related+gene+pathways+predict+poor+survival+and+resistance+to+gemcitabine+in+patients+with+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor engraftment in nude mice and enrichment in stroma- related gene pathways predict poor survival and resistance to gemcitabine in patients with pancreatic cancer.</a> Clin Cancer Res. 17 (17), 5793-5800 (2011).</li>
<li>Landis, M. D., Lehmann, B. D., Pietenpol, J. A., Chang, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+breast+tumor+xenografts+facilitating+personalized+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived breast tumor xenografts facilitating personalized cancer therapy.</a> Breast Cancer Res. 15 (1), 201(2013).</li>
<li>Norum, J. H., Andersen, K., Sorlie, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+learned+from+the+intrinsic+subtypes+of+breast+cancer+in+the+quest+for+precision+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Lessons learned from the intrinsic subtypes of breast cancer in the quest for precision therapy.</a> Br J Surg. 101 (8), 925-938 (2014).</li>
<li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+tumour+xenografts+as+models+for+oncology+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development.</a> Nat Rev Clin Oncol. 9 (6), 338-350 (2012).</li>
<li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenografts+of+triple-negative+breast+cancer+reproduce+molecular+features+of+patient+tumors+and+respond+to+mTOR+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenografts of triple-negative breast cancer reproduce molecular features of patient tumors and respond to mTOR inhibition.</a> Breast Cancer Res. 16 (2), R36(2014).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells+from+human+breast+tumors+are+involved+in+spontaneous+metastases+in+orthotopic+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells from human breast tumors are involved in spontaneous metastases in orthotopic mouse models.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (42), 18115-18120 (2010).</li>
<li>Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cancer+stem+cell+metastasis+in+xenograft+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of cancer stem cell metastasis in xenograft animal models.</a> Methods Mol Biol. 568, 7-19 (2009).</li>
<li>Thibaudeau, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mimicking+breast+cancer-induced+bone+metastasis+in+vivo%3A+current+transplantation+models+and+advanced+humanized+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Mimicking breast cancer-induced bone metastasis in vivo: current transplantation models and advanced humanized strategies.</a> Cancer Metastasis Rev. 33 (2-3), 721-735 (2014).</li>
<li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat Rev Cancer. 11 (2), 135-141 (2011).</li>
<li>Powell, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53+deficiency+linked+to+B+cell+translocation+gene+2+%28BTG2%29+loss+enhances+metastatic+potential+by+promoting+tumor+growth+in+primary+and+metastatic+sites+in+patient-derived+xenograft+%28PDX%29+models+of+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">p53 deficiency linked to B cell translocation gene 2 (BTG2) loss enhances metastatic potential by promoting tumor growth in primary and metastatic sites in patient-derived xenograft (PDX) models of triple-negative breast cancer.</a> Breast Cancer Res. 18 (1), (2016).</li>
<li>DeRose, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+models+of+human+breast+cancer%3A+protocols+for+in+vitro+and+in+vivo+applications+in+tumor+biology+and+translational+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived models of human breast cancer: protocols for in vitro and in vivo applications in tumor biology and translational medicine.</a> Curr Protoc Pharmacol. , (2013).</li>
<li>Wang, X., McManus, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentivirus+production%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Lentivirus production.</a> J Vis Exp. (32), (2009).</li>
<li>Indumathi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+depletion+of+stromal+vascular+fractions+isolated+from+human+adipose+tissue%3A+a+novel+approach+towards+cell+enrichment+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Lineage depletion of stromal vascular fractions isolated from human adipose tissue: a novel approach towards cell enrichment technology.</a> Cytotechnology. 66 (2), 219-228 (2014).</li>
<li>Hines, W. C., Yaswen, P., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+breast+cancer+requires+identification+and+correction+of+a+critical+cell+lineage-dependent+transduction+bias%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Modelling breast cancer requires identification and correction of a critical cell lineage-dependent transduction bias.</a> Nat Commun. 6, 6927(2015).</li>
<li>Campbell, J. P., Merkel, A. R., Masood-Campbell, S. K., Elefteriou, F., Sterling, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+bone+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Models of bone metastasis.</a> J Vis Exp. (67), e4260(2012).</li>
<li>Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+TGFbeta+Signaling+in+Mouse+Models+of+Cancer+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Imaging TGFbeta Signaling in Mouse Models of Cancer Metastasis.</a> Methods Mol Biol. 1344, 219-232 (2016).</li>
<li>Jenkins, D. E., Hornig, Y. S., Oei, Y., Dusich, J., Purchio, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+human+breast+cancer+cell+lines+that+permit+rapid+and+sensitive+in+vivo+detection+of+mammary+tumors+and+multiple+metastases+in+immune+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent human breast cancer cell lines that permit rapid and sensitive in vivo detection of mammary tumors and multiple metastases in immune deficient mice.</a> Breast Cancer Res. 7 (4), R444-R454 (2005).</li>
<li>Lawson, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+reveals+a+stem-cell+program+in+human+metastatic+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis reveals a stem-cell program in human metastatic breast cancer cells.</a> Nature. 526 (7571), 131-135 (2015).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Les étapes critiques au sein du protocole: L&#39;utilisation de particules lentiviraux à titre élevé (&gt; 10 8 TU / ml) est une étape critique dans le succès de ce protocole, que permet un contrôle minutieux de la composition des médias pendant la transduction in vitro. Bien que plusieurs méthodes pour la production de particules virales à titre élevé ont été bien décrits 18,19; ce protocole utilise des particules lentiviraux ...

