Name: Enregistrement des courants électriques à travers la membrane plasmique des spermatozoïdes de mammifères (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Découvrez la technique de patch-clamp pour enregistrer l'activité des canaux ioniques dans les spermatozoïdes de mammifères. Cette méthode permet d'étudier la physiologie du CatSper et les mécanismes de fertilité masculine.

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<table><tbody><tr><td>IX71 avec optique DIC</td><td>Olympus Inc</td><td>IX71</td><td>Nikon TiU peut également être utilisé</td></tr><tr><td>UplanSApo 60x</td><td>Olympus Inc</td><td></td><td>< objectif d’immersion dans l’eau > < ></td></tr><tr><td>Table d’air amortissante des vibrations</td><td>Newport Inc</td><td></td><td>TMC airtables ou équivalents peuvent être utilisés</td></tr><tr><td>Axopatch et commerce ; Amplificateur 200B</td><td>Axon&commerce ; &nbsp ; /Dispositifs moléculaires</td><td></td><td>Sutter IPA&reg ;/Double IPA&reg ; Le système intégré de clamp patch est également un excellent amplificateur</td></tr><tr><td>Convertisseur analogique vers numérique Axon Digidata</td><td>Axon&commerce ; &nbsp ; /Dispositifs moléculaires</td><td>1440 ou 1550</td><td> peut aussi être utilisé</td></tr><tr><td>Osmomètre à pression de vapeur</td><td>Wescor</td><td>Modèle 5600</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulateur MPC 385</td><td>Sutter Instruments, Novato CA</td><td>MPC 385</td><td>La série de micromanipulateurs TransferMan d’Eppendorf peut également être utilisée</td></tr><tr><td>Extracteur de micropipette</td><td>Sutter Instruments, Novato CA</td><td>P1000</td><td>P97 peut être utilisé</td></tr><tr><td>MicroForge</td><td>Narishige</td><td>MF-830</td><td> doit être équipé d’un objectif Nikon MPlan 100/0.80 ELWD 210/0</td></tr><tr><td>Cage de Faraday</td><td>Faits maison</td><td></td><td><les > protéger l’installation des interférences électriques ambiantes</td></tr><tr><td>&nbsp ; Engourdies de couvercle en verre de 5 mm</td><td>WPI</td><td>&nbsp ;#502040</td><td></td></tr><tr><td>Chambre de perfusion</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>&nbsp ; RC-24E</td><td></td></tr><tr><td>Capilaire en verre borosilicate</td><td>Sutter Instruments, Novato CA</td><td>BF 150-85-7.5</td><td>diamètre extérieur 1,5 mm, diamètre intérieur 0,86 mm et filament interne</td></tr><tr><td>Collecteur en téflon MP-8</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>64-0211</td><td>Téflon à 8 positions de la variété de perfusion</td></tr><tr><td>Plaque Nunc à 4 puits</td><td>Nunc</td><td>#179820</td><td></td></tr><tr><td>1 x tampon HTF</td><td>EmbryoMax</td><td>MR-070-D</td><td>solution de capacité</td></tr><tr><td>SA-Oly/adaptateur à 2 étages</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>pour les plateformes de la saison 20</td><td>< uniquement > microscope Olympus</td></tr><tr><td>Plateforme chauffée magnétique</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>PM-1 ou séries similaires</td><td>< > tenir la chambre RC-24E</td></tr><tr><td>Pince magnétique MAG-1</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>#64-0358</td><td></td></tr><tr><td>Porte-électrodes à microélectrodes avec pellet Ag/AgCl de 2 mm</td><td>WPI</td><td>MEH3F4515</td><td></td></tr><tr><td>Stopcock avec des liens avec Luer ; 4 voies ; Verrouillage mâle</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-30600&ndash ; 09</td><td></td></tr><tr><td>Adaptateur de barbillon pour tuyau Luer femelle, 1/16"</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-45508 & ndash ; 00</td><td></td></tr><tr><td>Tubulure de perfusion en polytétrafluoroéthylène (PTFE)</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-06417&ndash ; 21</td><td> (Tube PTFE micro-alésé, 0,022" ID et horaires ; 0,042" OD)</td></tr><tr><td>Tube de connexion en silicone (tube en silicone durci au platine, 1/32" ID et horaires ; 3/32" OD)</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-95802&ndash ; 01</td><td></td></tr><tr><td>Tube de connecteur de collecteur (tube PTFE, 1/32" ID et horaires ; 1/16" OD)</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-06407&ndash ; 41</td><td></td></tr><tr><td>Adaptateur à barb mâle série Luer, 1/16"</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>45518&ndash ; 00</td><td></td></tr><tr><td>Adaptateur de verrouillage intégré Luer mâle 1/8"</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>45-503-04</td><td></td></tr><tr><td>Tube de connexion en silicone</td><td>Dow Silicone Corporation ; &nbsp ; MI</td><td>#508-008</td><td></td></tr><tr><td>Seringues</td><td>Fisher Scientific ou VWR</td><td>Air-Tite, Norm-Ject Luer</td><td>< > 1 mL, 3 mL et 20 mL</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60216</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4 x 7.H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>63140</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 x 2.H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>21097</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H7523-250G</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>Lactate de sodium (60 % à la semaine)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L7900</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvate de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BCBG2421V</td><td></td></tr><tr><td>CsMeSO3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1426</td><td>Césium méthansulfonate</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BCBF5871V</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Qualité biologique</td><td>315-006-721</td><td>1 solution M de similar</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221465</td><td></td></tr><tr><td>CsOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>232041</td><td></td></tr><tr><td>Milieu tubulaire humain Embryomax :</td><td>Millipore</td><td>MR-070-D</td><td>< milieu > capacitation pour les spermatozoïdes murins</td></tr><tr><td>(Embryomax-HTF)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>< fort>Animaux</fort></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mâles de rats Wistar</td><td>Wistar</td><td>Laboratoires Harlan (Livermore, CA)</td><td>< > rats adultes< ></td></tr><tr><td>Mâles C57BL/6 souris</td><td>C57BL/6 souris</td><td>Laboratoires Harlan (Livermore, CA)</td><td>< > 3-6 mois</td></tr></tbody></table>

enregistrement des courants électriques à travers la membrane plasmique des spermatozoïdes de mammifères

