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JoVE Journal Biology
Combining 3D Magnetic Force Actuator and Multi-Functional Fluorescence Imaging to Study Nucleus Mechanobiology

Combinaison d’un actionneur de force magnétique 3D et d’une imagerie par fluorescence multifonctionnelle pour étudier la mécanobiologie du noyau

Full Text
2,813 Views
06:54 min
July 5, 2022

DOI: 10.3791/64098-v

Miao Huang1,5, Heyang Wang1,5, Alfredo A. Delgado1, Tyler A. Reid1, Julian Long2, Shu Wang3,5, Hayley Sussman4, Juan Guan5,6,7, Hitomi Yamaguchi1, Xin Tang1,5,8,9

1Department of Mechanical and Aerospace Engineering, Herbert Wertheim College of Engineering,University of Florida, 2Department of Materials Science and Engineering,University of Florida, 3Department of Biostatistics,University of Florida, 4Department of Biomedical Engineering, College of Engineering (COE),University of Delaware (UD), 5UF Health Cancer Center,University of Florida, 6Department of Physics, College of Liberal Arts and Sciences,University of Florida, 7Department of Anatomy and Cell Biology, College of Medicine,University of Florida, 8J. Crayton Pruitt Family Department of Biomedical Engineering,University of Florida, 9Department of Physiology and Functional Genomics,University of Florida

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study explores a new protocol for applying mechanical force directly to the cell nucleus using magnetic microbeads within living cells, while enabling live-cell fluorescent imaging. This technique reveals insights into nuclear mechanosensing mechanisms, functioning without disrupting cellular processes.

Key Study Components

Research Area

  • Cell biology
  • Mechanobiology
  • Imaging techniques

Background

  • Understanding nuclear mechanosensing is crucial for cellular function.
  • Existing techniques like optical tweezers are invasive and less efficient.
  • Magnetic microbeads offer a non-invasive method to study these mechanisms.

Methods Used

  • Application of mechanical force using magnetic microbeads.
  • Live-cell imaging with confocal fluorescence microscopy.
  • Quantitative imaging analysis to measure force-induced nuclear deformation.

Main Results

  • Force application from microbeads led to nuclear deformation and YES-associated protein translocation.
  • No significant differences in nuclear circularity between control cells and those with microbead internalization.
  • The study confirms that magnetic force influences nuclear mechanotransduction pathways.

Conclusions

  • This protocol advances the understanding of nuclear mechanosensing.
  • It offers a non-invasive approach for investigating cellular mechanics and signaling pathways.

Frequently Asked Questions

What is the primary objective of this study?
To investigate the effect of mechanical force on the cell nucleus using magnetic microbeads.
How does this method compare to optical tweezers?
It is non-invasive and offers higher throughput.
What types of cells were used in this study?
B2B cells were cultured for the experiments.
What imaging technique was utilized?
Confocal fluorescence microscopy was employed for live-cell imaging.
What were the findings related to YES-associated protein?
The study observed translocation of YES-associated protein in response to mechanical force applied.
Can this technique be applied to other cell types?
Yes, the protocol can be adapted for various cell types for mechanobiology studies.
What is the significance of nuclear mechanosensing?
Nuclear mechanosensing plays a critical role in regulating cell function and response to mechanical stimuli.

Cette étude présente un nouveau protocole pour appliquer directement une force mécanique sur le noyau cellulaire par le biais de microbilles magnétiques livrées dans le cytoplasme et pour effectuer simultanément l’imagerie fluorescente de cellules vivantes.

Dans cette méthode, la force est directement appliquée au noyau. Cela découple l’effet de transmission de force de la membrane plasmique cellulaire et du cytosquelette, révélant les mécanismes moléculaires de la mécanodétection nucléaire. La force est appliquée dans les cellules vivantes de manière non invasive.

Par rapport aux pinces optiques, le champ magnétique et la force magnétique n’affectent pas les fonctions de la cellule et ont un débit plus élevé. Commencez à cultiver les cellules avec des microbilles magnétiques en pesant 0,2 gramme de microbilles de fer carbonyle ayant sept micromètres de diamètre moyen. Suspendre les microbilles dans un milieu de culture RPMI 1640 d’un millilitre à l’aide d’une pipette.

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Biologie numéro 185 Mécanobiologie du noyau force magnétique CRISPR/Cas9 mécanotransduction matière active molle protéine associée oui (YAP) imagerie fonctionnelle fluorescente traitement d’imagerie numérique optogénétique épigénétique

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