Le développement de xénogreffes dérivées de patients tumorales (PDXs), où des échantillons de tumeurs réséquées chirurgicalement sont greffées directement dans des souris immunodéprimées, offre plusieurs avantages par rapport aux modèles standards de xénogreffes de lignées cellulaires et représente une avancée majeure dans la recherche sur le cancer 1,2. PDXs peuvent être maintenues et développées par des passages successifs avec un minimum de modifications des caractéristiques génétiques et biologiques de la tumeur développée au premier passage; et refléter plus précisément l&#39; hétérogénéité tumorale de xénogreffes dérivées de lignées de cellules cancéreuses humaines 3-8. Ces modèles sont maintenant largement utilisés comme une plate - forme pour la personnalisation thérapeutique du cancer 9,10, comme une plate - forme préclinique dans le développement de médicaments 6,11 et comme un outil expérimental pour l&#39; étude de la biologie du cancer 4,12. La plupart PDXs sont implantés et propagées par voie sous- cutanée, ce qui permet en pratique en mesure de la croissance de la tumeur au fil du temps en utilisant des compas. toutefois, La maladie métastatique a été plus difficile à modéliser en utilisant PDXs. En particulier pour le cancer du sein, des xénogreffes avec une capacité métastatique aux différents organes ont été décrits 3,5,13, mais la fréquence de la dissémination spontanée de sites métastatiques est extrêmement faible. Où signalé, l&#39;identification et la quantification de la charge métastatique repose sur l&#39;examen histologique laborieux des organes cibles post-mortem. des lignées de cellules cancéreuses exprimant bioluminescente (luciférase, de Luc) ou de fluorescence (protéine fluorescente verte, GFP) reporters de gènes sont couramment utilisés dans des modèles expérimentaux de métastases du cancer du sein au cerveau, les poumons, les os et le foie après intracardiaque, la queue veine intrafemoral et l&#39;injection splénique 14-16. Bien que ces modèles contournent la diffusion des tumeurs primaires, ils sont précieux pour étudier les mécanismes de tropisme d&#39;organe et de la colonisation métastatique. Cependant, les cellules dérivées de tumeurs et PDXs patients primaires peuvent avoir une faible transfection ou les taux de transduction using procédures standard. Une alternative consiste à établir des lignées cellulaires dérivées PDX-17 in vitro, qui peut être ensuite marqué en utilisant des protocoles de culture de tissus classiques. Cependant, cette approche ne convient pas à l&#39;étiquetage la plupart des PDXs, pour lequel la lignée cellulaire dérivée est difficile et peut changer le phénotype des cellules. Ici , nous présentons un protocole pour la transduction de cellules tumorales dissociées PDX avec des vecteurs lentiviraux appropriés pour l&#39; imagerie in vivo. En outre, nous décrivons des métastases expérimentales par injection intracardiaque de cellules PDX-luc GFP marquées dissociées dans des souris immunodéprimées. Un protocole de base pour la transduction des organites PDX-dissociées avec lentivirus gène rapporteur exprimant a déjà été décrit 18. Dans le protocole en vigueur, nous décrivons des procédés supplémentaires pour enrichir les cellules tumorales humaines et d&#39;obtenir près de 100% d&#39;efficacité de transduction, ainsi que l&#39;utilisation de PDXs marquées pour détecter le cancer du sein expérimentalmétastases. Ce protocole peut être adapté pour le marquage de plusieurs types de cancer de PDXs avec différents marqueurs luminescents et fluorescents, ainsi que la modulation de l&#39; expression génique ( par exemple, shRNA knock - down de gènes d&#39;intérêt).