Recording Electrical Currents across the Plasma Membrane of Mammalian Sperm Cells

Enregistrement des courants électriques à travers la membrane plasmique des spermatozoïdes de mammifères

Recording of the electrical activity from one of the smallest cells of a mammalian organism- a sperm cell- has been a challenging task for ...

recording-electrical-currents-across-plasma-membrane-mammalian-sperm

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JoVE Journal

Biology

Biologie

Techniques d&#39;imagerie Ca 2 + Signalisation dans le sperme humain

Mesure intracellulaire de Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Les changements dans le sperme humain à l&#39;aide de quatre techniques: FLUOROMETRIE conventionnel, s&#39;est arrêté Fluorimétrie du flux, la cytométrie en flux et l&#39;imagerie cellulaire unique

Nous avons mis au point une préparation de la moelle du cerveau-moelle intacte pour enregistrer et contrôler l'activité électrique via correctif enregistrement de serrage des neurones et d'autres cellules Mauthner réticulospinales dans embryons de poissons zèbres. Ainsi, nous sommes en mesure d'enregistrer les courants synaptiques excitateurs et inhibiteurs, l'activité des canaux voltage-dépendants et des potentiels d'action des neurones clés dans un embryon en développement.

Patch-clamp enregistrements de cellules embryonnaires de poisson zèbre Mauthner

Nous présentons un protocole qui combine l'isolation cellulaire et l'enregistrement de patch-clamp à cellules entières pour mesurer les propriétés électriques des cellules épithéliales dissociées primaires des épididymides de cauda de rat. Ce protocole permet d'étudier les propriétés fonctionnelles des cellules épithéliales épididymiques primaires afin d'élucider davantage le rôle physiologique de l'épididyme.

Enregistrements de puces et de cellules entières de cellules épithéliales primaires isolées de l&#39;épididyme

Nous présentons ici les méthodes pour évaluer l’intégrité membranaire de spermatozoïde, une fonctionnalité cellulaire associée à compétence de fertilisation de sperme. Nous décrivons trois techniques pour l’évaluation fluorimétrique des membranes des spermatozoïdes : coloration simultanée avec des sondes fluorescentes spécifiques, microscopie à fluorescence et avancé cytométrie dédiés au sperme. Exemples de combiner les méthodes sont également présentés.

Fluorimétrique Techniques pour l’évaluation des Membranes des spermatozoïdes

Ici, deux essais de débit moyen pour l’évaluation des effets sur Ca2 +-réaction de signalisation et de l’acrosome dans le sperme humain sont décrites. Ces tests peuvent servir à l’écran rapidement et facilement de grandes quantités de composés aux effets sur la Ca2 +-réaction de signalisation et de l’acrosome dans le sperme humain.

Moyen-throughput Screening tests pour l’évaluation des effets sur Ca2 +-signalisation et Acrosome Reaction en sperme humain

Nous décrivons l'application d'un analyseur extracellulaire de flux pour surveiller des changements en temps réel dans la glycolyse et la phosphorylation oxydative pendant la capacitation de sperme de souris.

Utilisation d'un analyseur de flux extracellulaire pour mesurer les changements dans la glycolyse et la phosphorylation oxydative pendant la capacitation de sperme de souris

Le modèle murin AcroSensE et les méthodes d’imagerie de cellules vivantes décrits ici offrent une nouvelle approche pour étudier la dynamique du calcium dans le compartiment subcellulaire de l’acrosome des spermatozoïdes et comment ils régulent les étapes intermédiaires menant à la fusion membranaire et à l’exocytose de l’acrosome.

Imagerie en temps réel de la dynamique acrosomique du calcium et de l’exocytose dans les spermatozoïdes de souris vivants

Champ électrique externe induit une tension sur la membrane d'une cellule, appelée tension de membrane induite (ΔΦ). En utilisant le colorant potentiométrique di-8-ANEPPS, il est possible de mesurer la ΔΦ non invasive. Cette vidéo montre le protocole de mesure de ΔΦ utilisant di-8-ANEPPS.

Mesurer la tension de membrane induite avec Di-8-ANEPPS

Ce protocole décrit une technique rapide pour quantifier la translocation de GLUT4 du cytoplasme vers la membrane plasmique des cellules par cytométrie en flux.

Mesure quantitative de GLUT4 Translocation à la membrane plasmique par cytométrie en flux

Découvrez la technique de patch-clamp pour enregistrer l'activité des canaux ioniques dans les spermatozoïdes de mammifères. Cette méthode permet d'étudier la physiologie du CatSper et les mécanismes de fertilité masculine.

Enregistrement des courants électriques à travers la membrane plasmique des spermatozoïdes de mammifères

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