<table><tbody><tr><td>DMEM/F12 (1:1)</td><td>Hyclone</td><td>SH30023.01</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>BD Biosciences</td><td>354060</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>BD Biosciences</td><td>354001</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sigma</td><td>H4784</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>17504-44</td><td></td></tr><tr><td>Antifongiques-antibiotiques</td><td>Hyclone</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Accumax</td><td>Innovative Cell Technologies</td><td>AM-105-500</td><td>Tampon</td></tr><tr><td>de digestion FBS</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>HBSS Rouge Ca2+/Mg2+ gratuit</td><td>Hyclone</td><td>SH30031.02</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30258.01</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex</td><td>Cultrex</td><td>3433-005-01</td><td>Extrait de matrice de socle (BME)</td></tr><tr><td>30 &#176 ; Agitateur</td><td>C NewBrunswick Scientific CO. INC</td><td>Series 25 Agitateur d’incubateur</td><td></td></tr><tr><td>70 &#956 ; filtres Falcon</td><td></td><td>7352350</td><td></td></tr><tr><td>scalpels</td><td>Fisher</td><td>22079690</td><td></td></tr><tr><td>Clorhexidine désinfectant</td><td>Durvet&nbsp ;</td><td>NDC# 30798-624-35</td><td></td></tr><tr><td>Réactif de lyse cellulaire pour sang rouge&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>Neuraminidase</td><td>Sigma</td><td>N7885-1UN</td><td></td></tr><tr><td>EpCAM (CD326+)microbilles*</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>130-061-101</td><td></td></tr><tr><td>Kit d’appauvrissement des cellules de lignée, souris*</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>130-090-858</td><td></td></tr><tr><td>Séparateur MiniMACS&nbsp ;</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>Mini MACS Support magnétique</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>Colonnes MS</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>130-042-201</td><td>Les colonnes MS ou LS peuvent être utilisées, ajuster au nombre de cellules.</td></tr><tr><td>Illumatool Système de lumière accordable</td><td>Lightools research</td><td>Divers</td><td>Pour l’imagerie de fluorescence in vivo</td></tr><tr><td>Xenogen IVIS200 dispositif d’imagerie</td><td>Xenogen</td><td>Divers</td><td>Pour l’imagerie de luminiscence in vivo</td></tr><tr><td>Cytokératine humaine Clone MNF116 Anticorps monoclonal</td><td>DAKO</td><td>M0821</td><td>Pan-cytokératine&nbsp ;</td></tr><tr><td>Anticorps récepteur du facteur de croissance épidermique</td><td>Signalisation cellulaire</td><td>4267S</td><td>EGFR</td></tr></tbody></table>

Étiquetage des xénogreffes de patients dérivés cancer du sein avec traçables reporters pour la croissance tumorale et la métastase études

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

L’utilisation de modèles précliniques pour étudier la biologie tumorale et la réponse au traitement est au cœur de la recherche sur le cancer. Les lignées cellulaires humaines établies de longue date et de nombreux modèles de souris transgéniques ne parviennent souvent pas à récapituler les aspects clés des tumeurs malignes humaines. Ainsi, des modèles alternatifs qui représentent mieux l’hétérogénéité des tumeurs des patients et de leurs métastases sont en cours de développement. Les modèles de xénogreffes dérivées de patients (PDX) dans lesquels des échantillons de tumeurs réséqués chirurgicalement sont greffés sur des souris immunodéprimées sont devenus une alternative attrayante car ils peuvent être transplantés sur plusieurs générations et reflètent plus efficacement l’hétérogénéité tumorale que les xénogreffes dérivées de lignées cellulaires cancéreuses humaines. Une limitation à l’utilisation des PDX est qu’ils sont difficiles à transfecter ou à transduire, à introduire des rapporteurs traçables ou à manipuler l’expression des gènes. Le protocole actuel décrit des méthodes pour transduire des cellules tumorales dissociées des PDX avec une efficacité de transduction élevée, et l’utilisation de PDX marqués pour des modèles expérimentaux de métastases du cancer du sein. Le protocole démontre également l’utilisation de PDX marqués dans des modèles expérimentaux de métastases pour étudier le processus de colonisation organique de la cascade métastatique. Les métastases de différents organes peuvent être facilement visualisées et quantifiées à l’aide de l’imagerie bioluminescente chez les animaux vivants, ou de l’expression de la GFP pendant la dissection et dans les organes excisés. Ces méthodes constituent un outil puissant pour étendre l’utilisation de plusieurs types de PDX à la recherche sur les métastases.

Cette méthode décrit la transduction des cellules cancéreuses du sein PDX-dissociées en utilisant un titre élevé vecteurs lentiviraux pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro et phage-EF1aL-luciférase UBC-GFP-W. Ces vecteurs expriment un marqueur fluorescent qui permet d&#39; estimer l&#39;efficacité de la transduction in vitro, aussi tôt que 24 heures après l&#39; infection (figure 1a). Pour la plupart des PDXs, l&#39; expression de GFP sera retardée jusqu&#39;à 72 heures aprè...

Nous décrivons une méthode pour l&#39;étiquetage stable de xénogreffes dérivées de patients (PDXs) avec des particules lentiviraux exprimant la protéine et la luciférase reporters vert fluorescent. Cette méthode permet de suivre la croissance de PDXs au niveau du site primaire, ainsi que la détection des métastases spontanées et expérimentales en utilisant des systèmes d&#39;imagerie in vivo.

Étiquetage des xénogreffes de patients dérivés cancer du sein avec traçables Reporters pour la croissance tumorale et la métastase études

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

L'objectif général de ce protocole de transduction est d'introduire de façon stable des gènes rapporteurs dans des xénogreffes dérivées de patients, ou XDP, afin de faciliter leur utilisation dans des modèles expérimentaux et spontanés de métastases. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés en recherche sur le cancer, telles que l'ampleur des métastases extra-cutanées provenant de xénogreffes dérivées de patients. Le principal avantage de cette technique est que les XDP marqués peuvent être suivis à l'aide d'imagerie in vivo, ce qui facilite l'évaluation de métastases spécifiques et organisées sans recourir à une analyse histologique approfondie post-mortem.La démonstration de ce protocole sera assurée par Jessica Finlay-Schultz, une post-doctorante qui applique couramment ce protocole pour l'étiquetage de xénogreffes dérivées de patientes atteintes d'un cancer du sein. En utilisant une technique aseptique, commencez par découper la peau autour de la tumeur à l’aide d’un scalpel. Ensuite, tirez sur la peau avec une pince et utilisez un scalpel propre pour séparer la peau de la tumeur.Lorsque la tumeur est complètement exposée, utilisez une paire de forceps et un sca

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Diffuse la tomographie par fluorescence offre une approche relativement peu coûteux et potentiellement à haut tout au long de...

Computed Tomography-guidée tomographie diffuse Time-Domain Fluorescence chez les petits animaux pour la localisation de biomarqueurs du cancer

La vidéo suivante décrit une technique de transduction pour marquer (xénogreffes dérivées du patient) des cellules tumorales PDX, qui est utilisée pour introduire in vitro des rapporteurs de lentivirus exprimant la protéine fluorescente verte et la luciférase dans la cellule tumorale.

Transduction pour marquer les cellules tumorales PDX : introduction d’un marqueur fluorescent exprimant un lentivirus dans la cellule tumorale in vitro

Ce manuscrit détaille une méthode utilisée pour générer des xénogreffes dérivées de patients atteints d’un cancer de la prostate (PDX) à partir de cellules tumorales circulantes (CTC). La génération de modèles PDX à partir de CTC fournit un modèle expérimental alternatif pour étudier le cancer de la prostate ; La tumeur la plus fréquemment diagnostiquée et une cause fréquente de décès par cancer chez les hommes.

Génération de cancer de la prostate des patients Dérivé modèles de xénogreffe de cellules tumorales circulantes

Les métastases du cancer de l’ovaire sont caractérisées par de nombreuses lésions intra-péritonéales diffuses, de sorte qu’il est difficile de quantifier visuellement avec précision la charge tumorale.  Nous décrivons ici une méthode de quantification in situ et ex vivo de la charge tumorale métastatique à l’aide de cellules tumorales marquées à la protéine fluorescente rouge (RFP) et de l’imagerie optique.

Quantification du commerce intra-péritonéale Cancer de l&#39;ovaire Métastase

Nous décrivons ici le modèle et l’approche pour étudier les fonctions des macrophages alvéolaires pulmonaires dans les métastases cancéreuses. Pour démontrer le rôle de ces cellules dans les métastases, le modèle syngénique (4T1) du cancer du sein en conjonction avec la déplétion du macrophage alvéolaire avec des liposomes clodronates a été utilisé.

L&#39;étude du rôle des macrophages alvéolaires dans le cancer du sein métastase

Les auteurs décrivent un protocole précliniques in vivo suivi des métastases cancéreuses. Il est issu d’un reporter de radionucléide-fluorescence combinant le sodium iodure symport, détecté par non invasive [18F] tétrafluoroborate-PET et une protéine fluorescente simplifiée ex vivo de confirmation. La méthode est applicable pour précliniques in vivo la cellule de suivi au-delà de biologie tumorale.

Gène rapporteur de radionucléide-fluorescence Imaging pour suivre la Progression tumorale dans les modèles de rongeurs tumeur

Nous présentons ici un protocole pour utiliser injection guidée par ultrason du neuroblastome (NB) et cellules (ES) le sarcome d’Ewing (établi de lignées cellulaires et les cellules tumorales dérivées de patient) aux sites biologiquement pertinentes pour créer des modèles précliniques fiables pour le cancer recherche.

Utilisation des ultrasons guidés axés sur les tissus cellulaire Implantation pour la mise en place de xénogreffes tumorales métastatiques biologiquement pertinente

Ce travail préséque un protocole avancé pour évaluer avec précision la charge tumorale par la détection de protéines fluorescentes vertes et de signaux de bioluminescence ainsi que l’intégration de la technique quantitative de détection moléculaire.

Étudier le cancer du sein triple négatif à l’aide d’un modèle orthotopique de cancer du sein

Ici, nous présentons un protocole pour tester l’efficacité des thérapies ciblées sélectionnées basées sur la composition génomique d’une tumeur. Le protocole décrit l’identification et la validation des réarrangements structurels d’ADN, l’engraftment des tumeurs des patients dans les souris et les réponses d’essai aux drogues correspondantes.

Test de thérapies ciblées dans le cancer à l’aide de l’analyse structurale de l’altération de l’ADN et des Xénogreffes dérivées du patient

Le manuscrit décrit une méthodologie pour l’établissement ainsi que le suivi longitudinal de la croissance des métastases pulmonaires spontanées à partir de tumeurs mammaires injectées orthotopiquement, susceptible d’intervention à tous les stades de la cascade métastatique.

In vivo Imagerie pour mesurer les métastases pulmonaires spontanées de cellules tumorales mammaires injectées orthotopiquement

Ce protocole décrit une méthode efficace et non chirurgicale pour l’implantation orthotopique de xénogreffes dérivées de patientes atteintes d’un cancer du sein chez la souris. La technique implique une dissociation enzymatique de la tumeur suivie d’une injection directe dans les coussinets adipeux mammaires, permettant une implantation à haut débit. Une validation complète garantit la fidélité du modèle, ce qui facilite des études rigoureuses sur divers sous-types de cancer du sein.

Dissociation à haut débit et implantation orthotopique de xénogreffes dérivées de patientes atteintes d’un cancer du sein

Découvrez l'étiquetage stable des xénogreffes dérivées de patients par particules lentivirales avec GFP et luciférase. Cette méthode permet le suivi de la croissance tumorale et la détection des métastases par imagerie in vivo.

Étiquetage des xénogreffes de patients dérivés cancer du sein avec traçables Reporters pour la croissance tumorale et la métastase études (Vidéo) | JoVE Journal

Étiquetage des xénogreffes de patients dérivés cancer du sein avec traçables Reporters pour la croissance tumorale et la métastase études

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